肺炎克雷伯菌生物膜对小鼠腹腔巨噬细胞TLRs受体表达的影响

目的研究肺炎克雷伯菌生物膜对小鼠腹腔巨噬细胞TEas受体表达的影响,探索机体抗生物膜（biofdm,BF）感染免疫的特点。方法将雄性昆明种小鼠40只随机分成2组,一组腹腔植入体外形成肺炎克雷伯菌生物膜的硅胶片,建立留置性医疗装置BF感染模型实验组,另一组植入与实验组同等量的浮游菌作为对照组。实时定量PCR分析2组巨噬细胞TLRsmRNA的表达水平,流式细胞仪检测分析蛋白的表达水平。结果实验生物膜组巨噬细胞TLR2、TLR4mRNA相对表达量是对照浮游菌组的0．23和0．24倍：实验组TLR2、TLR4蛋白表达率分别是（23．27±2．73）％和（15．83±2．04）％,明显低于对照组的（33．42±3．72）％、（21．75±1．25）％（P〈0．05）。结论与浮游菌相比,BF能下调小鼠腹腔巨噬细胞TLR2、TLR4表达,从而影响机体的免疫功能,这可能是BF相对浮游菌更容易逃脱机体免疫防御系统、引起慢性感染的机制之一。     

绿原酸联合左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌生物膜的体外抑制现象观察

目的观察绿原酸联合左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌生物膜的体外抑制现象。方法收集广州市中医医院临床分离的肺炎克雷伯菌株(排除同一患者同一部位重复菌株),应用半定量结晶紫法进行生物膜形成能力测定;选取3株生物膜强阳性的菌株,采用微量肉汤稀释法,对绿原酸、左氧氟沙星用MH肉汤倍比稀释,测定两者的最低抑菌浓度;棋盘稀释法测定绿原酸与左氧氟沙星的协同抑菌浓度;建立体外生物膜模型,经药物干扰,观察药物对生物膜形态的影响。结果在62株菌中共有33株为生物膜阳性,占53.2%,绿原酸对实验菌株的MIC分别是2 048、2 048和2 048μg/mL,左氧氟沙星的MIC分别是32、64和32μg/mL,两药联合作用,部分抑菌浓度指数(FIC)是0.5、0.5和0.5,提示两药呈协同作用,经体外建模及药物干扰,镜下药物组的黑色絮状物较未处理组明显减少。结论绿原酸具有抑制肺炎克雷伯菌生物膜作用,与左氧氟沙星联合,作用效果更显著。     

肺炎克雷伯菌菌毛的研究进展

肺炎克雷伯菌为条件致病菌,可引起肺炎、败血症等多种化脓性炎症,近年来肺炎克雷伯菌也成为医院内感染的主要致病菌之一。研究表明,菌毛作为细菌重要的毒力因子之一,在细菌黏附过程中起重要作用,细菌可借助于菌毛尖端黏附素黏附到宿主的组织器官,这是引起机体致病的首要条件。肺炎克雷伯菌菌毛包括Ⅰ型菌毛和Ⅲ型菌毛,绝大多数的肺炎克雷伯菌均可表达Ⅲ型菌毛,在医院感染的致病过程中起到关键作用。     

肺炎克雷伯菌耐药分析及形成生物膜菌株的基因型检测

目的深入了解医院肺炎克雷伯菌感染分布情况和耐药性,研究生物膜阳性肺炎克雷伯菌的基因型,为临床医师合理选择抗菌药物提供科学依据。方法收集2014年1月至2014年12月临床送检的各类感染性标本进行培养分离,检出545株肺炎克雷伯菌,采用VITEK-2Compact型全自动细菌分析鉴定系统,用GN卡对其进行鉴定,药敏采用AST-GN药敏卡进行药敏分析,PCR对形成生物膜肺炎克雷伯菌进行基因型检测。结果545株肺炎克雷伯菌中痰液、尿液、血液标本分别占59.45%、21.11%和12.29%;感染菌株主要分布于ICU、肿瘤一区、肿瘤二区、血液科,分别占40.55%、15.96%、14.50%和11.93%。对主要抗菌药物耐药率:氨苄西林为79.50%,厄他培南、亚胺培南分别为0.00%和0.30%,头孢替坦为1.10%。形成生物膜肺炎克雷伯菌主要基因型为TEM(41.60%)和SHV(29.16%)。结论我院肺炎克雷伯菌分离株耐药率相对较低,应该与我院中药使用有关,形成生物膜肺炎克雷伯菌以TEM和SHV为主。     

