生物防治

931345苏云全杆菌哥斯德变种的分批培并〔英〕/Bihari,’V。…1 J.Microb.Bioteehnol一1092,6(2)一。2~99〔译自DBA,i,。含,11(20);‘,2一11翁7〕 在分批进料系统中研究了苏云金杆菌K钟“-协打变种(Btk)菌株HD一L的培养条件。实验步骤有分批发酵和浓缩营养液的进料。营养进料率     

不同培养基中MDCK细胞生长及代谢动力学研究

[目的]为筛选适应于MDCK细胞大规模培养的最佳培养基并揭示其代谢动力学规律。[方法]选取商业化的培养基DMEM(试验组A)、EMEM(试验组B)、MEM(试验组C)、M199(试验组D)、DMEM/F12(试验组E)及DMEM:EMEM复合培养基(试验组F)用于MDCK细胞传代培养,研究不同培养基对MDCK细胞生长特性的影响,分析MDCK细胞生长过程中葡萄糖(Gluc)、乳酸(Lac)、谷氨酰胺(Gln)和氨(NH4+)的代谢情况,并进一步进行细胞工厂的培养验证。[结果]结果表明MDCK细胞均能在试验组A、B、E、F四种培养基中生长,其最大增殖浓度E A F B,差异显著(P 0. 05);倍增时间B F A E,差异显著(P 0. 05);细胞比生长速率E A F B,差异不显著(P 0. 05)。不同培养基培养MDCK细胞对数生长期平均葡萄糖比消耗速率、谷氨酰胺比消耗速率及氨比生成速率差异均不显著(P 0. 05),乳酸比生成速率差异显著(P 0. 05)。在试验组A和E培养基中细胞能实现高密度增殖,再将其进行细胞工厂扩大培养验证,发现两种培养基在培养48 h时均能达到单层致密,且细胞密度均达到8. 0×10~8/cells以上,差异不显著(P 0. 05)。[结论]综合研究结果及规模化生产成本因素,采用DMEM培养基(试验组A)培养MDCK细胞,其最大增殖浓度达到6. 4×10~5/m L,倍增时间为22. 835 h,比生长速率为0. 558,可进行大规模培养,为工业化生产提供依据。     

两性绵霉菌生物量生产的营养需求和发酵条件的研究

对两性绵霉菌(Achlya ambisexualis)生长所需的大量元素和微量元素进行了调查,在PYG培养基础上研制出ZJK培养基.两性绵霉菌在ZJK液体培养基中的倍增时间为3.5小时,产生的生物量约5.5g/L,为PYG的3倍,体积生产率为0.073g/(L·h),为PYG的2倍.最适生长温度为29℃.最适pH为6.5,pH8时孢子萌发被完全抑制.采用pH6.5控制的生物量培养,碳素和氮素转化率明显提高,分别为47.1%和64.8%,体积生产率比非pH控制的分批培养提高50%.在20L发酵罐中,生长稳定期的氧摄取速率为7.0-8.8mol/(L·h).采用分批补料发酵法,生物量达到15g/L.     

疫苗

923619乙型肝炎表面抗原在乳酸克会维醉母中的克隆和表达〔英〕/Martinez,E.…2 Bioteehnol.Lett一1092,14(2)。一53~56〔译自DBA,1992,11 (7),92一03754〕 为了用乳酸克鲁维酵母生产乙肝病毒表面抗原,构建了含lac4基因启动子(来自质粒BSLAC4)、表面抗原基因(来自质粒pHBI)、LAC4终止区及其后的URA3基因(来自酿酒酵母)和LAC4基因的3‘非编码区(来自质粒pJAAS12)的质粒pDLHZ。用含表达盒区的pDLHZ转化乳酸克鲁维酵母VDI,转化子于1%酵母粉、2%蛋白膝和2%葡萄糖的培界基中进行摇瓶培养(21摇瓶装40001培养基,于50℃、25orPm培养…     

毕赤酵母发酵生产颗粒性乙肝表面抗原的条件优化

乙型肝炎病毒的流行对人们的生命健康造成了极大的威胁, 而有效准确的诊断和预防性疫苗是阻止其流行的主要手段, 乙肝表面抗原是诊断试剂和疫苗的主要成分。本试验在构建稳定表达HBsAg的毕赤酵母菌株后, 对其发酵条件进行了研究。采用摇瓶分批培养方法, 探讨了不同培养基、溶解氧、诱导物甲醇的浓度以及pH值等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响。在10 L发酵罐上采用分批补料培养的方法研究了进行扩大培养生产重组HBsAg。结果表明, FBS无机盐合成培养基是理想的工业发酵培养基, 溶解氧对菌体的生长与表达有显著的影响, 甲醇诱导最佳终浓度为1% (V/V), 发酵的最适pH值为5.4~6.0。发酵罐放大培养后, ELISA和 SDS-PAGE分析表明重组HBsAg获得了高效表达, 最终菌体生物量达到310 OD600, 表达量达到27 mg/L。电子显微镜观察表达重组乙肝抗原可以自组装为22 nm类病毒颗粒, 为HBV的新一代早期血清学诊断和疫苗的大规模生产提供了一定的参考。     

