银杏组织培养研究Ⅰ．不同培养条件对银杏愈伤组织形成的影响

取银杏树干上萌生的幼嫩枝条的基尖、茎段和叶片分别接种到高生长素含量的ＭＳ培养基上,愈伤组织诱导频率可高达９０％。在低生长素浓度下,诱导频率较低,但能促进茎外植体顶芽和侧芽的生长。以银杏幼茎、幼叶作外植体,形成的愈伤组织形态结构不同：幼基愈伤组织较疏松,呈粒状,色浅黄,生长迅速;幼叶愈伤组织较致密,平滑,色黄绿,生长稍慢。叶片的放置方式很重要：下表皮接触培养基时,愈伤组织只从上表皮发生,而反向放置,上下表皮都不形成愈伤组织。     

高压静电场对银杏愈伤组织生长的影响

银杏愈伤组织经１ ．０ｋＶ／ ｃｍ 强度的高压静电处理后, 愈伤组织生长速率提高, 超氧物歧化酶（ＳＯＤ） 活性和蛋白质及糖含量增加,过氧化物酶（ＰＯＤ） 和吲哚乙酸（ＩＡＡ） 氧化酶活性下降。实验表明,正高压静电场促进银杏愈伤组织细胞的生长,与ＨＶＥＦ 影响体内ＳＯＤ、ＰＯＤ 和ＩＡＡ 氧化酶活性以及蛋白质和糖含量的变化相关     

银杏愈伤组织培养及其代谢产物银杏内酯的研究

筛选出了愈伤组织生长的最佳培养基;考察了各种理化因子对培养细胞生长及银杏内酯产生的影响;应用生物法和HPLC对愈伤组织中的银杏内酯A和B进行了成功的测试。结果显示,银杏愈伤组织培养物中银杏内酯的含量可达0.01%,属国际领先水平。     

激素对银杏愈伤组织诱导及继代培养的影响

为了探讨激素对银杏愈伤组织诱导及继代培养的影响,以银杏优良品种"佛手"无菌苗的叶片和根段为材料,以MS为基本培养基,研究了5种不同激素配比和光照条件对愈伤组织诱导及长期继代培养的影响.结果表明,所有激素配比都能诱导两种外植体形成愈伤组织,完全黑暗培养条件不利于愈伤组织继代培养;NAA和KT及2,4-D和KT两种激素组合分别有利于叶片和根愈伤组织诱导.在激素配比为3.0 mg/L 2,4-D 5.0mg/L KT中生长的两种愈伤组织鲜重显著高于其它处理;NAA和KT组合适合愈伤组织长期继代保存,叶片诱导的愈伤组织最佳继代培养基为NAA 1.0 mg/L KT 1.0 mg/L,根段诱导的愈伤组织则为NAA 1.0 mg/L KT1.0 mg/L,分别在这两种激素组合下继代的愈伤组织始终为绿色,叶绿素含量变化不显著.     

银杏愈伤组织培养及其黄酮类化合物的测定(简报)

采用银杏胚、胚乳及3个月苗龄的苗叶为外植体,在附加不同激素的培养基上诱导出愈伤组织,从愈伤组织中提取黄酮类化合物并测定其含量。结果表明,由胚诱导的愈伤组织中黄酮类化合物含量最高。     

植酸在银杏组织培养中应用的研究

本文报道以植酸作抗氧化剂,对银杏愈伤组织抗氧化褐变的研究。结果表明:①植酸具有抑制多酚氧化酶活性的作用,从而有效地控制愈伤组织的褐变,促进愈伤组织生长;②不同的抗褐变剂,以0.1％的植酸效果最好;③不同的培养基以MT附加BA1.0 mg/L,NAA 3.0 mg/L的效果最好。     

银杏愈伤组织的形成及其中黄酮类化合物的产生

单一激素种类对银杏叶片,叶柄和幼茎愈伤组织的诱导中以NAA的效果最佳,2,4－D次之,6－BA最差,除胚乳外,胚,幼苗的胚根,子叶,幼茎,叶片和叶柄,以及成年树的嫩茎,叶片和叶柄各外植体在本试验条件下都能诱发愈伤组织,其中胚,子叶和叶柄的愈伤组织形成频率均可达到100．0％,叶片和幼茎在光照下的愈伤组织诱导频率比黑暗中的略高,而叶柄和胚根则相反,MS和DCR两种培养基都适合银杏幼苗叶片及叶柄愈伤组织的诱导,两者之间不存显著性差异,测得光照培养的3个组织系（ST1,ST2,ST3)中均含银杏黄酮甙元槲皮素,山柰素和异鼠李素,总含量分别为干重的0．35％,0．29％和0．14％,而黑暗中培养的这3个愈伤组织系则没有银杏黄酮的产生。     

