纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人乙型肝炎表面抗原

目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法,研制可应用于乙肝表面抗原(HBsAg)快速定量检测的层析试纸条。方法:用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联的方法标记纳米磁珠,喷膜仪喷点硝酸纤维膜;根据双抗体夹心法原理建立免疫层析试纸条,对HBsAg特异性抗体捕获的磁信号进行检测,并对磁信号检测结果进行统计学分析和评价。结果:建立了HBsAg纳米磁性免疫层析试纸条,最低限度检测为0.1 ng/mL的HBsAg抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准,且检测时间控制在5 min内;经检测临床血清标本证实,该方法可根据磁信号定量检测乙肝患者血清中HBsAg的浓度。结论:HBsAg纳米磁性免疫层析方法具有简单快速、灵敏度高的特点,可应用于临床血清样本中HBsAg的检测;该方法为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。     

胶体金免疫层析法快速检测沙门氏菌

为了建立一种简便快速的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测沙门氏菌,将抗沙门氏菌多抗用抗原吸收法封闭与其他肠道杆菌的交叉反应,标记胶体金溶胶制成探针,采用多膜复合的方法制成免疫层析条。结果表明该层析条灵敏度为2.1×106cfu/ml,不与其他肠道杆菌反应,37℃放置33天,检测结果无差异。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

磁性分离酶联免疫技术检测人类绒毛膜促性腺激素及其临床意义分析

应用磁性分离酶联免疫检测技术（ＭＡＬＡ）对２１０名正常非妊娠妇女的血清进行ＨＣＧ定量测定,平均值３．５４９ｍＩＵ／ｍｌ血清。另外,对１０名不全流产患者、１５名葡萄胎患者及５名早孕误诊患者血清进行ＨＣＧ定量测定,均作出准确诊断。ＨＣＧ定量测定在临床诊断上有重要意义。该法具有灵敏、快速、准确、无污染等特点。是目前临床生殖内分泌激素定量测定的好方法。     

量子点免疫层析快速定量检测HCG

近年来,量子点以其独特的光学性质被广泛应用到医学检测上.血清中人绒毛膜促性腺激素(HCG)的含量是诊断早期妊娠的常用指标,也可用于异常妊娠性疾病的早期发现和鉴别诊断.本文采用超声乳化法制备了高质量的亲水性量子点,并将其与免疫层析试纸条技术相结合,在此基础上自主研发了用于试纸条检测的量子点免疫荧光检测仪,对血清中HCG的含量进行了高灵敏度的快速定量检测.结果表明,对于血清中的HCG含量检测,最优检测条件为加样体积50μl,反应时间15 min,检测的灵敏度达到0.85 U/L,高于商品化的胶体金试纸条.这种检测技术简单、快速、灵敏,有望在其他蛋白质类标志物的检测中得到广泛应用.     

磁性纳米颗粒介导基因转染的研究进展

介绍了磁性纳米颗粒介导基因转染的最新研究进展,面临的主要问题以及将来的发展方向。     

磁性纳米颗粒作为基因转染载体的研究

通过扫描电子显微镜和Zeta电位仪对磁性纳米颗粒的形貌、粒径、表面电位等进行了表征。利用凝胶电泳阻滞试验分析磁性纳米颗粒与DNA的结合情况,研究磁性纳米颗粒对DNA的保护效果,运用MTT和流式细胞术分析磁性纳米颗粒对细胞的毒性。以绿色荧光蛋白基因为报告基因进行293T细胞的转染,研究磁性纳米颗粒与质粒DNA不同比例条件下对293T细胞的转染效率,并与脂质体(Lipofectamine2000)介导的转染进行比较分析。结果表明,磁性纳米颗粒与DNA可以稳定结合,可以保护DNA免受酶的消化作用,当磁性纳米颗粒与DNA比为1 1时,转染效率最高,优于脂质体(Lipotamine2000)介导的转染,且对细胞的毒害作用小于Lipotamine2000。     

一种新型免疫层析技术在临床乳腺癌Her-2蛋白定量检测中的应用

建立一种靶点蛋白质快速定量检测方法。在原有侧向流动免疫层析技术的基础上,通过优化层析材料和纳米微球的均一性、改进检测区的检测方法,经逐点扫描技术,建立标准浓度曲线,以达到对临床靶点蛋白质的定量检测。以乳腺癌组织中的Her2表达为例,通过对已知浓度样品的检测,验证本技术方法的准确度大于96%。另外,以蛋白质免疫印迹作为组织中特定蛋白质检测金标准,分析临床肿瘤组织中Her2蛋白的含量,其准确率也达到95.5%,而免疫组织化学方法检测准确率仅为69.58%。新型免疫层析法检测结果与靶向治疗患者的愈后密切相关(P<0.01)。改进后的新型免疫层析方法能够准确地对临床靶点蛋白质进行定量检测,而且结合侧向流动技术的简单、快速和易用性,这种新型检测方法可以广泛应用于临床组织标本、血液标本和体液标本中靶点蛋白质的临场定量检测,在一定程度上可以替代免疫组化技术。     

磁性纳米颗粒固定化乙醇脱氢酶的研究

本研究采用3-丙氨基三乙氧基硅烷(APTES)和戊二醛修饰包裹有SiO2磁性Fe3O4纳米颗粒表面,将其作为固定化载体固定化乙醇脱氢酶,研究固定化条件对固定化效率的影响,并对固定化酶性质进行分析。研究发现,当Fe3O4@SiO2纳米颗粒修饰上氨基和醛基后依然具有良好的水分散性和胶体稳定性,适合作为固定化载体。通过单因素优化,发现当最适给酶量为11. 3U/100 mg,搅拌转速为150 r/min,固定化p H和固定化温度分别控制在6. 5和5℃～15℃,固定化时长为45 min时,具有较好的固定化效果,固定化率可达到60. 2%。在此条件下制备得到的固定化酶与游离酶相比,固定化酶具有良好的耐高温和耐碱性。所得固定化乙醇脱氢酶在连续使用8次后,固定化率仍保留在57%左右,表明该固定化酶具有较好的操作稳定性,可为连续生产NADH提供技术依据。     

