植物原生质体的制备与活力检测研究进展

原生质体是进行植物遗传改良和细胞各种生理生化特性研究的平台.本文对近些年制备原生质体的材料选择、预处理、游离、纯化和活力检测等方面的研究进展进行了综述,分析了影响原生质体的分离和纯化的有关因素,并根据相关文献讨论了今后原生质体重点研究方向.     

HPLC法测定香菇中有机酸含量的检测技术研究

本实验建立了HPLC法同时测定香菇中酒石酸、苹果酸、乙酸和柠檬酸的方法。在酸提条件下,利用Agela Venusll MP C18色谱柱,以2%CH3OH-20 mM(NH4)2HPO4(pH 2.40)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为210 nm,进样量为10μL。四种有机酸均在8 min内出峰。本法准确、可靠、快速、简便,检出限较低,适合于大批量样品的分析与检测。     

蛇床子有效成分的RP—HPLC测定及其4种提取方法的比较研究

以蛇床子素、欧前胡素、佛手柑内酯为指标成分,建立了蛇床子有效成分分离测定的HPLC新方法,并对95%乙醇冷浸、超声、回流、索氏提取蛇床子所得的香豆素成分进行HPLC分析与比较。结果表明,HPLC新方法适合于蛇床子成分的质量控制,其中蛇床子不同提取液中各香豆素成分含量测定差异较大,且以超声提取为最佳。     

大黄药材、浸膏及其清胃颗粒剂质量的RP—HPLC分析

建立适合大黄药材、大黄浸膏及清胃颗粒剂过程分析与质量控制的反相高效液相色谱方法.采用YWG-ODS 10μm(200×4.0mm ID)色谱柱,流动相组成为甲醇-水-高氯酸(75250.1V/V),检测波长254nm,流速1.0ml/min,柱温控制20℃.以芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的峰面积作为定量信息,标准曲线外标法测定样品含量.结果表明,清胃颗粒剂中五种游离蒽醌成分的平均加样回收率分别为芦荟大黄素95.61%(RSD3.05%)、大黄素98.03%(RSD2.77%)、大黄酸100.1%(RSD2.21%)、大黄酚97.49%(RSD3.64%)和大黄素甲醚96.79%(RSD4.12%).本法操作简便、检测灵敏,适合于大黄药材、大黄浸膏及清胃颗粒剂过程分析与质量控制.     

甘蓝型油菜花粉超低温保存及其花粉活力的研究

研究超低温方法保存油菜花粉过程中的预冻和解冻处理方式对油菜花粉的形态、大小及其活力的影响。结果表明:采用0℃(12h)→-4℃(12h)→-20℃(12h)→-80℃(12h)变温预冻处理和用-80℃(1h)→-20℃(1h)→4℃(1h)逐步解冻后对油菜花粉形态大小和活力影响最小。而经过25℃室温解冻法和42℃快速解冻法处理后油菜花粉出现破裂,破裂率分别达到7.6%和9.1%。同时液氮保存油菜花粉的时间长短对花粉的大小及活力影响不大。     

甘蓝型油菜CMS微粉活力研究及其对杂交制种纯度的影响

通过对微粉和正常花粉在不同和同一雌蕊上的结实力比较和结实竞争研究,表明微粉虽能够授粉结实,但活力低、萌发慢、持续时间短、受精结实能力差,与正常花粉的竞争力弱,授微粉后间隔３－７２ｈ,再授恢复系花粉,其结实表现仍可达到或超过单独授恢复系花粉的结实率,最高的还超过了只授恢复系花粉结实率的９．５７％;授微粉后间隔０－４８ｈ再授恢复系花粉仍可获得７０．３５％－９１．００％的异交率,说明微粉对油菜杂交制种过     

植物乳杆菌高活力保存方法的研究及其应用

本研究旨在探讨植物乳杆菌的高活力保存方法,为植物乳杆菌饲料添加剂规模化、工业化生产奠定基础。采用4℃低温保存法、36℃烘干后常温保存法、阳离子活性载体保存法等3种方法对植物乳杆菌进行活力保存比较试验。以保存后活菌数不低于原值50%为参照标准,结果显示,对照组可保存15 d,4℃低温保存法可保存30 d,36℃烘干后常温保存法只能保存一周,而阳离子活性载体保存法则可保存2个月以上。结果表明,阳离子活性载体保存法可应用于植物乳杆菌饲料添加剂的规模化、工业化生产实践中。     

高活力胰岛素研究：B3—Lys猪胰岛素的结晶及初步晶体学分析

用化学半合成方法制备的Ｂ３—Ｌｙｓ猪胰岛素（Ｂ３ＫＰＩ）具有与天然猪胰岛素相同的体内生物活力,但其体外生物活力及受体结合活力比天然猪胰岛素高。本文报道Ｂ３ＫＰＩ的晶体生长,初步晶体学分析及衍射数据与处理。Ｂ３ＫＰＩ晶体的衍射分辨率可以达到２．１Ａ（１Ａ＝０．１ｎｍ）,空间群为Ｒ３,晶胞参数为：ａＨ＝ｂＨ＝８２．２３ＡＣＨ＝３４．１７Ａ．收集了一套２．１Ａ分辨率的衍射数据,数据完全度为８１％,Ｒｍｅｒｇｅ为２．９％。     

