中药夏枯草对人膀胱癌细胞FasL基因表达和侵袭能力的影响

目的:研究中药夏枯草对人膀胱癌细胞系T24细胞FasLmRNA表达及对其侵袭能力的影响.方法:根据MTT法得到中药夏枯草对T24细胞的半数有效抑制浓度(IC50),确定药物作用浓度.T24细胞分别经中药夏枯草不同浓度(0.5IC50、IC50)作用后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测中药夏枯草作用前后人膀胱癌细胞系T24细胞FasL mRNA的变化;应用Transwell细胞侵袭试验检测中药夏枯草对T24细胞侵袭能力的影响.结果:中药夏枯草处理后较处理前T24细胞FasL mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05);而且FasL mRNA表达水平随中药夏枯草作用浓度增加显著上调,中药夏枯草不同浓度组比较均有显著性差异(P<0.05);随中药夏枯草作用浓度升高,T24细胞侵袭能力明显增强,不同浓度组比较均有显著性差异(P<0.05).结论:中药夏枯草在一定时间内均可上调人膀胱癌细胞系T24细胞FasL mRNA的表达,而且这种上调作用在一定范围内呈剂量依赖性,可使膀胱癌细胞的侵袭能力增强.     

乙酰肝素酶siRNA对人膀胱癌T24细胞株侵袭能力的影响

目的:观察乙酰肝素酶(Heparanase,HPSE)小干扰R N A(small-interfering RNA,siRNA)对人膀胱癌细胞株侵袭力的影响.方法:体外化学合成一段乙酰肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA)序列,以阳离子脂质体介导将不同浓度的siRNA转染至膀胱癌细胞系T24细胞中,应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后T24细胞中HPSE mRNA表达,采用transwell小室侵袭试验测定肿瘤细胞的体外侵袭力.结果:转染HPSE siRNA可以显著降低T24细胞中的HPSE mRNA表达,HPA siRNA处理细胞48小时,与对照组相比,各有效浓度的HPSE siRNA可显著抑制T24细胞的体外侵袭能力(P＜0.05).结论:以siRNA阻遏乙酰肝素酶在膀胱癌细胞中表达可以成功地抑制膀胱癌细胞侵袭能力,通过应用RNA干扰技术等方法抑制乙酰肝素酶活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌.     

芦荟大黄素对人甲状腺癌细胞K1的促凋亡作用

目的:研究芦荟大黄素促进人甲状腺癌细胞系K1凋亡的作用.方法:人甲状腺癌细胞系K1与不同浓度的芦荟大黄素共孵育48h,MTT法检测细胞存活率,并用相差显微镜观察细胞形态学改变.用流式细胞术(检测细胞凋亡相关指标Annexin V/PI)和Hoeehst33258染色检测细胞凋亡,结果:芦荟大黄素能够不同程度地抑制人甲状腺癌细胞系K1的生长.芦荟大黄素对K1细胞的IC50(半教抑制浓度)分别为65 mg/ml.Hoechst33258荧光染色和流武细胞术分析K1细胞的结果一致.结论:芦荟大黄素可促进K1细胞凋亡,为芦荟大黄素治疗甲状腺癌提供了依据.     

乙酰肝素酶siRNA对人膀胱癌T24细胞株侵袭能力的影响

目的:观察乙酰肝素酶(Heparanase,HPSE)小干扰R N A(small-interfering RNA,siRNA)对人膀胱癌细胞株侵袭力的影响。方法:体外化学合成一段乙酰肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA)序列,以阳离子脂质体介导将不同浓度的siRNA转染至膀胱癌细胞系T24细胞中,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后T24细胞中HPSE mRNA表达,采用transwell小室侵袭试验测定肿瘤细胞的体外侵袭力。结果:转染HPSE siRNA可以显著降低T24细胞中的HPSE mRNA表达,HPA siRNA处理细胞48小时,与对照组相比,各有效浓度的HPSE siRNA可显著抑制T24细胞的体外侵袭能力(P<0.05)。结论:以siRNA阻遏乙酰肝素酶在膀胱癌细胞中表达可以成功地抑制膀胱癌细胞侵袭能力,通过应用RNA干扰技术等方法抑制乙酰肝素酶活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌。     