磁性氧化铁纳米颗粒及其磁共振成像应用

磁性氧化铁纳米颗粒在磁共振成像方面的应用,已经在全世界范围内得到了广泛的关注,相关研究也被各国科学家高度重视.目前,磁性氧化铁纳米颗粒正在从早期的基于被动识别的肝部磁共振造影,快速转向基于主动识别的磁共振分子影像应用.本文将围绕磁性氧化铁纳米颗粒的生物体内应用,着重介绍磁性纳米颗粒的制备及其在疾病诊断,尤其是在肿瘤早期...     

Follow-up of Hydatidiform Mole by Radioimmunoassay of Human Chorionic Gonadotrophin

An improved method for the follow-up of patients delivered of a hydatidiform mole using radioimmunoassay of human chorionic gonadotrophin is employed to ensure adequate sensitivity. Four illustrative case histories are described. Their HCG findings are presented to show that this is the principal basis on which decisions should be made.There are three aspects to the work of the laboratory. The technical work of the assay, the clerical effort of patient follow-up, and the clinical interpretation of results. The laboratory keeps a close check on follow-up (one of its most important functions) and receives specimens direct from patients. Overall control of all three aspects is by a clinician. It has been found useful to organize a special clinic for these patients to be seen. In this region it has been possible for this to be run by the same clinician.     

hCG对绒癌细胞系MMP-2和MMP-8表达的影响

为了探讨人绒毛膜促性腺激素（hCG)对绒并且吕细胞侵袭性相关基因表达的影响作用。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测方法,观察了不同浓度hCG不同处理时间对JEG-3绒癌细胞系表达基质金属蛋白酶（MMP-2和MMP-8）的影响。结果显示,绒癌细胞系JEG-3表达MMP-2和MMP-8;分别用0、50、500、5000、25000IU/LhCG处理48h后,JEG-3细胞中MMP-2mRNA的含量无明显变化。MMP-8mRNA的表达则被诱导,并随hCG作用浓度增高而增强,进一步研究处理时间对MMP表达的影响。结果发现经25000IU/LhCG处理的JEG-3细胞,MMP-8的表达随处理时间的延长逐渐增强,而MMP-2的表达则在第6h被显著诱导后逐渐降低,以上结果提示,hCG可诱导绒癌细胞系JEG-3中MMP-2和MMP-8两种基质金属蛋白酶的表达,并因此可能对绒癌细胞系的侵袭性具有影响作用。然而hCG对这两者表达的影响规律并不完全一致。     

胶体金免疫层析法检测猪链球菌2型的研究

目的:制备胶体金免疫层析试纸检测猪链球菌2型.方法:用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒,标记猪链球菌2型多克隆抗体,通过免疫层析作用对猪链球菌2型进行检测,并对试纸条的敏感性、特异性、稳定性进行评价.结果:每毫升胶体金最佳抗体标记量为22μg/mL,最佳包被抗体浓度为2 mg/mL,最佳BSA封闭浓度为1.5%,建立的胶体金免疫层析试纸条栓出猪链球菌2型的下限为106 CFU/mL,从检测到结果判断时间为5～15 min,与其他常见致病菌及链球菌属中15个群无交叉反应.结论:获得了检测猪链球菌2型的胶体金免疫层析试纸,该法操作简便,灵敏度高,特异性强,可用于猪链球菌的快速初筛和检测.     

Protocol for Increasing the Sensitivity of MS-Based Protein Detection in Human Chorionic Villi

An important step in the proteomic analysis of missing proteins is the use of a wide range of tissues, optimal extraction, and the processing of protein material in order to ensure the highest sensitivity in downstream protein detection. This work describes a purification protocol for identifying low-abundance proteins in human chorionic villi using the proposed “1DE-gel concentration” method. This involves the removal of SDS in a short electrophoresis run in a stacking gel without protein separation. Following the in-gel digestion of the obtained holistic single protein band, we used the peptide mixture for further LC–MS/MS analysis. Statistically significant results were derived from six datasets, containing three treatments, each from two tissue sources (elective or missed abortions). The 1DE-gel concentration increased the coverage of the chorionic villus proteome. Our approach allowed the identification of 15 low-abundance proteins, of which some had not been previously detected via the mass spectrometry of trophoblasts. In the post hoc data analysis, we found a dubious or uncertain protein (PSG7) encoded on human chromosome 19 according to neXtProt. A proteomic sample preparation workflow with the 1DE-gel concentration can be used as a prospective tool for uncovering the low-abundance part of the human proteome.     

引物原位地高辛标记在绒毛细胞中快速检测Y染色体专性序列

本文报道了以人绒毛细胞为材料, 利用人类Y染色体特异片段的一对扩增引物Y~3|和Y~4|以地高辛(Digoxigenin)为标记物, 在玻片上进行细胞内引物原位延伸标记,进而快速检测Y染色体专性序列的实验结果。 Abstract:By using primers that generate DNA segments specific for the human Y chromosome,we have successfully carried out primed in situ Digoxigenin labeling at single-cell level on the glass slides.The extreme speed,simplicity and safey make it possible to be used to detect sex and diagnosis chromosome disorder.