B27K—去B链C端三肽胰岛素的制备、生物活力与自聚合性质

液相合成五肽Gly Phe Phe Tyr Lys(Boc)Obut,与B链C端去八肽胰岛素酶促缩合得到B2 7K 去B链C端三肽胰岛素(B2 7K DTrI,B2 7K destripeptideinsulin)。用小鼠惊厥法和小鼠降血糖法测得B2 7K DTrI的整体生物活力为标准胰岛素的 80 % ,B2 7K DTrI与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合能力为标准胰岛素的 ( 12 5± 13 ) %。用凝胶过滤法证明B2 7K DTrI自聚合性质降低 ,具有与去B链C端五肽胰岛素相同的单体性质。在B2 7K DtrI结构中 ,B2 7T被K取代 ,其优点是在酵母中表达其前体后 ,可以很方便地通过胰蛋白酶水解获得     

HPLC特征图谱结合含量测定的白芍及其炮制品的质量对比研究

建立白芍、炒白芍、酒白芍、硫熏白芍HPLC特征图谱,并结合多成分含量测定,为白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍的质量控制提供参考。采用Intersustain C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液,流速为每分钟1 mL,梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。14批白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍的特征图谱,标定了6个共有峰,并均被指认,分别为没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷,而硫熏白芍标定7个共有峰,峰7为白芍硫熏后产生;且各色谱谱峰有较好的分离,但不同炮制品特征图谱存在一定差异;含量测定结果显示,白芍炒制、酒制及硫熏后,6种成分均有不同程度的变化;借助中药色谱指纹图谱相似度评价系统和SIMCA-P13.0软件对14批白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍进行相似度和正交偏最小二乘判别(OPLS-DA)分析,所建立的白芍和炮制品及硫熏品的质量评价方法稳定性、重复性好,可用于白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍的质量控制和评价。     

Relationships in hydrogen metabolism between hydrogenase and nitrogenase in phototrophic bacteria.

Purple bacteria Rhodospirillum rubrum and Thiocapsa roseopersicina form two enzymes, hydrogenase and nitrogenase, which participate in hydrogen metabolism. H2 photoproduction in these bacteria is associated mainly or completely with the action of nitrogenase. The soluble and membrane-bound hydrogenases of T. roseopersicina have similar physicochemical properties (mol. weight, subunit composition, N-terminal amino acids, Fe2+ and S2- content, pl. Eo'). In comparison with other hydrogenases the enzyme from R. rubrum and T. roseopersicina evolve H2 with high rate from reduced cytochrome c3, but not from ferredoxins. H2 production and N2 fixation take place in the presence of NAD(P)H. NADP-reductase, ferredoxin and cytochrome c3 participate in this reaction. Possible relationships between hydrogenase-nitrogenase in the metabolism of molecular hydrogen are discussed.     

A simple hydrogenase-linked assay for ferredoxin and flavodoxin.

Ferredoxin or flavodoxin mediates electron flow from H₂-hydrogenase to metronidazole[1-(2-hydroxyethyl)-2-methyl-5-nitroimidazole] to cause the reduction of the latter compound. The reduction of metronidazole in solution is irreversible because the reduced compound further decomposes. Since metronidazole loses its absorption peak at 320 nm upon reduction, the rate of reduction can be monitored spectrophotometrically. When a solution of metronidazole at 0.1 to 0.5 mm is supplemented with ferredoxin- andflavodoxin-free hydrogenase and placed under H₂, the rate of metronidazole reduction is proportional to the amount of ferredoxin or flavodoxin added. This forms the basis for an assay that can measure 10 to 1000 ng of ferredoxin or 100–1000 ng of flavodoxin/ml of assay mixture.     

Repair of x-ray damage in aging WI-38 cells

Rate of strand rejoining and the ability to perform repair replication were determined in young ad old X-irradiated WI-38 cells. No differences in either process were apparent and we conclude that reduced efficiency in one or both of them is not responsible for _{in vitro} aging of human cells.     

Oxidation reduction properties of nitrogenase from Clostridium pasteurianum W5

Dithionite reduced azoferredoxin and molybdoferredoxin from $\text{Clostridium pasteurianum}$ W5 were oxidatively titrated with various electron acceptors. The AzoFd gave up 0.87 electrons per AzoFd monomer (27,500 mol. wt.). The oxidation reduction potential of AzoFd, determined by equilibrium with redox dyes, was ?0.240 V. Dithionite reduced MoFd gave up 3.6 electrons per MoFd tetramer (220,000 mol. wt.). The oxidation reduction potential for MoFd was ?0.070 V. Because the potential of $\text{this}$ MoFd half cell is so positive, the electrons removed during this oxidation may not be those that reduce dinitrogen.     

FNRD在聚球藻7002中的表达及其性质研究

置于Lac启动子和Kan启动子控制之下的petHL基因分别转化蓝细菌Synechococcussp.PCC7002,从Southern blot分析结果推断,petHL已整合到蓝细菌染色体DNA上。Western blot分析表明,转入蓝细菌体内的petHL基因得到了表达,且Kan启动子启动该基因表达的效率高于Lac启动子。内源FNRD表现出与FNR全酶相同的稳定性。Triton X-114分相实验结果显示,部分FNRD可进入Triton X-114相,推测这些分子可能发生了脂酰化修饰。同时FNRD在体内可能参与了光合电子传递而使光合放氧速率增加。     

蓝细菌Anacystis nidulans R-2藻胆体中43 Kd蛋白细胞定位的初步研究

高盐浓度条件下分离了蓝细菌Anacystis nidulans R-2的藻胆体,藻胆体中存在一种43kD的蛋白。Western blotting分析表明,该蛋白能与蓝细菌Fd：NADP氧还酶中FNRE占构域的抗体发生反应,解聚的藻胆体具有FNR黄递酶的活性,初步证明该43kD蛋白就是Fd：NADP氧还酶。Triton X-114分相实验表明,这种43kD的蛋白不能进入Triton X-114相。对藻胆体的部分解聚合实验表明,富含外周杆的组分中不存在43kD的蛋白。