丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌内的表达及应用

将从中国丙肝病人血清中扩增克隆的丙型肝炎病毒核心蛋白基因（４０８ｂｐ）酶切处理后插入表达载体ｐＪＬＡ５０２内,获得高表达核心蛋白的重组工程菌。将重组菌经４２℃热诱导５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,表达的核心蛋白占菌体蛋白总量的２０％。经分子筛和吸附层析纯化后获得的核心蛋白,ＥＬＩＳＡ检测证实有较好的抗原性和特异性。用表达的核心抗原加用表达的ＮＳ＿３抗原（Ｃ＿３３）装配的抗－ＨＣＶ试剂盒,经用标准血清验证及与国外第二代抗－ＨＣＶ试剂盒比较,证实符合丙肝诊断试剂要求。     

用DNA重组法表达丙肝病毒部分NS_4-NS_5基因

用ＤＮＡ重组法表达丙肝病毒部分ＮＳ_４－ＮＳ_５基因祁自柏,谷金莲,李河民（中国药品生物制品检定所,北京１０００５０）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种ＲＮＡ病毒,为研究其复制机理,制备检测丙肝抗体的诊断试剂,需大量纯化的各种丙肝病毒蛋白,我们在国内首次用Ｄ...     

丙肝病毒IgM抗体检测方法的初步研究

选择东燃公司的重组结构区和非结构区抗原建立的抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检测方法,简便、快速、特异性强、重复性好、敏感性高。只在丙肝病人组检出而健康献血员均为阴性,与抗ＨＡＶ、ＨＢＶ的ＩｇＭ抗体无交叉反应,且排除了ＲＦ干扰和ＩｇＧ占位引起的假阳性和假阴性,适用于抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的临床检测。对２４例丙肝病人的抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检测结果显示,急性丙肝病人血清抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检出率较高（７５％,６／８）,且随ＡＬＴ正常而消失或滴度下降。慢性病人抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检出率为５６．３％（９／１６）,其中７例ＩｇＭ持续阳性者为慢性活动性丙肝,说明慢性病人抗ＨＣＶ－ＩｇＭ与疾病的活动性密切相关。结果提示抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的检测在急性肝炎的诊断及慢性丙肝的预后和转归上具有临床意义。     

用T-A载体克隆技术构建丙肝病毒C+E1区真核表达质粒pSVL-HCV/C+E1

用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄＩＩ将丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１ＤＮＡ片段从其克隆载体ｐＧＥＭ３ｚｆ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１上切下,经Ｔａｑ酶补齐３’末端后插入到载体ｐＳＶＬ－Ｔ中,构建成丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１真核表达载体ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１。本实验中重组效率达６４．７％（１１／１７）,正向插入为５０％（２／４）。     

丙肝病毒非结构基因NS_4的基因工程表达

丙肝病毒非结构基因ＮＳ_４的基因工程表达祁自柏,谷金莲,李河民（中国药品生物制品检定所,北京１０００５０）丙肝病毒（ＨＣＶ）基因由结构区和非结构区（ＮＳ１－５）所组成。抗不同病毒蛋白抗体的出现与丙肝发病的关系尚在研究之中。目前,国内丙肝诊断试剂力求包...     

细胞内丙型肝炎病毒抗原,基因组及病毒颗粒的检测及分析

本文简单介绍了细胞内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原、基因组及病毒颗粒的检测情况,并对体内肝细胞及体外培养的淋巴细胞中ＨＣＶ颗粒的检测进行了分析。     

中华鳖病毒的血清学检测

中华鳖病毒（ＴＳＶ）是从病鳖中分离到的一种病毒病原。经细胞培养和差异离心制备ＴＳＶ抗原,肌注家兔获ＴＳＶ抗体（ＴＳＶ－Ａｂ）,中和效价为１：２０,用ＴＳＶ－Ａｂ进行双向免疫扩散和间接ＥＬＩＳＡ检测,被检样品有健康和病鳖组织匀浆液、ＴＳＶ细胞培养液、提纯的ＴＳＶ,以及鱼传染性胰脏坏死病毒（ＩＰＮＶ）、草鱼呼肠孤病毒（ＧＣＶ）、鱼病毒性出血败血症病毒（ＶＨＳＶ）、鲁痘疮病毒（Ｃａｒｐ ｐｏｘ ｖｉｒｕ     

用T—A载体克隆技术构建丙肝病毒C＋E1区真核表达质粒pSVL—HC…

用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ将丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１ＤＮＡ片段从其克隆载体ｐＧＥＭ３ｚｆ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１上切下,经Ｔｘｑ酶补齐３‘末端后插入到载体ｐＳＶＬ－Ｔ中,构建成丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１真核表达载体ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１。     

人巨细胞病毒大外膜磷蛋白pp150羧基末端的高效表达及初步应用

以基因工程抗原取代天然抗原用于人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的诊断,具有广阔的前景。为此,分离ＨＣＭＶ大外膜磷蛋白ｐｐ１５０基因ＯＲＦ３端４３４ｂｐ（编码羧基末端ａａ９４３～ａａ１０４８）的ＤＮＡ片段,导入带有高水平转录启动子Ｐｔｒｃ和六个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ,在大肠杆菌中得到高效表达,ＳＤＳ ＰＡＧＥ显示一明显的分子量为１５６ｋＤ的融合蛋白条带,ＬＫＢ激光扫描占菌体总蛋白的５１％以上,并且以可溶性形式存在。表达产物经高效特异性纯化后,ＥＬＩＳＡ结果表明其能够与ＨＣＭＶＩｇＭ阳性血清呈特异反应,为建立新一代ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒打下了基础。     

两例丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染者的HCV核心区cDNA序列分析

从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期,血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性,抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性,但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性,核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ）,从血清学检测和序列分析结果推测,在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中,ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态,抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。     