不同状态银杏愈伤组织蛋白质电泳分析及电镜观察

通过对同一来源3种银杏愈伤组织中蛋白质、黄酮含量测定,蛋白质SDS-PAGE电泳分析,细胞超微结构观察等研究银杏不同状态愈伤组织的生长情况。结果表明,银杏的这3种愈伤组织代表愈伤组织细胞生长的3个阶段。绿色愈伤组织处于分生组织状态,细胞生长旺盛,蛋白质较多,蛋白质条带宽,细胞内物质丰富,但黄酮的含量并不是最高;微黄色愈伤组织细胞处于初生代谢向次生代谢转化的阶段,蛋白质含量开始减少,45.7、38.4、33.4kD的蛋白质开始减少,核膜不完整,淀粉含量较高,其黄酮含量高于绿色愈伤,属次生代谢的阶段;褐色愈伤组织蛋白质含量很低,条带数减少,有5条蛋白质条带消失,且黄酮的含量最低,细胞结构发生质壁分离现象,内含物解体,细胞核解体,是衰亡的主要特征。微黄色愈伤组织是获取高黄酮含量的最好材料。     

银杏愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

采用正交试验设计法,研究了NAA、KT、2,4-D、蔗糖浓度和不同外植体类型等因素对银杏愈伤组织诱导的影响。结果表明:不同外植体类型对银杏愈伤组织诱导率影响最大,KT和NAA其次,2,4-D和蔗糖浓度最小。银杏愈伤组织诱导最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1,最佳外植体为茎段,其愈伤组织诱导率可达100%。     

缺氧胁迫法选育高产银杏内酯悬浮细胞系研究

以银杏优良品种的种子萌发的幼苗诱导愈伤组织,考察了不同培养基地对愈伤组织生长和银杏内酯产生的影响。采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中共选育出7个高产悬浮细胞系,其合成银杏内酯的能力比选前的愈伤组织有了显著提高,其中细胞系MH－3培养周期18d,细胞生物量增加3．71倍,银杏内酯含量达到细胞干重的0．048％,比选育前提高了182．4％,为国内领先水平。并对MH－3在遥瓶培养时其生产银杏内酯能力的稳定性进行了研究。     

红皮云杉茎的解剖结构与插条不定根形成的研究

１９９２年７－８月定时固定红皮云杉插条基部材料于ＦＡＡ液中,石蜡制片法室内解剖研究不定根的发生。结果表明：红皮云杉插条诱发根原基的来源有两种途径。一种是愈伤组织生根型,在愈伤组织的再生形成层处,或茎的维管形成层诱发根原基;另一种是非愈伤组织生根型,在插条切口处的维管形成层、皮层或初生木质部与次生木质部间的薄壁组织较深的部位,直接产生纵向不定根原始体,有的在距离切口０．１－０．５ｃｍ以上茎的维管形成层,维管形成层与木射线的交界处及叶隙等薄壁组织产生径向不定根。不同个体间产生的不定根数量及发育的早晚差异较大。     

The effect of B chromosomes and T-DNA on chromosomal variation in callus cells and regenerated roots of Crepis capillaris

The chromosome behaviour has been compared in three Crepis capillaris callus culture lines and the roots regenerated from these calli. The calli were obtained from explants derived from plants without and with two B chromosomes and the hairy roots were obtained from plants transformed with Agrobacterium rhizogenes. Cytological studies demonstrated that the presence of additional DNA as B chromosomes or as T-DNA had an influence on the numerical and structural variability of the standard chromosome in long-term callus cultures and in regenerated organs. The callus with two B chromosomes displayed higher levels of polyploidyzation than callus without B chromosomes. The roots regenerated from both these calli were only diploid, while roots regenerated from transformed callus were also polyploid. This revised version was published online in June 2006 with corrections to the Cover Date.     

发根农杆菌对骆驼刺的转化及转化组织的形态发生

将骆驼刺离体再生苗的茎切段经发根农杆菌A4菌株感染后,在含500mg/L头孢霉素的MS无激素培养基上培养,产生了转化的发根和愈伤组织.转化根在附加2mg/L2,4-D和0.5-1mg/L6BA的MS培养基上培养后,亦可诱导出愈伤组织.在含3mg/L6BA和0.5mg/LNAA的培养基上诱导出了苗的分化.冠瘿碱分析表明,在95%以上的发根和75%的转化愈伤组织及再生植株中都显示了T-DNA的整合和表达.染色体检查发现,约81%的发根细胞具有正常染色体数(2n=18),其余则存在染色体数目的变化,在继代培养一年之后,转化体仍维持旺盛的再生能力.     

新疆雪莲毛状根的诱导及其植株再生体系的建立

利用发根农杆菌R1601、R1000、LBA9402感染新疆雪莲的叶片、叶柄和根段外植体,诱导产生毛状根。毛状根接种量为2.8 g/L(FW)时,20d生长量可达66.7 g/L,黄酮含量达到干重的10.23%。冠瘿碱的检测和rolB基因的PCR分析表明,Ri质粒中的T_DNA片段已经整合到毛状根细胞的基因组中。预培养时间、外植体类型以及发根农杆菌的菌株属性对毛状根诱导有着重要的影响。其中预培养2 d的新疆雪莲根段外植体,经过R1601感染后,毛状根的诱导率可达100%。诱导产生的毛状根在附加生长素的液体培养基中,有少量愈伤组织产生。由毛状根再生的植株与雪莲外植体再生的植株在形态上无明显区别,但前者的黄酮含量仅为后者的53%。     

