化工上的应用

知1395利用一种假丝醉母的游离和固定化脂酶通过与甘油三乙酸脂的醋交换化拆开D工一薄荷醉庚】/Lokotsch,W一11APPI.Microbiol.Biotechnol一1989,31(5/6)一467一472[译自CBA,1989,(11),4878】 用ca月d翻阮cyU九d护aceu的游离和固定化脂酶,并以甘油三乙酸酸作酸基给体,在异辛烷中的酪交换作用,是D,L一薄荷醇外消旋拆解的有效方法.同乙酸作酸基供体的醋合成相比,这个高度立体选择型反应不产生水.甘油三乙酸醋的浓度若高于10 mmol/l,醋交换作用会受抑制,使用甘油二乙酸酸更是如此.产物乙酸甲醋 一103一没有影响.加水会便脂醉几活性明显降…     

食品上的应用

924601核黄素杂文生产菌的典型代谢产物对培并物生长和维生素生成的影响「俄〕/Akimova,0.L.…厂Biotekhnologiya一1992,i一49~52〔译自DBA,1992,11(11),92一06325〕 利用核黄素杂交生产菌株枯草杆菌24(质粒pMX45)研究了不同的代谢产物(双乙酷、乙偶姻、丁二醇)对微生物生产核黄素的影响。在发酵终了时用气相色谱法检测双乙酞、乙偶姻、2,3一丁二醇、乙酸乳酸和乙酸。这些化合物对生长和核黄素生产的作用相似。双乙酞对核黄素生物合成的毒性阖值为。.029/l,乙偶姻和2,3一丁二醇的相应值分别为2和159/l。当指数生长期开始时往培养物中加…     

质粒研究与载体构建

920009构睡能在AmyeolatoPsis mediterranei中盆御的杂交质较〔英〕/Lal,R.…/ApPI.Environ.Mierobiol一2991,57(3)一665~671[译自DBA,1991,10(9),91一94832〕 从A.仍e“‘e,,“。e‘DSM43387中分离到质粒pA387(29.6kb)。经原生质体化、澳乙咤或热处理可低频消除该质粒。该质粒属游离型,不整合到染色体中。将一个5.Ikb的pA38了片段擂人大肠杆菌载体质粒pDM10中,构建成杂交质粒pRLI。该质粒可被电激转化至A.仍。J“e,,a。。云及A。o,亏e:‘a乙妞s中。对前者,用i2.skV/em、10。6也sec条件,转化频率为22。。/拼9 DNA;对后者,用7.s…     

五味子乙素联合紫杉醇对非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化的作用

[目的]探讨五味子乙素联合紫杉醇是否通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化。[方法]选择人肺癌A549细胞,设PBS对照组、紫杉醇、五味子乙素、紫杉醇+五味子乙素组、紫杉醇+五味子乙素+PI3K抑制剂LY294002组。采用CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;免疫荧光染色检测N-cadherin、Vimentin分布;qRT-PCR检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug mRNA表达;Western Blotting检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。[结果]与PBS对照组比较,紫杉醇+五味子乙素组细胞增殖率明显降低、细胞凋亡率明显增加(P<0.05),E-Cadherin mRNA和蛋白表达量明显增加,N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug mRNA和蛋白表达量明显降低(P&l...     

由一则生物学试题所想到的

[例题]甲、乙、丙、丁四人同行,甲因车祸需要输血。医生用B型标准血清检验四人血液,只有甲、乙的红细胞发生了凝集反应。通过检验,只有丁能为甲输血。那么乙的血型应是…………………………………………( ) 供选答案:A.O型 B.A型 C.AB型D.B型     

