丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体膜微囊的分离

本文报告了从丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化膜结合烟碱样乙酰胆碱受体的简便方法。比活性达1750nmolα-毒素结合点/克蛋白质,无乙酰胆碱酯酶活性,可避免它的干扰。电镜检查发现受体的膜结合物成微囊状,直径约0.1—0.3μα-毒素结合试验及聚丙烯酰胺凝胺电泳结果证明具有烟碱样胆碱能受体性质,适于受体功能和性质的研究。     

二化螟体内乙酰胆碱酯酶的分布及纯化方法

研究了二化螟Chilo suppressalis乙酰胆碱酯酶（AChE）的体躯和亚细胞分布,并用凝胶过滤层析和2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明：二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部,而成虫胸部乙酰胆碱酯酶的活性最低,显著低于头部和腹部。成虫体内AChE的活性明显高于幼虫。在亚细胞的分布上,乙酰胆碱酯酶主要位于膜上（86%）,近46%的活性存在微粒体中。在3种纯化乙酰胆碱酯酶的方法中,以3-羧基苯基-乙基二甲基铵作配体的亲和层析法纯化效果最佳,乙酰胆碱酯酶的最高纯化倍数为536.05倍,产率30.46%。     

小脑电刺激对家鸽乙酰胆碱酯酶活力的影响

选用成年健康家鸽,对小脑进行连续电刺激后,分别抽取家鸽外周血清及全脑测定乙酰胆碱酯酶活力变化,以探讨鸟类小脑刺激与乙酰胆碱酯酶活力变化之间的相关性.结果 表明:在刺激小脑皮层后,家鸽外周血清中乙酰胆碱酯酶活力显著上升(P＜0.05);而在刺激小脑皮层后,脑组织中乙酰胆碱酯酶活力显著降低(P＜0.05).推测电刺激引起外周组织乙酰胆碱释放,从而引起肌肉强直,血清中胆碱酯酶的活力升高.而电刺激小脑使抑制性神经元功能兴奋,脑中胆碱能神经元功能减弱,乙酰胆碱的释放减少,脑组织中胆碱酯酶的活力降低.     

利用黑斑双鳍电鳐构建实验性自身免疫性重症肌无力小鼠模型

目的建立符合国际化的临床前实验标准的实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)动物模型。方法参照文献报道的方法并改进后,从电鳐电器官提取乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AchR)蛋白纯品,并采用SDS凝胶电泳蛋白定性鉴定及BCA法蛋白定量;用纯化的蛋白主动免疫C57BL/6小鼠,共免疫3次(分别于第1天、第30天、第60天),进行EAMG小鼠临床评分、体重、血清AchR抗体含量、新斯的明试验、肌电图等综合评价。结果 EAMG模型组与佐剂组比较,自第三周开始发病,平均临床评分显著上升(P<0.01);发病小鼠体重显著减轻(P<0.01);新斯的明试验阳性;血清AchR抗体含量明显增加(P<0.01);肌电图重复电刺激实验阳性。结论从黑斑双鳍电鳐的电器官提取、纯化AchR蛋白成功诱导C57BL/6 EAMG小鼠模型,为进一步研究重症肌无力创造了良好条件。     

丁氏双鳍电鳐(Narcine timlei)电器官烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)某些生化性质的研究

本文报道了丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体蛋白（AChR）的某些生化性质。纯化的AChR经聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,呈现一个主要蛋白带,经测定,表观分子量为440,000,与~（125）I-α-Bgt-AChR复合物的分子量相一致。等电聚焦电泳测得纯化AChR和~（125）I-α-BgtAChR的等电点（pI）分别为4.9和5.2;经SDS—聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,纯化的AChR解离成三个主要亚基蛋白带,它们的表观分子量分别为38,000,42,000和66,000,其中前两个亚基的含量很高,约占总数75％。氨基酸组成分析表明,丁氏双鳍电鳐电器官AChR由18种氨基酸组成,（色氨酸未测定）,其中酸性氨基酸含量很高,占总数的20％以上,说明纯化的AChR是一个复杂结构的酸性蛋白大分子。     