Solute contents in roots and root calli of NaCl-tolerant and NaCl-sensitive tissues ofLycopersicon

Biomass, relative growth rate (RGR), organic and inorganic solute contents in control and NaCl (50–100 mM) affected roots or calli of the wild tomato genotypeLycopersicon pennellii and theLycopersicon esculentum wilty mutantflacca were compared. Under NaCl-stress, the RGR of calli fromL. pennellii was higher than that of the mutantflacca, while the root biomass of the former was lower than that of the latter. Constant water contents were found in calli and roots, irrespective of the genotypes and NaCl concentrations. Taking into account the solute contents of the apoplasm, Na⁺ accumulation was similar in the sensitive tissues (calli fromL. flacca, roots ofL. pennellii) and the tolerant ones (calli fromL. pennellii, flacca roots). Decreased K⁺ and Mg²⁺ and increased proline contents were found in both sensitive tissues. In comparison with sensitiveL. pennellii roots, salt sensitiveflacca calli showed increased total organic acid and amino acid contents.     

草木樨状黄芪单细胞培养再生植株及其影响因素的研究

从草木樨状黄芪的子叶和胚轴诱导的愈伤组织中选取结构松脆的颗粒状愈伤组织,用液体培养基Ｓ１２进行悬浮培养建立了悬浮细胞。取换液３天左右生长旺盛的悬浮系材料分离单细胞,用基本培养基Ｓ１２与不同浓度的植物血球凝集素组成的系列培养基ＭＣ１－ＭＣ６进行液体浅层静置暗培养;形成小愈伤组织后,经Ｍ３（ＭＳ＋２,４－Ｄ ２ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ,ＫＴ １ｍｇ／Ｌ）培养基增殖,ＭＲ２培养基诱导分化出苗,再     

条叶龙胆根培养物中龙胆苦苷的产生和含量

条对龙胆愈伤组织中龙胆苦苷含量较低,根的分化可以提高龙胆苦苷的含量。培养的离休根中龙胆苦苷的含量则更高。随着继代次数的增加,愈伤组织中龙胆苦苷含量下降快,而分化根的愈伤组织和离体培养根中龙胆苦苷含量下降较慢。在愈伤组织的液体培养中,1/2MS培养基附加低浓度的植物激素,龙胆苦苷含量有所提高。植物激素配比促进愈伤组织中分化根的形成,也促进龙胆苦苷的产生;但促进愈伤组织的生长时,不利于龙胆苦苷产生。在离体根培养中,添加 1mg/L的金雀花碱,促进龙胆苦苷的产生,含量可达1.48％,明显高于愈伤组织(0.52％)和分化根的愈伤组织(0.65％),也高于试管苗根的龙胆苦苷含量(1.01％)。     

埃斯基红豆草下胚轴愈伤组织原生质体的培养与植株再生

埃斯基红豆幼苗的下胚轴切段在附加２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ中形成胚性愈伤组织。来自１１－１３个月龄、继代６－１５天的愈伤组织的原生质体,在改良的Ｖ－ＫＭ液体培养基中可持续分裂形成细胞团,培养１０天时的分裂率和克隆率分别为６５．８８％和５３．３８％周后就可将将原生质体形成的小愈伤组织转于培养基上。原生质体在改良的Ｂ５液体培养基也可以分裂形成小愈伤组织,但分裂率低于Ｖ－ＫＭ。来自原     

欧美黑杨离体再生途径及影响因子的研究

先期完成了以腋芽发育为再生方式的研究后 [1 ] ,又对不定芽的发育进行了探索 .分别以欧美黑杨特选品系的不同部位外植体进行愈伤组织诱导及植株再生研究 ,易诱导并易分化出新芽的外植体为幼嫩茎段 ;通过不同激素浓度合理配比 ,进行适宜的诱导及分化培养基筛选 ,培养基为 MS+6 - BA 1.2 mg/ L +NAA 0 .5 mg/ l,附加 6g/ L琼脂 ,诱导的愈伤组织分化出密集的再生芽 ;糖分在诱导分化过程中作用突出 ,其合适浓度为 4 0 g/ L ;愈伤组织的形态及培养时间对分化频率影响较大 ,最佳的形态为致密的绿色 ,白色及粉红色的愈伤组织较疏松 ,分化率很低 .不同部位外植体、激素含量、蔗糖浓度、愈伤组织形态及培养时间是明显影响欧美黑杨愈伤组织诱导分化的因子 .     

野葛毛状根离体培养与异黄酮生产

用发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）R1601菌株感染野葛（Pueraria lobata(Willd.)Ohwi）叶片外植体后获得的毛状根,经连续4次继代培养,鲜重增加到最初的6.2倍。PH为5.5的1/2SH液体培养基较适合野葛毛状根的生长。与自然根相比,毛状根在无激素的1/2SH液体培养基中离体培养20d后,鲜重增加22.6倍,释放入培养液中的异黄酮量增加10.6倍。毛状根生产异黄酮的量略高于自然根,且根中含量明显高于愈伤组织及茎中异黄酮的含量。培养液体积影响毛状根的离体生长及异黄酮的释放。