HCV全长NS3基因表达及在抗体检测中的应用

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子。被ＨＣＶ感染的病例中 ,超过 5 0 %以上会引起持续性感染、慢性肝炎 ,最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1] 。ＨＣＶ严重威胁人类健康 ,但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段 ,因此 ,严格把好血源关 ,提高对丙肝患者检出的灵敏度 ,是阻止丙肝血源传播的有效手段。丙型肝炎病毒基因组为单股正链ＲＮＡ ,核苷酸长约 9.5ｋｂ ,仅含一个开放阅读框 ,翻译成一个大的聚蛋白前体 ,由宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶加工成多个成熟蛋白。其中非结构蛋白ＮＳ3分子量为 70ｋＤ ,有丝氨酸蛋白酶…     

丙型肝炎病毒单克隆抗体（HCV—McAb）的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的研究近年来发展异常迅速,多种抗体检测试剂盒的问世及ＰＣＲ方法在ＨＣＶ检测中的应用,为献血员的筛选及降低输血后肝炎的发病率提供了一定的保障。近来,人们对ＨＣＶ的基础理论及临床诊断的研究有了新的认识,特别是ＨＣＶ－ＭｃＡｂ的研制及应用工作已开始见报导。本文仅就ＨＣＶ－ＭｃＡｂ的研究现状及其发展前景作一综述。     

HCVE2／NS1相对保守区多肽体外诱导慢丙肝患者PBMC增殖反应的研究

为了解ＨＣＶ感染后细胞免疫在其中的作用,对３１例慢丙肝及２０例正常献血员以ＭＴＴ法检测外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）对ＨＣＶＥ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原及Ｃ２２、ＮＳ５的增殖反应。结果表明与正常人相比,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ对ＨＣＶＣ２２、Ｅ２／ＮＳ１抗原有明显的增殖反应（Ｐ＜００５）,而对ＮＳ５无明显增殖,其中以Ｃ２２抗原性最强。作者认为慢性丙型肝炎患者存在针对与ＨＣＶ相关抗原的细胞免疫,这种细胞免疫不能消除ＨＣＶ感染,而且与疾病的状态无关。     

用显微切割技术和催化信号扩增法检测何杰金病瘤细胞（H／RS）中的 …

为明确何杰金病（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＨＤ）瘤细胞中是否存在人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染,采用显微切割技术结合ＰＣＲ方法检测ＨＤ组织及其瘤细胞Ｈｏｄｇｋｉｎ／Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（Ｈ／ＲＳ）中的ＨＣＭＶ核酸;采用免疫组织化学催化信号扩增（ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｓｉｇｎａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ,ＣＳＡ）法检测ＨＤ中ＨＣＭＶ的立即     

血沉标本中人巨细胞病毒DNA的检出

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛标记探针（ｄｉｇ－ｐｒｏｂｅ）检测临床血沉标本中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果表明,人群血标本中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ携带率较高;ＰＣＲ技术较ｄｉｇ－ｐｒｏｂｅ更敏感、快速、简便,二者检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８３．３％和６０．３％;ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率、ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检出率与血沉值高低之间无相关性。     

人类巨细胞病毒感染实验室定量检测的新进展

人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的感染对人类健康威胁较大,尤以先天性感染、器官移植、艾滋病及反复输血患者的感染最严重。近处来在诊断ＨＣＭＶ感染方面取得的主要突破是早期、快速、定量测定。因此,本文就ＨＣＭＶ感染病毒血症、抗原血症的定量测定及标本中ＤＮＡ定量多了聚酶链反应（ＰＣＲ）技术测定一简单综述。     

原位多聚酶链反应在人巨细胞病毒诊断中的应用

逝年来人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染率高,检测方法进展人,有巨细胞包涵体细胞（ＣＣＩＣ）检测、病毒分离、免疫检测、原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）等法。目前有人把ＩＳＨ与ＰＣＲ结合创立了原位多聚酶链反应法（ＩＳＰＣＲ）,此法更准确、更敏感特异,更有地ＨＣＭＶ感染的早期快速诊断。本文就ＩＳＰＣＲ的原理、程序、特征主临床应用作一综述。     

PCR与ELISA检测丙型肝炎病毒的比较

ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ检测丙型肝炎病毒的比较李京培王明丽史百芬陆应玉（安徽医科大学２３００３２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染后,患者血清中可以检测其特异的核酸序列ＨＣＶ－ＲＮＡ和抗－ＨＣＶ等。目前国内临床大多数ＨＣＶ的实验室诊断主要依靠抗ＨＣＶ－ＩｇＧ检查,但急性期抗体检出率仅能达到６０％（３７．６～８２．８％）,部分病例可呈阴性反应［１］。说明用ＥＬＩＳＡ检测ＨＣＶ有相当部分漏检,不能发现早期患...     

丙肝研究取得新进展

丙肝病毒(ＨＣＶ)对公众的健康影响很大,全世界估计已有1.7亿人被它感染。科学家们正在努力研究这种病毒,希望治愈由它引起的慢性肝炎。目前研究的最大障碍是缺少研究ＨＣＶ的细胞培养系。没有这些实验体系,科学家们就无法在分子水平上对ＨＣＶ的生活周期进行详细研究,也?..     

α1干扰素治疗慢性丙型肝炎的长期疗效及其与病毒血症关系

为观察α１干扰素（ＩＦＮａ１）治疗慢性丙型肝炎的长期疗效及其与ＨＣＶ病毒血症的关系,我对４２例经ＩＦＮａ１治疗的慢丙肝进行了长达３年的随访观察,并同时采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＣＶＲＮＡ,现将结果报告如下。１临床资料１．１一般资料所选的４２...