固氮作用

881112固氮兰藻突变株对氨基酸的光合成[英〕/Ker})y,N.W.…了Appl.Mierobiol.B ioteChnol一1987,25(6)一5寸7一552〔译自CBA,1987,(6),2626〕 已分离到对6一氟色氨酸或乙硫氨酸具抗性的固氮兰藻多变鱼腥藻(A淞6ae邢姐r‘a-bilis)突变株。这种藻的许多株系在无6-氟色氨酸或乙硫氨酸时,能将氨基酸释放人培养基中。突变株的固氮酶活性高于其亲本。_将突变株周定于藻酸钙上,可持续光形成氨基酸。(戴顺志)88飞飞1巴花生根瘤菌NC92菌株共生突变株的分离和鉴定:结瘤与固氮寄主专一性缺失、突变株〔英〕Wilson,K.J.…了J.B“cte-r 1 01一工…     

动物遗传工程

924596用吸岭界素N一乙酸转移蔺(P AC)作为转基因动物中新的报道甚因〔英〕/Lah。:,E .G.“·,Nu-e leie Aeids Researeh。一1991,19(12)。一3465[译自ANI,1992,4(7),3321〕 PAC通过使嚷吟霉素酪氨酸部分的氨基乙酸化,可使嚷吟霉素失活。将白黑链霉菌pac基因与子宫珠蛋白5产侧区部分和SV40多聚腺普化信号一起导入小鼠。PAC在转基因小鼠子宫中表达,但不在家畜或家禽中表达。(朱遐)924587爪幼成体和招蚌专性珠蛋白基因在转基因小砚中的表达〔英〕/Dillon,N.…/Nueleie Aeids Re-seareh一1901,i。(22)一6227~6230〔译白ANI,1992,4(…     

猪B_1色氨酸去五肽胰岛素的制备及性质

本文采用甲基磺酰乙氧羰酰基(MSC)作为酸稳定性氨基可逆保护基,在二甲亚砜溶剂中与去五肽胰岛素(DPI)氨基选择性反应。经Sp-Sephadex C-25纯化得[MSC]~(?),单取代去五肽胰岛素。再经Edman 降解制得[MSC]~(?)desB_1DPI。作为半合成起始物与甲基磺酰乙氧羰酰色氨酸对硝基苯酯(Msc·Trp·ONP)在N-乙基吗啉存在下,在二甲亚砜溶液中进行缩合。缩合产物经Sp-Sephadex C-25分离,所得[MSC]_2Trp~(B_1)DPI 在0℃下以二氧六环∶甲醇∶水∶2N氢氧化钠(3∶0.5∶3.5∶1,V/V)混合溶剂脱保护。脱保护产物经Sephadex G-50纯化,制得[Trp]~(B_1)DPI。氨基酸组成和紫外吸收光谱分析,证实产物是[Trp]~(B_1)DPI。[Trp]~(B_1)DPI 经肝膜胰岛素受体结合活力分析,其受体结合活力为胰岛素的26%.     

应用合成生物学策略构建全细胞生物催化剂合成(S)-乙偶姻

目的:在大肠杆菌宿主中过量表达丁二酮还原酶(DAR),同时构建辅酶NADH原位再生系统,利用全细胞高效催化丁二酮不对称还原合成(S)-乙偶姻。方法:PCR克隆多黏芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) dar基因连到质粒pETDuet-1,转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),构建重组菌E. coli BL21(DE3)-DAR;通过Hi Trap TALON柱亲和层析纯化表达产物DAR酶蛋白,测定DAR的比酶活和分子动力学参数。在重组菌E. coli BL21(DE3)-DAR中构建辅酶NADH原位再生系统,协同表达枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脱氢酶(GDH),构建重组菌E. coli BL21(DE3)-DAR/GDH,并以此重组菌为全细胞生物催化剂,优化催化条件,提高(S)-乙偶姻的产量和产率。结果:获得重组工程菌E. coli BL21(DE3)-DAR和E. coli BL21(DE3)-DAR/GDH。DAR以NADH为辅酶还原丁二酮的米氏常数Km、最大催化速率Vmax、催化常数Kcat分别为2. 59mmol/L、1. 64μmol/(L·min·mg)、12. 3/s,还原丁二酮生成(S)-乙偶姻光学的纯度为95. 86%,具有较好的催化效率和立体异构体选择性。构建辅酶NADH原位再生系统后,重组菌E. coli BL21(DE3)-DAR/GDH可高效催化丁二酮合成乙偶姻。在最优催化条件下分批补料,乙偶姻产量达51. 26g/L,转化率为81. 37%,生产速率为5. 13g/(L·h)。结论:使用非手性化合物原料丁二酮生产高附加值的手性化合物(S)-乙偶姻,以重组菌为全细胞生物催化剂合成(S)-乙偶姻,不需额外添加昂贵的辅酶,具有较高的生产应用价值。     

