口服霍乱活疫苗的重组体

霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的病原株由于切除其编码霍乱肠毒的A_1亚基的DNA顺序而被减毒。     

口服轮状病毒活疫苗的安全性临床观察

为了观察口服轮状病毒活疫苗的安全性,2004年4~10月在济南市中心医院预防接种门诊对总服用该疫苗的410例7月龄~3岁的幼儿密切观察其反应,测量腋下体温并询问有无不适症状等。结果显示,95.61%幼儿(392/410)无不良反应;约4.39%(18/410)出现发热、腹泻等不良副反应,其中强反应3例(0.73%),中度反应11例(2.68%),轻度反应4例(0.98%),均于对症治疗后3日内缓解并消失。临床资料证明,使用该疫苗是安全的。     

霍乱毒素(CT)基因探针的构建及其对霍乱弧菌的检测

用体外DNA重组技术构建了CT基因重组质粒pMM-CTII。应用XbaI/EcoRl双酶解,琼质糖凝胶制备电泳回收含C2基因的片段,以DNA缺口转译技术用a-32P标记的CT基因探针与01群霍乱弧菌经典型及埃尔托生物型产毒株杂交为阳性,与01群霍乱弧菌非产毒株及非01群无毒株杂交为阴性。对从临床及外环境分离的埃尔托霍乱弧菌进行了检测,流行株52株,检出率为92％;抗性株50株,检出率16％。显示利用CT基因分析较噬菌体分类更确切可靠。     

人呼吸道合胞病毒活疫苗研究进展

人呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿支气管炎和肺炎的主要原因,也可导致免疫缺陷病人及老年人群显著发病和死亡.人呼吸道合胞病毒疫苗已被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)列为全球最优先发展的疫苗之一.经过50多年的研究,尤其是随着重组技术和反向遗传学的出现,对RSV疫苗的研究取得了重要进展,...     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗猴体神经毒力试验参考品合格标准的统计分析

验证口服脊髓灰质炎减毒活疫苗的猴体神经毒力试验参考品合格标准是否发生改变及其对疫苗猴体神经毒力试验检测结果的影响。按照WHO推荐的猴体神经毒力中枢神经系统病理学检定方法,统计分析了1996~2002年中猴体神经毒力试验三个型参考品各五批以上的实验数据。并对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型参考品的病变好发部位腰、颈、脑的病变分数进行了比较。结果表明,Ⅰ、Ⅱ型参考品合格标准上、下限及C值有所下降;Ⅲ型参考品合格标准上、下限及C值略有升高。从病理学记分结果显示,三型参考品在腰、颈、脑部的致病力存在着差异;Ⅲ型参考品的致病变力向颈、脑部位扩散的指数明显增大。Ⅰ、Ⅱ型参考品合格标准对疫苗猴体神经毒力试验合格界线趋于严格,而Ⅲ型参考品猴体神经毒力病变指数由腰部向颈、脑部蔓延趋势的增大导致病变扩散指数和强度指数增大,从而使Ⅲ型参考品合格标准对疫苗的猴体神经毒力试验合格界线范围趋大,有可能对Ⅲ型疫苗制品合格率增大。     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性研究

目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37℃放置7 d检测加速热稳定性并冻融的稳定性。结果该疫苗-20℃可贮存24个月以上,2~8℃有效期可延长至12个月,且冻融不会影响疫苗的稳定性。结论疫苗质量稳定,各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)及企业《口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)注册标准》。     

临床试验评估口服肠毒原性大肠杆菌原型疫苗的安全和免疫原性

作者开发了一种新的抗肠毒原性大肠杆菌（ETEC）腹泻的口服疫苗,这种疫苗含有表达水平提高的ETEC定居因子（CFs）和重组蛋白（LCT-BA）,即大肠杆菌热不稳定性毒素B亚单位与霍乱毒素B亚单位的重组蛋白的灭活重组大肠杆菌。作者进行了随机、双盲有对照的I期临床试验,60名瑞典成人志愿者参与了此项研究,观察了这种原型疫苗的安全性和免疫原性,并与以往开发的口服ETEC疫苗的结果进行比较,以往开发的疫苗为口服ETEC疫苗,这种疫苗含有CTB和灭活的表达CFA／I的野生型ETEC菌株（参考疫苗）。志愿者分组接受2剂或者是原型疫苗或者是参考疫苗。原型疫苗以相同剂量或者以4倍的剂量（与参考疫苗相比）进行投递。     