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７？ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５＝８．０之间,酯酶活性底有抑制作用。ＩＣ５０１０．２×１０＾－３及３×１０＾－３ｍ     

重组乙酰胆碱酯酶的表达及其分子进化研究进展

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是酶抑制法检测农药残留的核心试剂。但天然提取的AChE存在含量低、纯化困难、稳定性差等不足,因此,高性能的重组AChE制备成为研究学者关注的热点。文中综述了重组AChE的表达、和分子进化等方面的研究成果,并指出酶定向进化策略与表面展示技术结合是重组AChE活性改造的未来趋势。     

天然产物对家蚕乙酰胆碱酯酶抑制作用研究

用Sephadex G-25、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200方法分离纯化家蚕头部中的乙酰胆碱酯酶(AChE),以有机磷化学农药为阳性对照,比较分析几种天然产物对AChE纯酶液与粗酶液的抑制效果.结果 表明,经过一系列步骤的纯化,最后所得AChE是纯度较高的酶液,并且纯化后的AChE对抑制作用更敏感.同时实验选取的大部分天然产物提取物对纯化后的AChE都有一定的抑制作用,其中绣线菊乙醇提取物对纯酶的IC50达到了0.091×10-3 g·mL-1.     

繁殖寄主对赤眼蜂羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的影响

通过测定赤眼蜂Trichogramma羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活性、对底物的亲和力以及对抑制剂的敏感度研究了繁殖寄主对松毛虫赤眼蜂T.dendrolimi和螟黄赤眼蜂T.chilonis的影响。柞蚕卵和米蛾卵繁殖的赤眼蜂羧酸酯酶对底物的亲和力有不同程度的影响,柞蚕卵繁殖的赤眼蜂羧酸酯酶对α-乙酸萘酯或β-乙酸萘酯的亲和力最高是米蛾卵的2倍以上。繁殖寄主对乙酰胆碱酯酶对底物亲和力没有明显的影响。米蛾卵繁殖的松毛虫赤眼蜂羧酸酯酶活性明显高于柞蚕卵繁殖的种群,而米蛾卵繁殖的螟黄赤眼蜂种群羧酸酯酶的活性明显低于柞蚕卵繁殖的种群。用柞蚕卵繁殖的松毛虫赤眼蜂种群对对氧磷的敏感度明显低于米蛾卵繁殖的种群,而增效磷则正好相反。繁殖寄主对松毛虫赤眼蜂吉林种群乙酰胆碱酯酶对DDVP和毒扁豆碱的敏感度没有明显的影响,而在松毛虫赤眼蜂广东种群和螟黄赤眼蜂中,柞蚕卵繁殖的种群乙酰胆碱酯酶对DDVP和毒扁豆碱的敏感度明显低于米蛾卵繁殖的种群。     

抗性小菜蛾的乙酰胆碱酯酶敏感性

用FAO推荐的点滴法测定了小菜蛾Plutella xylostella(Linn.)对马拉硫磷和西维因的抗药性,并对抗性?和敏感(S)小菜蛾幼虫的胆碱酯酶(ChE)的性质、活性、动力学和抑制作用进行了研究.广州天河、上海梅陇的小菜蛾对马拉硫磷的抗性分别是江西南昌种群的113.8和27.4倍;它们对西维因的抗性是》3.1倍.R幼虫ChE对乙酰胆碱(ATCh)、丙酰胆碱(PrTCh)和丁酰胆碱(BuTCh)的活性分别是S幼虫的0.3、0.7和9.9倍;它们的V_max分别是0.4、1.4和7.0倍;K_m分别是209.1,87和37.8倍.毒扁豆碱、西维因、对氧磷、敌敌畏和残杀威对R幼虫AChE的抑制中浓度I₅₀,分别是S幼虫的333.3,66.7,17.2,12.5和10.0倍.对氧磷、敌敌畏、残杀威和西维因对R幼虫的双分子速率常数K₁,分别是S幼虫的126.4,86.5,32.9和12.3倍.由此可见,AChE敏感度降低是小菜蛾对有机磷和氨基甲酸酯产生抗性的主要机理之一.本文中还讨论了防治抗性小菜蛾的策略.     

