恒河猴(Macaca mulatta)生殖周期内性类固醇激素分泌规律的研究

本文用放射免疫测定法对7只雌性恒河猴(Macaca mulatta)的20个月经周期进行了雌二醇、孕酮和睾酮的动态测定分析,其中15个月经周期的中期都有睾酮和雌二醇峰(其峰值分别为1010.7±411.3pg/ml和179.1±91.3pg/ml),孕酮在黄体期的峰值为2.54±0.65ng/ml。正常黄体期的血清孕酮水平不低于1ng/ml。20个月经周期的平均天数为28.6±5.4天,滤泡期和黄体期分别为11.9±2,6和19.2±6.3天。月经周期可用公式Y=18.92±0.03×X~2 (Y:月经周期,X:黄体期。R=0.9444)表示。实验结果表明,测定周期内三种性类固醇激素可以准确确定排卵。睾酮在生殖周期内的分泌调节机制还待进一步研究。     

恒河猴睾丸内激素调控的离体研究Ⅲ--雌激素对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响

目的采用体外无血清培养方法,研究雌激素(E2)对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响.方法恒河猴睾丸活体组织,经胶原酶消化,BSA密度梯度重力沉降分离细胞,得到的Leydig细胞置二氧化碳培养箱培养,收集培养液,应用放射免疫测定法测定培养液中的睾酮含量.结果不同剂量的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮都能促进睾酮的含量升高,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著;当孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮分别与E2合并应用时,有明显地抑制作用,同样以17α-羟孕烯醇酮的抑制作用最为显著.结论E2抑制恒河猴Leydig细胞睾酮的分泌是由于影响了3β-羟类固醇脱氢酶、17α-羟化酶以及17,20-碳裂酶的活性所致.     

恒河猴骨髓间质干细胞的体外分离培养及形态学特征分析

探索恒河猴骨髓间质干细胞（MSC）的体外分离培养方法，为其应用提供实验基础。取恒河猴骨髓细胞悬液，经梯度离心去除大部分血细胞，取含有MSC的中间单核细胞层，在含10%胎牛血清及1 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM中培养扩增，并不断换液去除杂细胞，经过18 d的原代培养，获得呈致密单层生长的MSC，其形态为较规则的长梭形细胞，排列有方向性，呈现一定的漩涡状、辐射状生长趋势。将原代细胞以1∶2传代，传代培养后期，细胞增殖速度逐渐变缓，细胞形态逐渐出现三角形、多边形及扁平宽大形等不规则形态。结果显示，恒河猴骨髓间质干细胞可在体外进行传代培养，但需进一步优化其培养条件。     

短尾猴(Macaca arctoides)和猕猴(M.mulatta)距骨形态的研究

本文对短尾猴(Macaca arctoides)和(M.mulatta)猴猕的距骨形态进行了比较研究。结果表明,距骨的一些变量,如楔形指数、距—腓骨连接面长、距骨颈长及总长在两种间存在明显差异。从距骨形态结构和多变量(三维空间模式)分析,短尾猴比猕猴具有更多的地上活动时间的可能性。     

恒河猴睾丸内激素调控的离体研究 Ⅱ.恒河猴睾丸Sertoli细胞的离体培养及激素分泌的研究

本文采用胶原酶消化和BSA密度梯度沉降的方法,建立了恒河猴睾丸Steroli细胞的无血清培养技术,研究了人促滤泡激素（hFSH）、羊促滤泡激素（oFSH）、双链环-磷酸腺苷（db-cAMP）、磷酸二酯酶的抑制剂（MIX）、霍乱毒素（Choleratixon）和Forskolin对恒河猴睾丸Steroli细胞雌二醇分泌的影响。结果表明：Steroli细胞对hFSH和oFSH的作用无明显的反应,而在同样的条件下,db-cAMP、MIX、Choleratixon和Forskolin明显地刺激Steroli细胞将雄烯二酮转化为雌二醇。     

