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乙酸对重组大肠杆菌生长及个源基因表达的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
在重组基因工程菌DH5α(PG-FGF)的高密度培养过程中,发现培养液中有大量代谢副产物-乙酸的产生和积累,乙酸的存在抑制了工程菌的生长及外源的表达。研究民乙酸在M9培养基中对工程菌DH5α(PG-FGF)及生长外源基因表达的影响。结果表明,乙酸的存在不仅导致重组菌生长速率的降低及延迟期的增长,而且对外源基因产物的表达具有强烈的抑制作用,这为该工程菌的高密度培养及外源基因产物的高表达打下了基础。 相似文献
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大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白基因表达系统。因其遗传背景清楚,容易培养,能大规模发酵,并有大量可供选择利用的克隆和高效表达载体,而成为人们克隆和表达外源基因的首选菌株。但是,许多外源蛋白基因在大肠杆菌胞内表达时,往往不能自发折叠卷曲生成有一定空间结构和特定生物功能的蛋白质,而是以一种不溶性的沉淀即包涵体的形式 相似文献
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影响大肠杆菌中外源基因表达的因素 总被引:41,自引:1,他引:40
大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但是,不同的外源基因在表达效率上却有很大的差异,文章综述了影响大肠杆菌中外源基因表达的因素,这将有助于认识大肠杆菌中外源基因表达的规律,以便采取有效的方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率. 相似文献
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外源基因在大肠杆菌中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌表达系统中表达产物可能定位于大肠杆菌空间结构的不同位置:胞质,胞质膜,胞周质,胞外膜和胞外培养基,五种表达定位方式各有其特点和用途 。 相似文献
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汉森酵母表达载体的构建和人血管生成抑制素基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
汉森酵母(H.polymorpha)是一类能以甲醇为唯一碳源和能源的甲基营养酵母,具有高表达外源基因、易于高密度发酵和产业化的特点。应用PCR技术扩增汉森酵母甲醇氧化酶(Methanol oxidase MOX)基因启动子和转录终止序列,并与汉森酵母Leu基因(Hpleu2)和人血管生成抑制素基因一起重组进大肠杆菌质粒pSP72,构建了整合型表达载体pSMA17,采用LiAc法将pSMA17转入汉森酵母A16(leu),筛选出阳性转化子H.polymorpha A16(pSMA17)。转化子在YPGE培养基中培养至对数生长后期,用甲醇进行诱导表达。ELISA和SDSPAGE分析结果证明人血管生成抑制素已获表达,表达产物分泌至培养基中。Western blot结果显示重组的人血管生成抑制素能与抗人纤溶酶原抗血清特异结合,具有免疫原性。 相似文献
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外源蛋白在大肠杆菌中的表达定位策略 总被引:5,自引:0,他引:5
外源基因在大肠杆菌中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌表达系统中表达产物可能定位于大肠杆菌空间结构的不同位置:胞质,胞质膜,胞周质,胞外膜和胞外培养基,五种表达定位方式各有其特点和途径。 相似文献
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