延胡索乙素旋光异构体和四氢小蘗碱对脊髓活动的影响

1.给小白鼠预先腹腔注射乙素旋光异构体、四氢小蘖碱各40毫克/公斤,均能协同阈剂量1.0—1.2毫克/公斤士的宁的惊厥。将士的宁降为阈下剂量(0.8毫克/公斤),上述药物增大剂量到80或180毫克/公斤,剂量越大,协同士的宁惊厥作用则越明显。因此,设想它们的中枢抑制作用与协同士的宁惊厥的关系是较复杂。2.用脊猫试验时,刺激腓神经,记录胫前肌的反射活动,分别静脉注射消旋乙素30—40毫克/公斤、左旋乙素15—40毫克/公斤后,反射活动受到抑制,等剂量的右旋乙素或四氢小蘖碱无明显的抑制作用。消旋乙素常常有短时的兴奋现象,右旋乙素也有之。3.在脊猫的腹根记录反射放电时,静脉注射药物40毫克/公斤,观察到左旋乙素均抑制单、多突触放电活动;而右旋体仅有短时兴奋,增强单突触反射放电。消旋乙素先有短时兴奋,随之有抑制现象。四氢小蘗碱的作用不明显。本文资料说明,消旋乙素对脊髓活动的作用,包括了右旋体的短时兴奋和左旋体的中枢抑制作用。但应该指出,左旋乙素对脊髓水平的抑制作用,不及对脊髓以上脑部位为强。     

基因诱变、重组、克隆

920441Re几公bac‘e,‘。。saloo丽,a,u二DNA片段的克隆〔英〕/Etehegaray,J.P.…f FEMSMierobiol.Lett。一1991,79(i)一61~64〔译自DBA,1991,10(10),91一05433〕 构建了Ren畜baete于云拙仍召al仍on坛砚ar饥重组基因库,以分离用于检测大马哈鱼肾致病菌基因序列的探针DNA。消除与Sau 3A限制酶切的杀缝气单胞菌(Aeromo.as吕al仍0.‘e云‘a)ATCC33658、Ye,s玄介‘ar留e无er云ATCC29473、Y。了比劣:e八、小肠结肠炎耶尔一森氏菌(Y。e耐e,。-co乙“‘ca)、弗氏志贺氏菌(召h名gella fle劣:e-,云)、伤寒沙门氏菌(Ba乙mooe乙王a切尹而…     

地衣芽胞杆菌乙醛酸循环对聚谷氨酸合成的影响北大核心

[目的]了解乙醛酸循环在地衣芽胞杆菌WX-02生物合成聚谷氨酸中作用,为聚谷氨酸生产提供新的解决方法。[方法]采用基因工程手段,以地衣芽胞杆菌WX-02为原始菌株,分别增强表达和敲除异柠檬酸裂解酶ace A基因,检测发酵过程中聚谷氨酸产量、生物量、胞内外代谢物和相关基因转录量。[结果]增强表达异柠檬酸裂解酶ace A基因后,胞内谷氨酸浓度显著升高(483.42 ng/m L/Log(CFU)),溢流代谢产物减少(乙酸5.41 g/L、乙偶姻5.82 g/L、2,3-丁二醇7.31 g/L),聚谷氨酸生物合成产量为11.74 g/L,相比原始菌株提高15%。谷氨酸脱氢酶roc G基因、谷氨酸消旋酶glr基因和聚谷氨酸合成酶复合体中pgs B基因转录水平相对原始菌株分别提高1.61倍、1.32倍和1.24倍。[结论]增强乙醛酸循环可以降低地衣芽胞杆菌WX-02乙酸等溢流代谢产物合成,提高胞内谷氨酸合成能力,并上调聚谷氨酸合成酶基因转录水平,最终提高聚谷氨酸生物合成产量。     