食品上的应用

921951用一种黑蛋集菌(Cyathus helenae)降解稻米副产物〔英〕/Kuhad,R.C.…了Indian J.Mi-crobiol一1991,31(3)一291~295〔译自DBA,1991,10(21),91一12271〕 C,ath”sh“le“ae生长于含有稻草或稻壳作为唯一碳源的培养基上,显示适中的生长。该真菌在稻草和稻壳表面形成菌落,并浸蚀表皮。发酵还造成基质松弛,这可能是胧木素作用的结果。稻谷废料由培养滤液在28℃发酵62天后。稻壳中木质素损失为8.3%,稻草中为5.3%。木质素降解由滤液中过氧化物酶表示。发酵培养基中还原_糖数量逐步增加。C.h“z“”a。可用于改善稻谷废料的可消化性。(…     

组织与原生质体培养

922236种间杂文水稻杂种的花药愈伤诱导及绿色植株的高频再生[英〕/Rout,J.R.…2 Euphytiea一1992,54(2)一155~159〔译自DBA,1991,10 (23),91一13558〕 将种间水稻杂种o,,;a sa‘￡。a LJ.火0.,。-f‘尹0900 Griff.的花药培养在N6和Potato一2培养基上,每一培养基补加7种组合的植物生长因子 (2,4一D、NAA、Kn)和6%(w/v)蔗糖。花药在连续弱光下培养,把2一3周龄的愈伤移到改良MS再生培养基里。所有培养物均保持在23~25℃下。在Potato一2培养基上花药愈伤的诱导率为9.9~23.9%,在N6培养基上为3.9~9.4%。2二g/l NAA最适于愈伤诱导。在两…     

环境保护及农业废物利用

923477钙、铁和pH对微生物矿化有机化合物的磷酸有效性的影响〔英〕/Robertson,B.K.…了Appl.Environ.Mierobiol一1992,55(i)一38~41〔译自DBA,1992,11(5),92一02972〕 研究了pH、Fe和Ca对假单胞菌(尸se“d。哪-o几as sP.)B和棒杆菌(Co,军忍ebaete,云“二sP.)42生物降解对一硝基苯酚、苯酚和葡萄糖时需磷量的影响。葡萄糖矿化迅速,假单胞菌在含5和10mM磷酸盐的溶液中延伸生长,但其降解的速度和程度以及生长情况均低于在含0.2mM磷酸盐的培养基上的状况。在含对一硝基苯酚或苯酚培养基及纯磷酸盐溶液上的棒杆菌情况相同。在铁浓度高的…     

细胞工程

880936微载体培养动物细胞的流体动力学效应〔英」/Cr。ughan,M.S.…了Bioteehn-01.Bioeng一1987,29(1)一130一141〔译自CBA,1987,(5),2041〕 对于微载体培养中的流体动力学现象作了研究,以便更好地设计大规模生产用的反应器。文中用新的概念和理论模型对新旧资料作了分析。(梁博文)88093了通过对营养物的控制降低废物的分泌:在血清培养哺乳动物细胞时使产物和细胞产率达到最大值的可能采取的方案〔英〕/G laeken,M.W.…了Bioteehnol.Bioeng一1986,28(9)一1376~1389〔译自CBA,1987,(5),2118〕 在培养基中生长的哺乳动物细胞会分泌一…     

动物细胞培养及单克隆抗体

921758浦定苏云金芽抱杆菌的活生物t浓度〔俄〕/Mura-tov,V.S.…1 Mikrobiologiya一1901,60(3)。一546~551〔译自DBA,1091,10(21),91-12214〕 发展3一种用来测定苏云金芽抱杆菌(Ba成-Z妞。比。八:好e:就幻培养物细胞活力及优化培养基的方法。在复合培养基上培养该菌2个亚种de-“‘rol““5 49/7和K助,sta无￡Z一52。用苯胺蓝和荧光素染色,在荧光显微镜下检测细胞、抱子和晶体。在营养生长阶段,用两种染料所得结果相似,表明在此阶段基本无死细胞,在颗粒形成阶段,16~25%(菌株49/7)和10~25%(Z一52)的细胞无活力。还可测定此阶段(从颗粒中…     