恒河猴睾丸内激素调控的离体研究 I.恒河猴睾丸Leydig细胞的离体培养及激素分泌的研究

为了研究恒河猴睾丸的激素分泌及其调节作用,作者发展了一种简便分离睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞和用无血清培养的实验模型,研究了人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）、恒河猴绒毛膜促性腺激素（ｍＣＧ）、环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ和雌二醇（Ｅ２）对睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞激素分泌的影响。结果显示离体的Ｌｅｙｄｉｇ细胞对低剂量同源的ｍＣＧ和异源的ｈＣＧ产生睾酮都有依赖反应,而高剂量的前者对Ｌｅｙｄｉｇ细胞分泌睾酮有明显的抑制作用,后者不出现反向调节;ｃＡＭＰ和Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ对Ｌｅｙｄｉｇ细胞分泌睾酮有刺激作用;雌二醇具有明显抑制ｈＣＧ和ｍＣＧ促睾丸分泌的作用     

庚型肝炎病毒基因组RNA转录体恒河猴肝内注射感染的初步研究

庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)属黄病毒科,为单股正链RNA病毒,是新近发现的疑似引起人类肝炎的病原体[1,2],但对其致病性目前尚存在争议.GBV-C/HGV体外培养困难,不感染常规实验动物,但可感染人类和灵长类动物如黑猩猩、猴等[3-5].随着分子生物学技术的进展,一些正链RNA病毒如甲肝病毒、脊髓灰质炎病毒、登革病毒、丙型肝炎病毒等的全长cDNA克隆构建成功[6-12],这些全长cDNA克隆及其转录体被证明在细胞及动物模型中具有感染性,为我们研究GBV-C/HGV提供了一条新的可行的途径.为此我们在构建GBV-C/HGV基因组全长cDNA克隆的基础上[13],体外转录制备了RNA并直接注射到恒河猴肝脏内,进行了感染实验研究.现将结果报告如下.     

恒河猴(Macaca mulatta)卵细胞采集及体外受精的研究

对13头成年母猴,用黄体酮 前列腺索(PGF_(2a))处理,诱发月经周期,并用三种不同的处理方案,注射外激性促性腺激素诱发等超数排卵。对171个大滤泡(直径≥4mm)实行外科手术采卵,滤泡穿刺吸卵共获147个卵细胞,平均每头猴采卵11.31±6.47个,卵细胞回收率为85.96％。精液用直肠电刺激法采集,精子经TALP培养基洗涤二次,并在含10％灭活猴血清的TALP液中,加入1mM CAMP和lmM咖啡因,预孵育6～3h。卵细胞在含10％灭活猴血清的TALP或Ham'sF-10培养基中作体外成熟的培养,经约4～12h孵育,卵细胞体外成热率为28.57％。成熟的卵细胞(n=42,中期Ⅱ)和已预孵育的精子一起12～24h,并有部分在前次输精后5～12h再次输精,在42～56h后有9个受精卵继续发育至2细胞期和桑椹期阶段,体外受精率为35.71％(15/42)。     

长臀(鱼危)生长激素的生殖周期变化

国内外学者对硬骨鱼类的GH的季节变动及神经内分泌调控有一定的研究,其中在鲤科和鲑鳟鱼类研究的较为深入,近来一些学者对鲇形目的胡子鲇科、(鱼危)科[1]和鲇科[2]做了一定的研究,研究结果表明,GH分泌和神经内分泌调节机理与鲤科鱼类在某些方面存在一定差异.     

猴肝细胞膜脂蛋白(a)受体的研究

猴肝细胞膜蛋白经 SDS- PAGE和蛋白转移电泳后用免疫印迹法测定 ,硝酸纤维素膜分别与抗牛肾上腺皮质 LDL受体的抗体、LDL、Lp( a)和 PLG温育后见有 3条不同的蛋白条带 ,分子量分别为 370 kd、2 90 kd和 80 kd.用酶标法测定猴肝细胞膜蛋白 ,发现经 Lp( a) + PLG温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + PLG温育后用 PLG抗体反应的结果比单独用 PLG温育后用 PLG抗体反应的作用强 ;同样经 Lp( a) +LDL温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与经 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + LDL温育后用 LDL抗体反应比单独经 LDL温育后用 LDL抗体的反应强 ,排除Lp( a)与 PLG和 LDL的交叉反应 ,实验认为猴肝细胞膜上可能同时存在 LDL受体、PLG受体和Lp( a)受体     