地衣芽胞杆菌乙醛酸循环对聚谷氨酸合成的影响

[目的]了解乙醛酸循环在地衣芽胞杆菌WX-02生物合成聚谷氨酸中作用,为聚谷氨酸生产提供新的解决方法。[方法]采用基因工程手段,以地衣芽胞杆菌WX-02为原始菌株,分别增强表达和敲除异柠檬酸裂解酶ace A基因,检测发酵过程中聚谷氨酸产量、生物量、胞内外代谢物和相关基因转录量。[结果]增强表达异柠檬酸裂解酶ace A基因后,胞内谷氨酸浓度显著升高(483.42 ng/m L/Log(CFU)),溢流代谢产物减少(乙酸5.41 g/L、乙偶姻5.82 g/L、2,3-丁二醇7.31 g/L),聚谷氨酸生物合成产量为11.74 g/L,相比原始菌株提高15%。谷氨酸脱氢酶roc G基因、谷氨酸消旋酶glr基因和聚谷氨酸合成酶复合体中pgs B基因转录水平相对原始菌株分别提高1.61倍、1.32倍和1.24倍。[结论]增强乙醛酸循环可以降低地衣芽胞杆菌WX-02乙酸等溢流代谢产物合成,提高胞内谷氨酸合成能力,并上调聚谷氨酸合成酶基因转录水平,最终提高聚谷氨酸生物合成产量。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵生产乙偶姻的pH调控策略

【目的】为了提高Bacillus subtilis CCTCC M 208157发酵生产乙偶姻的效率。【方法】在7 L发酵罐水平上考察不同pH条件对菌株生长及乙偶姻合成的影响。【结果】pH对菌株合成乙偶姻有显著影响,pH 4.5有利于细胞合成乙偶姻,但是延迟期较长;pH 5.5时菌株生长较快,但乙偶姻的产量偏低。因此提出了两阶段pH控制策略:发酵前期(0 16 h),控制pH 5.5;发酵中后期(16 72 h),控制pH 4.5。【结论】通过此策略,菌株合成乙偶姻的能力得到进一步提高,乙偶姻的产量、产率和生产强度分别为32.7 g/L、0.41 g/g和0.91 g/(L.h),分别比初始发酵条件下提高了41%、42%和69%。     

食品上的应用

9 131077 . ‘.■"乳酸克●维酵母细胞渗透用于乳清糖化[英I/S~so,M.I.G.…/Biotechn01.Tech—l驰2,j§(4).-289,~,292[译囟DBA,1992,11’n丁y‘:{92一09820J ’’, ’研究了不同的乳糖渗透处.理方法E300A’异丙醇,40％叔丁醇’70％乙醇,96 t 4乙酶l甲苯,或0.1％十二烷基磺酸钠+12％氯仿,于25℃振荡3 min,0.1％毛地黄皂苷在0.1M磷酸盐缓伸注0(pH 7)中于25℃作用80.min)‘0,1％海化:中宙烷基三甲基铵在0.IMljI酸盐凌冲液t(pHf)中予4℃作用5rain,同上于25℃作用15rain,’或热休克黼酸克鲁缎酵母(Kluyveromyces lactis)NI~RL Y-1140…     

淋巴因子和干扰素

下.习三月甲t二l乙习勺~L罕,wa,T一了0181524.PubEuropean Patent:央J/口nsa一 Appl.EP.21.05.86.APPI.JP.218643/吕4,1主led 1 9.10.84〔译自CBA,1986, (8),3121〕 经钥孔蛾血蓝蛋白处理人T细胞,所得T细胞的杂交瘤产生一种新的淋巴因子。这种淋巴因子没有干扰素或白细胞间素一     