耐热中性蛋白酶产生条件及酶的亲和层析纯化

从云南西双版纳分离的耐热菌株中筛选到菌号为HY-69的菌株,经鉴定为嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus).该菌产中性蛋白酶.对该菌株的产酶条件进行了研究,酶的产量和耐热性均优于其它菌株.发酵液经超滤浓缩、硫酸铵沉淀后以亲和层析纯化.粗酶分别以Cbz-L-phe-T-sepharose 4B和Cbz-D-phe-T-sepharose 4B纯化,并对两种材料的纯化效果进行了比较,得到了PAGE和SDS-PAGE均一的酶.     

单克隆抗体亲和层析纯化长叶车前花叶病毒

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)单克隆抗体1H2,经纯化后以溴化氰活化法偶联于Sepharose 4B上制成亲和层析柱。HRVsh感染的三生烟提取液,经一次聚乙二醇沉淀初步纯化,悬浮液上亲和层析柱,于磷酸缓冲液中吸附,蒸馏水洗脱。收集的病毒制剂接种心叶烟有感染性,电镜观察见典型的HRVsh粒子,紫外吸收光谱与常规方法提纯的病毒相似,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带。结果表明单克隆抗体亲和层忻得到高度纯化的HRVsh。最后讨论了单克隆抗体亲和层析方法的优点。     

从薄层层析到天然产物工业制备层析的理论与实践

基于分离理论的共性,通过薄层层析优化难分离物质对的最佳分离条件并直接放大到植物天然产物的工业制备分离。本文对实际应用中的溶剂组成、溶剂强度、溶剂用量及溶剂再利用等问题作了详细论述。最佳溶剂选择性可通过不同溶剂系统在薄层板上所给难分离物质对的最大Rf比值确定;在正相硅胶层析中,主要极性溶剂决定了物质的洗脱顺序;洗脱剂中极少量强极性溶剂(O．5％)或pH值的改变可显著改善拖尾现象;根据Rf值和容量因子(K)及洗脱体积三者之间的关系,Rf在0．1～0．3为用于柱层析的洗脱溶剂强度的最佳范围。     

亲和层析法分离腺苷结合蛋白质

本文报告一种新的腺苷亲和层析凝胶的合成方法。利用这种凝胶可从大鼠心脏、肝脏及小牛主动脉平滑肌的水溶部份分离出几种腺苷结合蛋白质,其亚基分子量(据SDS-PAGE)分别为35,000、37,000、46,000、43,000及15,300Dal。现已证明,35,000Dal蛋白质是乳酸脱氢酶及苹果酸脱氢酶,43,000Dal蛋白质是腺苷激酶,46,000Dal蛋白质可能是S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。15,000Dal蛋白质前人未有报道。它对腺苷具有高度特导性和亲和力,推测是腺苷的细胞内受体和/或载体。测定了这种低分子量腺苷结合蛋白质的氨基酸组成及某些物理常数:pI=6.5;沉降系数2.42S,微分比容0.727cm~3/g,与腺苷复合物的解离常数K_D=2.3μM。     

氧化铝层析从云南红豆杉植物中转化提取紫杉醇

采用氧化铝层析从云南红豆杉植物汉膏中转化生成和分离提纯了紫杉醇。考察了氧化铝的类型、流动相中水和甲醇的添中、反应时间以及洗脱剂组成等层析操作条件对紫杉醇回收和分离的影响。研究表明,采用碱性氧化铝柱层析分离和回收紫杉醇效果显著,通过对紫杉醇转化和分离条件的优化,经一步氧化铝柱层析,可以使紫杉醇的含量从小于１．０％提高到大于２７％,紫杉醇的回收大于１７０％。     