组织与原生质体培养

921417马铃薯悬浮细胞再生植株表型和蛋白质的变异〔英〕/Lindeque,J.M.…厂Euphytiea一1991,54 (1)。一41~44〔译自DBA,1991,10(15),91一10501〕 由体外培养的马铃薯(召ola。。。t。吞e,o;。二)小植株茎节间切段诱导愈伤,并将愈伤培养在含3mg/12,4一D和0.2mg/l KN的改良MS培养基上。将易碎愈伤接到含1.5 mg/l2,4一D、0.5 mg/lNAA和0.25mg/1 KN的MS液体培养基中。继代3次后,将悬浮细胞过滤并植板于固体Lam培养基。变绿后3周,将其转到植物再生培养基上。小植株转到MS培养基上迸一步生长和生根。测定的27株植株中,3株生长不良、16株…     

果梅花粉离体萌发及花粉管生长特性研究

研究了果梅(Prunus mumeSieb.1et Zucc.)花粉在不同培养基组分、花粉不同培养密度和不同温度及培养时间的离体萌发和花粉管生长特性.结果表明:细叶青花粉萌发及花粉管生长最适宜的液体培养基为30mmol/L MES(pH 6.5)缓冲液中含20%蔗糖,0.01%硼酸,20%PEG-4000,0.03?(NO3)2?4H2O,0.02%Mg-SO4?7H2O;萌发率达45.03%,花粉管长度达597.2μm.适宜于果梅花粉萌发和花粉管生长的花粉粒密度为20~80粒/μL.培养温度过高或过低都不利于果梅花粉的萌发和生长,25℃时花粉萌发和花粉管生长最好.细叶青"、月世界"、莺宿"3个品种的平均萌发率为48.6%,平均花粉管长度为762.3μm.果梅花粉在不同培养温度下,萌发及生长不同,在25℃条件下花粉管生长速度最快,集中在0~12 h内,3个品种花粉管平均生长速度为58.5μm/h.     

食品上的应用

941219由饭化葡枪酸杆菌从山梨醉生产山梨枪的优化仁英〕/Rosenberg,M.…j Aeta Bioteehnol。-19,3,13(3)一269~274仁译自DBA,1993,12 (22),93一12907〕 研究了影响氧化葡糖酸杆菌工业菌株的静止期培养物转化山梨醇为山醇糖的参数。山梨醇浓度对耗氧的影响符合米一曼动力学。20~2009/l的山梨醇无抑制效应。高浓度付产物、山梨糖,抑制耗氧率。pHS、35~40℃时山梨醇转化最佳。30℃时培养物最稳定。在持续34小时(50℃、soorp。、1.0vvm通气、。.1 mPa压力、5%接种量、初始山梨醇浓度2009/l)的分批培养中,山梨糖产率为理论值的96纬。在分批…     

吸水链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的补料研究

在吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分批发酵研究的基础上,通过在菌体生长阶段指数流加葡萄糖,进行高细胞密度培养,获得了较高的菌体量;待菌体生长进入产酶期后,通过补加氮源,为产酶提供充足的氮源,其中通过流加蛋白质氮源,可以减少蛋白酶对成熟MTG的分解,促进产酶。结果表明,8~16 h采用较高的的比生长速率(0.15 h-1),后期降低比生长速率(0.10 h-1),此时得到的菌体量较高,可达到36 g/L,比分批发酵下的菌体量提高了80%。同时在培养基中添加50g/L的豆饼粉,最终酶活可达到5.79U/ml,提高了83%。     

体外培养和遗传育种

890896高产松节油姜的分生组织培养和微繁殖〔英〕/5 ingl,,N.5.了J.Horti。.Sei一1988,63(2)一321~327〔译自DB-八,1 988,7(16),88一08018〕 有必要丈勺沈无病而又高产含油树脂的妥 (Zingib。,·ofjie‘,:al。)牛戊才‘{之。将淡黄色的嫩芽培养在无激素的MS培养基少:,自芽切取分生组织并培养在每升含有20%椰子乳、o.smg带基腺缥吟和0.4m艺1131噪丁酸(出j\)的3/4量MS培养基上。为进i:J’.微繁殖,使用了一种含有不同浓度BA、出A、茶乙酸(NAA)和激动素的3/4最的MS培养基,进行了固体和液体(振荡或静l日的培万。培养条件为27℃,pHS.8和…     