转基因番茄口服疫苗的现状,问题及对策

日趋成熟的植物基因工程技术为转基因植物口服疫苗的研究提供了基础并带来了广阔的发展前景.番茄是最常用的转基因植物受体材料之一,可以直接生食避免了加热过程对外源蛋白的损伤.随着转基因植物免疫保护机制的进一步阐明以及国际番茄基因组测序计划的完成,转基因番茄口服疫苗的发展也迎来了新的机遇.但与此同时,我们也应看到转基因番茄口服疫苗仍存在诸多不确定的因素,如外源蛋白表达量不高、口服时可能被消化以及转基因植物安全性问题等.如何成功解决这些问题将成为转基因番茄口服疫苗发展过程中的重大考验.综述了植物口服疫苗这一概念出现后的近二十年中,番茄作为受体材料研制口服疫苗的现状,问题及对策,旨在为转基因番茄口服疫苗的进一步研究提供思路.     

基于蛋白质跨外膜自转运系统的细菌细胞表面蛋白展示技术研究进展

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa-Ⅴe5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨膜步骤介导蛋白质穿过阴性菌的内外膜.据信Va型是目前已知蛋白质跨膜转运时最简单的分泌途径...     

用基因工程技术研究预防细菌性腹泻疫苗的进展

引起腹泻的病原菌种类很多,包括细菌、病毒、原虫等等。引起腹泻的类型亦各不相同,有些细菌能定居于小肠粘膜、繁殖、产生毒素,使肠道电解质失去平衡而产生水样腹泻,如毒素性大肠杆菌和霍乱弧菌。     

利用细菌人工染色体技术构建整合F基因的重组MDV疫苗株*

目的:预防马立克氏病病毒(MDV)和新城疫病毒(NDV)混合感染鸡引起的疾病,构建表达NDV F蛋白的MDV疫苗株CVI988 BAC重组载体,并包装成重组病毒,为疫苗免疫提供更多的重组疫苗选择。方法:首先利用PCR扩增带有卡那霉素(Kanamycin,Kana)抗性基因片段的F基因,采用同源重组的方法将其整合到CVI988 BAC上,进一步诱导I-SceI表达敲除Kana基因而获得重组质粒CVI988 BAC-F。通过磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞获得重组病毒。结果:Western blot和间接免疫荧光实验证实重组病毒能够表达F蛋白。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果表明,F基因的插入不影响病毒的体外增殖。结论:利用BAC技术成功构建了整合F基因的重组MDV病毒CVI988 BAC-F,为MDV重组疫苗研发,防控NDV与MDV共感染奠定了基础。     

生物工程为我们展示的前景

在今后20年里,生物工程能为科学,工业和社会提供些什么东西呢? 我知道作这样的推测要冒风险。从本世纪三十年代中期起,美国国家科学院就开始进行五年一期和十年一期的预测。这些预测未曾料到的发现很多,其中包括抗菌素、核能、微信息处理机,分子生物学。然而,这样的推测还是很有用的。     

置换HN基因对新城疫病毒LaSota株致病力的影响

[目的]新城疫病毒的血凝素.神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)在病毒装配、出芽、释放及侵入宿主细胞的过程中发挥关键作用,但HN对病毒致病力的影响程度尚不完全清楚.[方法]为探讨这一问题,本研究以中等毒力毒株Mukteswar的HN基因替换我国广泛应用的LaSota疫苗株HN基因,通过反向遗传操作技术拯救出嵌合病毒(rL-MuHN).[结果]rL-MuHN红细胞吸附能力较亲本株rLaSota无显著升高,具有相似的细胞融合活性;嵌合病毒ICPI由rLaSota株的0.36降为0,MDT≥90,IVPI=0与rLaSota株相同,保持典型低致病力缓发型特点不变.进一步以Mukteswar株F基因替换rL-MuHN的F基因,拯救出F和HN双基因替换嵌合病毒rL-MuFHN,尽管该病毒的细胞融合能力显著提高,但其MDT、ICPI和IVPI分别为98 h,0.59和0,显示F和HN双基因替换仍未能使嵌合新城疫病毒rL-MuFHN的致病力达到中等毒力毒株Mukteswar(MDT、ICPI及IVPI分别为46 h、1.32和0.64)的水平.[结论]试验结果表明,F及HN囊膜蛋白基因之外的病毒基因组骨架背景对病毒的致病性同样具有重要的决定性意义,不同HN蛋白对嵌合病毒的致病能力的影响不同,与供体毒株毒力无关;以流行野毒株HN替代rLaSota疫苗株构建抗原针对性更强的弱毒疫苗株存在技术可行性.