单克隆抗体亲合层析法快速提纯乙肝表面抗原

本文报道用乙型肝炎病毒单克隆抗体(抗-HBsMcAb)与活化琼脂糖(Minileak Low)结合制备亲合层析柱,用于提纯乙型肝炎病毒的表面抗原(HBsAg)。对纯化前后的表面抗原活性用RPHA法进行了检测,提纯后的效价比提纯前提高了20多倍。用免疫电镜(IEM)对提纯物观察可见满视野22nm的小圆颗粒。经SDS-PAGE电泳得出一条较清楚的带。对这项工作的意义进行讨论。     

反相高效液相色谱法制备HMC毒素纯品

本文采用反相高效液相色谱纯化制备了从玉米小斑病病菌Ｃ小种（ＨｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｒｉｕｍｍａｙｄｉｓＲａｃｅＣ）分离出来的毒素ＴｏｘｉｎＩ,经ＮＭＲ的结构分析证实此制备物纯度较高,达到结构分析要求。用氯仿提取含有ＨＭＣ的毒素培养滤液,经过多次ＴＬＣ展层层析（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝９：１）,刮取具有侵染活性的部分（Ｒ_ｆ＝０．４）溶解在小体积甲醇中备用。色谱柱为Ｗａｔｅｒｓ（制备型２５０ｍｍ×１０ｍｍ）填料为ＹＷＧ－Ｃ１８反相柱,粒度１０ｕｍ,流动相选用甲醇：水５５：４５     

THE EFFECTS OF SOLUBILIZATION PROCEDURES ON THE RELEASE AND MOLECULAR STATE OF ACETYLCHOLINESTERASE FROM ELECTRIC ORGAN TISSUE

Abstract— A study was made of the effect of various solubilization procedures on the release of AChE from electric organ tissue of the electric eel and on the molecular state of the enzyme. The procedures employed included homogenization in different ionic media or in the presence of detergents, etuymic treatment and chemical modification. Studies were performed on intact electroplax, tissue homogenates and membrane fractions. The apparent AChE activity of intact cells, homogenates and membrane fractions was shown to be governed by diffusion-controlled substrate and hydrogen ion gradients, generated by AChE-catalyscd hydrolysis, leading to a lower substrate concentration and a lower pH in the vicinity of the particulate enzyme.
Treatment of homogenates with NaCl solutions or with NaCl solutions containing the nonionic detergent Triton X-100 causes release of the native'molecular forms of the enzyme (primarily the 18 S species) which aggregate at low ionic strength. For optimal extraction both high ionic strength (e.g. 1 M-NaCl) and the detergent are needed AChE is also solubilized by treatment of tissue homogenates with trypsin, bacterial protease or collagenase. The first two enzymes caused its release as an 11 S non-aggregating form, while collagenase also produces a minor non-aggregating - 16 S component. Treatment of tissue homogenates with maleic anhydride causes release of AChE as a non-aggregating 18 S species. On the basis of the solubilization experiments it is concluded that the interaction of AChE with the excitable membrane is primarily electrostatic. The possible orientation of the enzyme within the synaptic gap is discussed.     

中国大鲵侧线器官的研究

本文以光镜和扫描是镜手段研究了中国大鲵幼体，亚成体及成体头部及躯干部表皮中的侧线器官，即电接受壶腹器官，机械接受的表面神经丘和陷器官的分布，形态和发展变化。壶腹器管仅存于幼体头部，变态结束后消失，后两种终生存在，但前者按一定路线和方向排列，后者仅存于头部，陷在表皮中，文章探讨了壶腹器官的原始性，其消失与生活习性以及由水登陆进化的关系；对三种器官的形态及其它有尾类的侧线器官进行了比较。     

吸附层析分离麻黄生物碱的过程优化

研究了用吸附层析取代现有的二甲苯萃取麻黄生物碱的工艺,重点考察了洗脱剂和操作条件对产品纯度和回收率的影响,发现在树脂吸附后的洗脱中,0．08M草酸的洗脱率最高,达99．3％,纯化倍数大于20;在操作条件中,进料量、pH和料液在层析柱中的停留时间影响最大：进料量增大导致纯度和收率的下降,树脂的动态吸附容量为27．5mg／mL树脂;停留时间在20rain时纯度较高,而洗脱率随停留时间减少却略有下降;pH=10时吸附性能较好。