下调脂肪酸合成酶表达对膀胱癌UMUC3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响*

目的: 研究脂肪酸合成酶(FASN)表达对膀胱癌UMUC3细胞增殖、迁移、侵袭的影响,探讨其内在可能机制。方法:免疫组化法检测30例膀胱癌和15例正常膀胱组织FASN蛋白的表达;用脂质体2000分别转染FASN siRNA和无义siRNA至UMUC3细胞,筛选、鉴定siFASN和siControl稳定的细胞,siFASN组细胞设为实验组,siControl组设为对照组;采用蛋白印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法分别检测siFASN组和siControl组细胞FASN蛋白及mRNA的表达,MTT法检测siFASN组和siControl组细胞增殖情况,划痕试验、Transwell试验分别检测siFASN组和siControl组细胞迁移、侵袭能力。结果:FASN蛋白在膀胱癌组织中过表达,且与病理分期、分级密切相关(P＜0.05)。与siControl组相比,siFASN组细胞FASN mRNA及蛋白表达下调(P＜0.05),细胞增殖活力明显下降(P＜0.05),迁移能力明显下降(P＜0.05),穿膜细胞数量明显减少(P＜0.05)。结论:FASN过表达在膀胱癌发生、发展中发挥重要作用,下调FASN表达能抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,抑制FASN表达有望成为一种新的膀胱癌治疗方法。     

棕榈酸促进肝癌细胞侵袭转移的分子机制

目的:探讨棕榈酸(Palmiticacid,PA)对人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭转移能力的影响,并通过检测肝癌细胞系中CD147-MMPs信号通路在PA影响下的变化,初探PA影响肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:PA(0、20、50、100μM)作用SMMC-7721细胞后(8、16、24h),MTT法检测细胞增殖,划痕及Transwell实验评价细胞迁移侵袭能力,Western-blot及real-time PCR检测CD147蛋白及其mRNA的水平,ELISA检测基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的水平。结果:与对照组相比,PA作用SMMC-7721细胞后,细胞存活率无显著差异(P0.05);细胞迁移和侵袭能力显著增高(P0.05);CD147蛋白及其mRNA的表达显著增高(P0.05);培养上清中MMP-9的浓度显著增高(P0.05),MMP-2的水平则无变化。不同的梯度组之间相比较,细胞迁移和侵袭能力、CD147的表达水平(蛋白及其mRNA)以及培养上清中MMP-9的浓度均随PA作用时间和作用剂量的增大而产生更显著的增高。结论:PA通过活化CD147-MMPs信号通路促进SMMC-7721细胞的迁移侵袭。     

基于CRISPR/Cas9-SAM系统CHD5基因过表达慢病毒载体的构建及对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:利用CRISPR/Cas9-SAM系统构建CHD5基因过表达慢病毒载体,并分析其对膀胱癌细胞T24增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:针对CHD5基因设计3个sgRNA (sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3),将sgRNA连入LV-sgRNA-MS2-P65-HSF1-Neo载体,经293T细胞包装后获得高滴度慢病毒颗粒。病毒以MOI=10感染膀胱癌细胞T24。RT-qPCR和Western blot分别检测感染病毒后T24细胞CHD5 mRNA和蛋白表达水平,CCK8实验、流式分析、划痕实验和Transwell实验检测CHD5过表达对T24细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:成功构建CHD5过表达慢病毒载体。慢病毒感染T24细胞后,RT-qPCR和Western blot证实,T24细胞CHD5的mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和阴性对照组(P 0. 05),并且sgRNA-3-MS2-P65-HSF1序列的作用最为显著。CCK8及流式分析结果显示,过表达CHD5抑制T24细胞增殖,促进凋亡,与对照组相比,均有统计学意义(P 0. 001)。划痕和Transwell实验结果表明,过表达CHD5可抑制T24细胞迁移和侵袭能力(P 0. 01)。结论:成功构建CHD5过表达慢病毒。过表达CHD5能促进膀胱癌细胞T24凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭能力。     

下调RALA表达抑制人白血病K562细胞迁移和侵袭

目的 研究小干扰RNA（siRNA）抑制v-ral 白血病致病因子RALA基因表达对人白血病K562细胞迁移和侵袭的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,Real-time PCR检测细胞内RALA mRNA的表达水平;Western印迹检测细胞内RALA蛋白的表达水平;Boyden趋化小室实验检测细胞体外迁移和侵袭能力.结果与随机对照组相比,转染48 h后,RALA siRNA显著下调K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达（P＜0.05）.与随机对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）.结论 癌基因RALA在人白血病K562细胞迁移和侵袭过程中发挥重要作用,通过siRNA下调RALA的表达可抑制K562细胞迁移和侵袭能力.     