促性腺激素释放激素类似物对长臀(鱼危)脑垂体促性腺激素分泌的影响

采用离体灌流孵育技术和促性腺激素的放射免疫测定方法,对长臀(鱼危)(Cranoglanis bouderius)脑垂体碎片促性腺激素的分泌进行了研究.结果表明:持续的促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)能显著刺激退化期的长臀(鱼危)离体脑垂体碎片促性腺激素(GTH)的分泌,并且长臀(鱼危)脑垂体碎片对持续的GnRH-A刺激未表现出脱敏性,该结果与胡子鲇和鲇鱼相似,而与金鱼和鲤科鱼类不同;重复脉冲GnRH-A刺激对长臀(鱼危)脑垂体碎片GTH分泌具有促进作用,而且存在剂量依存关系,与鲇鱼和鲤科鱼类相类似.上述结果表明在长臀(鱼危)的人工繁殖中可以用持续高浓度GnRH-A刺激对长臀(鱼危)进行催熟和催产.     

鳗鲡繁殖生物学研究Ⅴ．性类固醇激素诱导雌鳗促性腺激素(GtH)分泌和卵巢发育的作用

多次注射雌二醇或睾酮对雌鳗促性腺激素(GtH)的合成与分泌活动以及卵巢发育都有明显的促进作用,其中睾酮的作用更较雌二醇显着;多次注射LHRH-A的促进作用则不明显.多次埋植雌二醇或睾酮都能促使脑垂体合成GtH,但所取血清样品中的GtH含量都未见明显增加;多次埋植雌二醇后血清中卵黄蛋白原的含量明显增加,但卵巢GSI增长幅度小,表明埋植雌二醇虽能促使肝细胞合成卵黄蛋白原并释放到血液中,但未能全部渗入卵母细胞内;多次埋植睾酮后血清中的卵黄蛋白原含量虽未见明显增加,但卵巢明显发育长大,这表明埋植睾酮能促使肝细胞合成的卵黄蛋白原迅速地通过血液运送到卵巢,并渗入卵母细胞内.       

普通小麦与鹅观草属间杂种F1及BC1的分子细胞遗传学、育性和赤霉病抗性研究

通过胚拯救, 成功获得鹅观草Roegneria kamoji (2n=6x=42, SSHHYY)和普通小麦中国春Triticum aesti-vum (2n=6x=42, AABBDD)的正反交属间杂种F1, 并对这些杂种F1及其BC1的形态学、减数分裂配对行为、育性和赤霉病抗性进行研究。结果表明, (鹅观草×中国春)F1和(中国春×鹅观草)F1的形态介于双亲之间。杂种F1花粉母细胞减数分裂中期I染色体构型分别为40.33I + 0.78II + 0.03III和40.40I + 0.79II 。杂种F1高度雄性不育, 用中国春花粉与其回交可获得BC1代种子。(鹅观草×中国春) F1×中国春BC1植株的染色体数目主要分布在55~63之间, 单价体较多, 植株高度不育; (中国春×鹅观草)F1×中国春BC₁植株染色体数目也主要分布在55~63之间, 但其中部分植株拥有整套小麦染色体且能正常配对、分离, 可形成部分可育花粉粒, 能收到少量自交结实种子。在 (鹅观草×中国春)F1中有1株穗型趋向中国春, 其染色体数目为2n=63, 经染色体分子原位杂交(GISH)检测, 含有42条小麦染色体和21条鹅观草染色体。该杂种F1在减数分裂中期I平均每个花粉母细胞有26.40I+18.30II, 但植株高度雄性不育, 用中国春花粉回交能收到BC₁种子。(鹅观草×中国春) F₁ (2n=63)×中国春BC₁的染色体数目主要分布在40~59之间, 其中的外源染色体已经逐渐减少, 虽然该BC₁的穗型已接近中国春, 但仍然高度不育。赤霉病抗性鉴定结果显示, 所有杂种F1及大部分BC₁对赤霉病均表现出较好的抗性。     

基于MS2噬菌体病毒样颗粒的RT-PCR检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)质控品制备*