动物细胞培养及单克隆抗体

920533以柠檬酸铁替代转铁蛋白的无蛋白培养基培养鼠-鼠杂交瘤〔英〕/Eto,N一了Agric.Biol.Chem一1901,55(3)一563一865〔译自DBA,1991,10(12),91一07039〕 于37“C、通入湿润5%CO:/95%空气条件下,将鼠杂交瘤IA一4细胞保存在补加10产g/ml胰岛素(I)、35拜g/ml人转铁蛋白(T)、10拼M乙醇胺(E)和2.snM硒(S)(ITES)的DF培养基中。试验了各种低分子量含铁化合物对培养于ES一DF培养基中的IA一4细胞的生长刺激作用。柠檬酸铁的作用最大,与转铁蛋白相当。柠檬酸铁钱的作用也很大;硫酸亚铁和硫酸高铁的作用较小。硫酸铁钱几乎无作用,氯化…     

微载体浓度与细胞接种密度对ST细胞生长的影响

选择合适的微载体浓度、细胞接种密度以提高微载体利用率,优化微载体培养体系猪睾丸细胞(Swine testicle cells)的贴附生长与维持。使用DMEM补加10%血清、LSM(Low serum medium)两种培养基考察微载体浓度、细胞接种密度对细胞生长维持的影响,进而比较ST细胞在不同条件下对Cytodex1微载体的利用率。结果显示,使用LSM在T150方瓶中连续传代培养30d,平均比生长速率为0.626d~(0-1),是DMEM补加10%FBS培养基的1.15倍。选择10×10~5cells/mL细胞接种3g/LCytodex1搅拌瓶体系,最大细胞密度为38.3×10~5cells/mL,微载体利用率上升到58.8%。在灌注培养体系中培养ST细胞15d,最终细胞密度达到36.6×10~5cells/mL,扩增了13.6倍。微载体悬浮培养的使用一方面有利于ST细胞的贴附与生长,实现高密度生长,另一方面增加了微载体的使用成本,选择合适的微载体浓度、细胞接种密度,能够最大化利用微载体与培养基中的营养物质实现细胞的最优生长。     

杜仲细胞悬浮培养产黄酮及其动力学研究

本文应用正交设计对杜仲细胞悬浮培养的基本培养基和植物生长物质浓度进行了筛选,并对影响杜仲细胞悬浮培养和总黄酮含量的不同因素进行了考察。结果表明,B5培养基+0.5mg/L NAA+0.6mg/L 6-BA、蔗糖30g/L、初始pH 5.0-5.5、接种量20g(FW)/L以及摇床转速110r/min为杜仲细胞悬浮培养的适宜条件。通过对杜仲悬浮细胞生长和代谢动力学的分析表明：杜仲细胞悬浮培养生长符合Logistic生长模型,最大比生长速率( m)为0.417d-1;细胞基于蔗糖的真正比生长得率(YG)与维持系数(m)分别为0.619g/g和0.0206g/(g·d-1);黄酮合成属部分生长耦联型,可用Luedeking-Piret模型进行描述。研究结果为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

B16及其克隆亚系细胞分泌乙型肝炎表面抗原的稳定性、动态和最佳条件

B16及其亚系细胞B16-7和B16-12在氨甲喋呤压力下连续传代7个月,以B16-7和B16-12分泌乙型肝炎表面抗原(HBsAg)最为稳定。停用氨甲喋呤,B16分泌HBsAg的量逐步下降。用单层细胞培养法对B16-7在不同条件下分泌HBsAg的动态研究证明:细胞常规传代长成单层后换液,血清量降至2％,孵育温度降至32℃,每48小时收获换液一次,连续收获4～5次,按Abbott试剂盒的曲线估计HBsAg的累积量可高达2.5mg/升左右,即1.3×10~(12)g/细胞/24小时。     

疫苗

922127在有血清粗换因子的人二倍体细胞系中生产疫苗的可能性〔英〕/Candal,F.J.…了Biologieals一1991,19(3)。一213~218〔译自DBA,1991,10 (23),91一13467〕 美国食品和药物管理局批准了用MRC一5和W工一38细胞系生产抗巨细胞病毒(CMV)和痘带状疤疹病毒(VZV)的疫苗。研究了这两种细胞系和病毒在含血清置换子LPSR一1(低蛋白血清置换子)中的生长能力。在含10oU/ml青霉素,100林g/ml四环素,2 mM谷酞胺,20mM HEPES和1.6%LPSR一i加2%小牛血清(FCS)或10%FCS(对照)的Eagle产s基本培养基中细胞活力在90%以上。补充LPSR一i可加强Wl…