农药

852417单蜡素(m。noeerin)的生物合成〔英J/Scott,F.E.…1 J.Chem.Soe.Che-m .Commun一1984,12一756一758〔译自DBA,1984,3(19),84一09184〕 向培养的Drechslera rave”el公掺入“H、,‘C和‘“O标记的醋酸盐研究除芬剂单蜡素 (1)的生物合成。用碳核磁共振(CMR)和质子核磁共振(PMR)分析的富化代谢物表明,酷酸盐的掺人是高效率的。(1)的结构显示它是多聚乙酞的起源,掺入研究确定是一种heptaketide的起源。已经提出一种融合糠苯并咄喃酮(furobenzopyrone)系统的一种方法。并且得到了在多聚乙酞的生物合成中还原和脱氧合成过程的较重…     

一株川贝母内生真菌的分离鉴定及其产贝母类生物碱分析

本文利用组织匀浆法从川贝母鳞茎中分离出一株内生真菌CBY4,采用形态学和分子生物学方法,该菌株被鉴定为Fusarium tricinctum。采用生物碱显色沉淀反应,高效液相色谱-蒸发光检测器(HPLC-ELSD)色谱法和超高效液相色谱-质谱仪(UPLC-MS)色谱法对其产贝母生物碱特征进行分析,结果显示F.tricinctum CBY4能够产生贝母类生物碱贝母辛和贝母素乙。同时利用HPLC-ELSD测定目标生物碱在发酵液中的产量,其分别为0.020 6 mg/L和0.010 4 mg/L。本文首次报道川贝母内生真菌产生物碱特性,该研究表明内生真F.tricinctum CBY4通过液体发酵能够产生贝母辛和贝母素乙,并且具有利用生物发酵技术生产贝母辛和贝母素乙的潜在利用价值。     

基因库构建

920920分枝杆菌中的播人诱变和异常盆组〔英〕/Kalp-ana,G.V.一了Proe.Natl.Aead.Sei一U.S.A厂1991,88(12)。一5433~5437[译自DBA,1991,10(17),91一09668〕 用质粒pYUB36构建了耻垢分枝杆菌(对了卜o乙act。,艺u二‘拼eg必at云夕)基因组DNA文库。采用转座子Tnsseql,在大肠杆菌中克隆的分枝杆菌 DNA内制备了随机插入产物。含转座子的重组质 粒经同源重组被重新引入到分枝杆菌染色体中。以 此分离到几个随机营养缺陷株。为了将此方法延用 到结核分枝杆菌(M.tubec:105艺s)和BCG中, 将克隆的BCG甲硫氨酸基因在大肠杆菌接受Tns seql…     

乙基多杀菌素和印楝素对西花蓟马生长发育及繁殖的亚致死效应

为探讨乙基多杀菌素和印楝素对西花蓟马的亚致死效应,采用浸叶法确定了它们对西花蓟马2龄若虫的亚致死浓度(LC₂₅),并研究了该浓度下两种生物源农药对西花蓟马生长发育和繁殖力的影响.结果表明: 两种生物源农药亚致死浓度处理对西花蓟马均有不同程度的影响.在两性生殖方式下,乙基多杀菌素对西花蓟马产卵前期、雌成虫寿命和产卵量均无显著影响,但雄成虫寿命显著缩短;印楝素处理后,西花蓟马产卵量显著降低,产卵前期明显延长.在孤雌生殖方式下,不论乙基多杀菌素和印楝素处理,西花蓟马产卵前期均明显延长,但只有印楝素使雌成虫寿命缩短和产卵量显著降低.两种生物源农药对西花蓟马次代各虫态的发育历期影响不同,无论在何种生殖方式下,乙基多杀菌素处理后西花蓟马的未成熟期均明显短于印楝素处理.乙基多杀菌素处理后西花蓟马的内禀增长率(r_m)和周限增长率(λ)均高于对照,而印楝素较对照低.以上结果说明,两种杀虫剂对西花蓟马生长发育和繁殖影响不同,乙基多杀菌素亚致死浓度对西花蓟马种群的增长有一定的刺激作用,而印楝素有明显的抑制作用.两种杀虫剂的影响程度还与西花蓟马的生殖方式有关.