目的: 制备热稳定性好、耐RNase攻击及可全程监控操作的核酸检测新型冠状病毒阳性质控品。方法: 分别扩增MS2噬菌体外壳蛋白CP(含PAC位点)基因以及成熟酶蛋白A基因序列(含核糖体结合位点),先后插入质粒pET28a多克隆位点不同位置,构建通用重组载体pET28a/CP-A。合成包含ORF1ab基因、N基因和E基因三个靶标的特定核酸序列,插入到重组载体pET28a/CP-A中PAC位点的下游,构建包含靶序列的重组载体pET28a/CP-A/S。通过原核表达系统表达目的蛋白,采用硫酸铵和凝胶过滤层析进行纯化,利用透射电镜和动态光散射对蛋白质进行物理表征。全能核酸酶消化形成的盔甲RNA,通过RT-PCR检测其残余核酸和热稳定性。结果: 成功构建包含MS2噬菌体外壳蛋白CP基因、成熟酶蛋白A基因和外源靶核酸的重组载体,目的蛋白在25℃、IPTG 0.3mmol /L、诱导14h时以可溶性形式得到高效表达,纯化后,得到了大小均一、直径为23~28nm的病毒样颗粒,经核酸酶消化后RT-PCR检测,颗粒溶液中几乎无核酸残余且形成了包封靶基因的盔甲RNA。加速破坏试验表明该盔甲RNA无菌过滤后可在37℃稳定保持10天。结论: 在体外,利用MS2噬菌体外壳蛋白和成熟酶蛋白自组装包封外源靶序列制备的盔甲RNA,其热稳定性好,可全程监控整个检测过程,可作为核酸检测SARS-CoV-2的定性或定量质控品。     

基于MS2噬菌体病毒样颗粒的RT-PCR检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)质控品制备*

目的: 制备热稳定性好、耐RNase攻击及可全程监控操作的核酸检测新型冠状病毒阳性质控品。方法: 分别扩增MS2噬菌体外壳蛋白CP(含PAC位点)基因以及成熟酶蛋白A基因序列(含核糖体结合位点),先后插入质粒pET28a多克隆位点不同位置,构建通用重组载体pET28a/CP-A。合成包含ORF1ab基因、N基因和E基因三个靶标的特定核酸序列,插入到重组载体pET28a/CP-A中PAC位点的下游,构建包含靶序列的重组载体pET28a/CP-A/S。通过原核表达系统表达目的蛋白,采用硫酸铵和凝胶过滤层析进行纯化,利用透射电镜和动态光散射对蛋白质进行物理表征。全能核酸酶消化形成的盔甲RNA,通过RT-PCR检测其残余核酸和热稳定性。结果: 成功构建包含MS2噬菌体外壳蛋白CP基因、成熟酶蛋白A基因和外源靶核酸的重组载体,目的蛋白在25℃、IPTG 0.3mmol /L、诱导14h时以可溶性形式得到高效表达,纯化后,得到了大小均一、直径为23~28nm的病毒样颗粒,经核酸酶消化后RT-PCR检测,颗粒溶液中几乎无核酸残余且形成了包封靶基因的盔甲RNA。加速破坏试验表明该盔甲RNA无菌过滤后可在37℃稳定保持10天。结论: 在体外,利用MS2噬菌体外壳蛋白和成熟酶蛋白自组装包封外源靶序列制备的盔甲RNA,其热稳定性好,可全程监控整个检测过程,可作为核酸检测SARS-CoV-2的定性或定量质控品。     

急性ST段抬高型心肌梗死患者血清Lp(a)、UA、GGT与冠状动脉病变和PCI术后主要心血管不良事件的关系研究

摘要 目的：探讨急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者血清脂蛋白(a)[Lp(a)]、尿酸（UA）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）与冠状动脉病变和经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后主要心血管不良事件（MACE）的关系。方法：选取2019年1月～2022年7月安徽医科大学第二附属医院心血管内科收治的100例接受PCI术治疗的急性STEMI患者为STEMI组,根据Gensini积分将其分为非重度病变组56例和重度病变组44例,PCI术后随访3个月,根据是否发生MACE分为MACE亚组和非MACE亚组,另选取同期50名冠脉造影检查排除冠心病者为对照组。收集急性STEMI患者的临床资料,并检测血清Lp(a)、UA、GGT水平。分析急性STEMI患者血清Lp(a)、UA、GGT水平与Gensini评分的相关性及PCI术后MACE的影响因素。结果：与对照组比较,STEMI组血清Lp(a)、UA、GGT水平升高（P＜0.05）。重度病变组血清Lp(a)、UA、GGT水平高于非重度病变组（P＜0.05）。Spearman相关系数分析显示,急性STEMI患者血清Lp(a)、UA、GGT水平与Gensini评分呈正相关（P＜0.05）。随访3个月,100例急性STEMI患者PCI术后MACE发生率为21.00％（21/100）。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、KILLIP心功能分级≥Ⅲ级和Lp(a)、UA、GGT升高为PCI术后MACE的独立危险因素,左心室射血分数（LVEF）升高为独立保护因素（P＜0.05）。结论：急性STEMI患者血清Lp(a)、UA、GGT水平升高,与冠状动脉病变严重程度和PCI术后MACE密切相关,可能成为急性STEMI患者PCI术后MACE的辅助预测指标。     