干扰素诱导基因IFIT3对膀胱癌细胞生物学功能及化疗耐药性的影响

摘要 目的：探讨干扰素诱导基因IFIT3在膀胱癌中的表达及对膀胱癌细胞生物学功能和化疗耐药性的影响。方法：本研究通过qRT-PCR或Western blot检测了30例膀胱移行细胞癌患者的肿瘤组织和配对正常癌旁组织标本以及人膀胱癌细胞系T24及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1中IFIT3的表达水平。通过浓度递增法构建顺铂（DDP）耐药T24细胞（T24/DDP）,然后对细胞转染靶向IFIT3的siRNA（si-IFIT3）及阴性对照（si-NC）。将细胞分为4组,分别为T24-si-NC组、T24-si-IFIT3组、T24/DDP-si-NC组、T24/DDP-si-IFIT3组,通过MTT法检测细胞增殖,使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,使用Transwell法检测细胞侵袭能力。通过qRT-PCR或Western blot检测HSP90α（HSP90AA1）、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果：与配对癌旁组织和SV-HUC-1相比,膀胱癌组织和T24细胞中IFIT3的mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.001）。与正常T24细胞相比,T24/DDP细胞中的IFIT3 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.001）。与T24/DDP-si-NC组相比,T24/DDP-si-IFIT3组的IC₅₀值和侵袭细胞数显著降低,而细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。与T24/DDP-si-NC组相比,T24/DDP-si-IFIT3组的Bcl-2、MMP2和MMP9蛋白相对表达量显著降低,而Bax和Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量显著升高（P<0.05）。String数据库显示,IFIT3与HSP90AA1基因存在互作关系。与T24/DDP-si-NC组相比,T24/DDP-si-IFIT3组的HSP90α（HSP90AA1）表达水平显著降低（P<0.05）。结论：下调IFIT3的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,下调IFIT3可部分通过抑制HSP90α （HSP90AA1）的表达来降低膀胱癌细胞对顺铂的耐药性。     

基于CRISPR/Cas9-SAM系统CHD5基因过表达慢病毒载体的构建及对膀胱癌T24细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响 *

目的 利用CRISPR/Cas9-SAM系统构建CHD5基因过表达慢病毒载体,并分析其对膀胱癌细胞T24增殖,迁移和侵袭能力的影响.方法: 针对CHD5基因设计3个sgRNA(sgRNA-1,sgRNA-2,sgRNA-3),将sgRNA连入LV-sgRNA-MS2-P65-HSF1-Neo载体,经293T细胞包装后获得高滴度慢病毒颗粒.病毒以MOI=10感染膀胱癌细胞T24.RT-qPCR和Western blot分别检测感染病毒后T24细胞CHD5 mRNA和蛋白表达水平,CCK8实验,流式分析,划痕实验和Transwell实验检测CHD5过表达对T24细胞增殖,凋亡,迁移和侵袭能力的影响.结果: 成功构建CHD5过表达慢病毒载体.慢病毒感染T24细胞后,RT-qPCR和Western blot证实,T24细胞CHD5的mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05),并且sgRNA-3-MS2-P65-HSF1序列的作用最为显著.CCK8及流式分析结果显示,过表达CHD5抑制T24细胞增殖,促进凋亡,与对照组相比,均有统计学意义(P<0.001).划痕和Transwell实验结果表明,过表达CHD5可抑制T24细胞迁移和侵袭能力(P<0.01).结论: 成功构建CHD5过表达慢病毒.过表达CHD5能促进膀胱癌细胞T24凋亡,抑制其增殖,迁移和侵袭能力.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism