一种适合骨髓瘤、杂交瘤细胞生长的无血清培养基

在基础培养液 DME/F12(1:1)中加入10μg/ml 转铁蛋白(T),5μg/ml 胰岛.素(Ⅰ),10μmol/L 乙醇胺(E),10^-9mol/L 亚硒酸钠(S)及1mg/ml 牛血清白蛋白(BSA)等诸种添加剂成分而构成了本试验的无血清培养基,定名为 LDSF.试验表明,LDSF 可取代常规培养基 DMEM(含10—15%胎牛血清),用于骨髓瘤、杂交瘤细胞的长期传代培养,支持杂交瘤细胞稳定、持续地分泌特异单克隆抗体(McAb),并可用于细胞融合、冻存和复苏.     

简易的杂交瘤细胞载体培养

通常杂交瘤细胞是悬浮培养在扁瓶或搅拌瓶中,其培养的细胞浓度和抗体的产量都不高。大量生产单克隆抗体则要依靠各种细胞培养器、中空纤维、微胶囊、固定化细胞和连续灌注等系统,但这些系统设计复杂,技术要求高,价格昂贵,效果不一。最近Wang G等人采用园片状聚脂载体(Fibra-     

无牛血清IgG细胞培养基（—GFCS培养基）的制备及其在杂交瘤细胞体外培养中的应用

为了制备不含牛血清IgG的细胞培养基（－GFCS培养基）,并研究其在杂交瘤细胞体外培养中的应用,采用蛋白G亲和层析的方法,将含有血清的细胞培养基中的牛血清IgG去除,以制备无IgG的培养基。使用该培养基体外培养杂交瘤细胞后,监测细胞生长和上清抗体浓度。对培养上清中的IgG类单克隆抗体可以采用蛋白G亲和层析进行纯化。与示去除牛血清IgG的培养基相比,－GFCS培养基培养的杂交瘤细胞的生长状况及上清抗体浓度均无明显变化;从－GFCS培养上清中成功纯化出不被血清IgG污染的IgG类单克隆抗体,本文结果表明,采用－GFCS培养基体外培养分泌IgG类单抗的杂交瘤细胞,可以简化上清抗体的纯化工艺。     

乙醇诱导杂交瘤细胞凋亡的检测

为建立杂交瘤细胞凋亡检测模型,在乙醇诱导下,采用荧光染色、MTT等方法检测H18杂交瘤细胞凋亡时的形态学及增殖活性变化,并用流式细胞仪对其进行定量分析,夹心ELISA检测IgG抗体分泌的变化情况。结果发现5lOmmol／L乙醇作用5～6h的凋亡诱导效果最为明显,在诱导条件下,杂交瘤细胞的活细胞数显著下降,凋亡细胞比例较高。抗体浓度明显下降,与乙醇浓度呈负相关,但与细胞增殖活性无明显的线性关系。故以此为凋亡检测模型,可为后续抗凋亡细胞株的建立与筛选研究提供初步的实验基础,并为乙醇对IgG型抗体分泌的影响研究提供了可能的实验模型。     

无血清细胞培养基及其主要补充因子

无血清细胞培养作为一门现代生物技术,近十年来发展很快。它不仅为细胞的生长、增殖和分化的调节和机制的研究提供了有力的工具,而且为现代生物技术科学如蛋白质工程、细胞工程和单克隆抗体等的应用奠定了基础。本文概括叙述了无血清细胞培养的历史、培养基的组成和主要补充因子,并例举了若干近期报道的无血清细胞培养的例子。     

Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基的设计

目的：设计适用于Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基。方法：以商品化的DMEM／F12合成培养基为基础培养基,应用Plackett—Burman实验设计和响应面分析法设计支持Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基。结果：以细胞密度为评价指标,在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman实验设计考察10种培养基添加成分对Vero细胞生长的影响,确定了3种对Vero细胞生长起明显促进作用的培养基添加成分,为胰岛素、血清素和腐胺。继而利用响应面法分析了这3种添加成分的最佳水平范围,设计了一种支持Vero细胞贴附培养的无血清培养基（VERO—SFM—A）。在Bellco搅拌式培养瓶中采用VERO-SFM．A和Cytodex1微载体培养Vero细胞,细胞密度由接种时的4×10^5cells／ml增加到培养6d后的22．3×10^cells／ml,细胞活力保持在96％以上。结论：VERO—SFM—A能够有效地支持Vero细胞在微载体表面固定化生长并达到较高的细胞密度,具有实际应用于Vero细胞微载体规模化培养的应用潜力。     

动物细胞无血清培养基的应用及研究进展

使用无血清培养基除了避免生产批间差异、不利于目的蛋白的分离纯化和产业化时难以建立SOP以外;优化的无血清培养基可通过延长细胞的G1期或迫使细胞处于G0期而使较长时间地维持细胞高密度培养,高效地生产目的产物;还可以避免衰老死亡细胞释放的蛋白酶降解目的产物。应用CHO细胞无血清悬浮培养技术,使活细胞密度达到1×107cell/m1水平以上,与传统的批式培养相比产物浓度提高5—10倍,相对应的培养基成本明显下降。     

杂交瘤单克隆抗体研制中细胞的冻存与复苏

细胞的冻存与复苏是杂交瘤单克隆抗体(MCAb)研制中的一个重要环节.如果这个问题不解决,不但融合得不到成功,而且得到有价值的杂交瘤也会丧失掉.一、细胞的冻存在液氮中冷冻是保存杂交瘤细胞(或骨髓瘤细胞)最好的方法.在MCAb的研制中,一旦测得较有价值的阳性孔,就要一面进行克隆化,一面扩大培养,并冻存起来,以防体     

Vero细胞无血清培养基的研究进展

Vero细胞是世界卫生组织和《中国药典》认可的用于人用疫苗和动物疫苗生产的细胞系,Vero细胞无血清培养生产疫苗已成为当前的主要趋势。无血清培养的关键是设计符合Vero细胞贴壁特性和提高细胞密度的无血清培养基,这也是规模化培养的关键因素之一。Vero细胞无血清培养基的开发与使用一方面减少了对动物血清的依赖,提高了病毒性疫苗的质量安全;另一方面促进了无血清培养技术的发展与应用。现就Vero细胞无血清培养基的研究进展予以综述。     

杂交瘤细胞的大量培养

杂交瘤细胞的大量培养是一项迅速发展的技术。本文评述了杂交瘤细胞培养条件和代谢调控方面的研究进展,包括反应器培养中的过程参数优化、细胞损伤和保护、营养物质利用和有害副产物的形成、细胞生长和单抗分泌的动力学以及长期培养的稳定性等问题。同时,本文也讨论了在生物反应器中培养杂交瘤细胞和操作模式和控制策略的研究工作,特别是近年来备受重视的灌注培养和补料培养。     

细胞电融合法生产杂交瘤

细胞电融合过程包括使用交流电场使悬浮在缓冲液中的细胞排列成串,然后高压脉冲电流作用使细胞膜发生瞬时破裂,相邻细胞的细胞膜融合,继续受交流电场作用完成细胞融合。已经证明细胞电融合技术可用于杂交瘤生产,单克隆抗体生产以及细胞表面标记物细胞间的传递过程。     

一种改进的杂交瘤细胞电融合方法

一种改进的杂交瘤细胞电融合方法邹翔（南京大学医学院南京２１０００８）刘琴芝,裴红英,郁文芳,安节,陈伯权（中国预防医学科学院病毒学研究所北京１０００５２）陈刚,赵南明（清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京１０００８４）我们对国...     

搅拌生物反应器中杂交瘤细胞生长与破损的初步研究

采用连续悬浮培养技术,在３种培养基组成下实验考察了生物反应器中机械搅拌强度和气泡对细胞生长和破损或伤害的作用,发现杂交瘤细胞在无血清培养基中培养时,１２０ｒ／ｍｉｎ的机械搅拌强度对细胞产生了生理伤害作用,而造成细胞破损的主要是气泡。血清和ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８对细胞均有保护作用,它们的存在能保护细胞免受流体剪切的生理伤害作用,适应更高的机械搅拌强度,ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８能有效地防止气泡对细胞的破损作用。另外,对它的保护作用机理也作了讨论。     

昆虫细胞无血清培养基的研究进展

昆虫细胞无血清培养基的研究进展余泽华,刘冬连,陈曲侯（华中师范大学昆虫学研究所）自Ｇｒａｃｅ（１９６）首次建立天蚕蛾（Ａｎｔｈｅｒ－ａｅａｅｕｃａｌｙｐｔｉ）的四个细胞系以来［１］,昆虫组织培养技术获得了极大的发展。离体培养的细胞为研究昆虫病原物,病原物的增殖,以及利用这些病原物作为杀虫剂提供了理想的体系。