早产儿急性呼吸窘迫综合征血清1,25-(OH)2D3、PGRN、SIRT1、CTRP3水平与炎症反应和预后的关系研究

摘要 目的：探讨不同病情严重程度早产儿急性呼吸窘迫综合征（ARDS）血清1,25-二羟维生素D₃（1,25-(OH) ₂D₃）、颗粒体蛋白前体（PGRN）、沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3（CTRP3）的变化，分析其与炎症反应和预后的关系。方法：选择2018年10月至2019年12月安徽省妇幼保健院收治的ARDS早产儿100例作为ARDS组，另选取同期在我院出生的健康新生儿60例作为对照组。根据《"新生儿急性呼吸窘迫综合征"蒙特勒标准（2017年版）》的病情判定标准将ARDS早产儿分为轻度组（n=40）、中度组（n=32）、重度组（n=28），比较不同病情严重程度ARDS早产儿血清1,25-(OH) ₂D₃、PGRN、SIRT1、CTRP3、炎症反应指标肿瘤坏死子因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平变化，采用Pearson法分析ARDS早产儿血清1,25-(OH) ₂D₃、PGRN、SIRT1、CTRP3与炎症反应指标的相关性。另根据ARDS组患儿预后情况分为预后良好组（n=65）和预后不良组（n=35），采用单因素和多因素Logistic回归分析影响ARDS早产儿预后不良的危险因素。结果：ARDS组血清1,25-(OH) ₂D₃、SIRT1、CTRP3、PGRN水平明显低于对照组（P<0.05），ARDS组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显高于对照组（P<0.05）。不同病情严重程度ARDS早产儿血清1,25-(OH) ₂D₃、PGRN、SIRT1、CTRP3、炎症反应指标比较差异有统计学意义（P<0.05）。ARDS早产儿血清1,25-(OH) ₂D₃、PGRN、SIRT1、CTRP3水平与TNF-α、IL-6、IL-1β水平呈负相关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，低出生体重、肺表面活性物质（PS）使用次数≥3次、出现低白蛋白血症是影响ARDS早产儿预后不良的危险因素（P<0.05），血清1,25-(OH)2D3（较高）、PGRN（较高）、SIRT1（较高）、CTRP3（较高）是ARDS早产儿预后不良的保护因素（P<0.05）。结论：血清1,25-(OH) ₂D₃、PGRN、SIRT1、CTRP3可能参与ARDS早产儿的炎症反应过程，与ARDS早产儿的病情进展及预后密切相关，检测血清1,25-(OH) ₂D₃、PGRN、SIRT1、CTRP3有助于评估ARDS早产儿的预后。     

医疗视角下粤港澳大湾区典型城市的新冠肺炎(COVID-19)疫情防控力量比较研究*

2019年底暴发的新冠肺炎(COVID-19)疫情席卷全球,严重威胁人类的健康,已经成为需要世界各国共同努力克服的全球重大卫生安全挑战。面对疫情,因各国的文化、地理位置、社会制度和经济发展水平不同,其医疗系统在疫情防控中发挥的作用也不同。以粤港澳大湾区的典型城市(广州市、深圳市、珠海市、香港特别行政区和澳门特别行政区)为代表,通过系统梳理和量化分析各医疗系统在公共卫生突发事件中的表现和效用,明晰医疗卫生机构、医护人员、医疗物资等的职能,厘清各城市防疫医疗力量在重大传染性疫情防控中的优势和短板。结果表明,内地三市与港澳相比,拥有的防疫医疗基础雄厚;澳门和内地三市在疫情早期保持高度一致,联合推进防疫攻关的机制,在应对疫情有效性方面表现不俗,而香港由于受“国际航运中心”的定位限制,以及社会撕裂余波的影响导致难以快速全面封锁,应对疫情的有效性相对较差。展望未来,粤港澳大湾区应互通互补、资源共享,共同提升整个大湾区的公共卫生事件应急能力。