肺炎克雷伯菌研究进展

近年来由于各种抗菌药物的广泛使用,导致肺炎克雷伯菌多重耐药现象普遍存在,给临床治疗带来极大的困扰,造成医院获得性肺炎感染严重的现状。着重论述了肺炎克雷伯菌流行现状、耐药机制、致病因子及防治措施。     

肺炎克雷伯菌生物膜对单核细胞株THP-1 TLR2受体表达的影响

目的研究肺炎克雷伯菌生物膜对单核细胞株THP-1TLR2受体表达的影响,探索细菌生物膜逃脱宿主免疫防御的机制。方法以体外建立肺炎克雷伯菌生物膜的合成分泌物处理单核细胞株THP－1作为实验组,以等量浮游细菌的合成分泌物处理单核细胞株THP-1作为对照组。RT—PER半定量分析THP－1 TLR2mRNA的表达,流式细胞仪检测分析THP－1 TLR2蛋白的表达。结果实验组THP－1 TLR2 mRNA表达（0．453±0．06）明显低于对照组（4．872±0．36）（P〈0．05）;实验组TLR2蛋白表达率（8．42％±3．74％）明显低于对照组（12．35％±7．36％）（P〈0．05）。结论细菌生物膜与浮游细菌不同的代谢产物能显著下调THP－1 TLR2的表达水平,影响固有免疫进而影响适应性免疫,可能是生物膜细菌逃脱机体免疫防御系统的又一机制。     

A类Ⅰ型清道夫受体调节小鼠腹腔巨噬细胞抗肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌感染

本研究旨在探讨A类Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class A type Ⅰ,SR-AI)在呼吸道感染常见病原体肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌感染过程中的免疫调节功能。以肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌临床分离株与野生型小鼠和SR-AI~(-/-)小鼠腹腔原代巨噬细胞互作,研究SR-AI在吞噬和炎症反应中的作用。荧光染料染色菌体及检测胞内荧光强度,数据显示SR-AI敲除后巨噬细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬能力下降,但对铜绿假单胞菌的吞噬能力升高。采用实时定量荧光聚合酶链反应检测相关炎症因子mRNA水平,发现SRAI敲除后肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌刺激巨噬细胞引发的炎症反应均增强。结果表明,SR-AI参与巨噬细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬,但不参与对铜绿假单胞菌的吞噬,且可能抑制了肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌引发的炎症反应。     

铜绿假单胞菌生物膜悬液和藻酸盐对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

目的探讨铜绿假单胞菌（PA）生物膜和藻酸盐成分对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。方法用具有生物膜成分的PA悬液分别感染肺部巨噬细胞缺乏小鼠和正常小鼠,比较组织中的细菌数量。提取小鼠腹腔巨噬细胞,藻酸盐作用后加入PA悬液,测定巨噬细胞对细菌的吞噬率。巨噬细胞经不同浓度的藻酸盐作用后,中性红法检测巨噬细胞吞噬能力。结果巨噬细胞缺乏组和对照组肺部组织的细菌数量分别为（4.16±3.36）×10^5/ml和（5.15±1.92）×10^5/ml,t=0.7211,P=0.483。生物膜细菌组的巨噬细胞吞噬率与对照组的吞噬率分别为（13.82±4.71）%和（42.73±11.00）%,Q=12.3231,P〈0.01。表明生物膜细菌组比对照组更能抵抗巨噬细胞的吞噬。加藻酸盐组的巨噬细胞吞噬率与对照组的吞噬率分别为（22.91±6.20）%和（42.73±11.00）%,Q=8.4465,P〈0.01。表明加藻酸盐组比对照组更能抵抗巨噬细胞的吞噬。当藻酸盐浓度为0、25、50、75、100、125、150μg/ml时,以吸光度A（540nm）值表示其巨噬细胞吞噬中性红的能力分别为：0.271±0.044、0.456±0.062、0.445±0.061、0.551±0.065、0.210±0.053、0.186±0.026、0.195±0.025。当藻酸盐≤75μg/ml时巨噬细胞吞噬中性红的能力增强,与0μg/ml组相比P〈0.05;当藻酸盐〉75μg/ml时巨噬细胞吞噬中性红的能力降低,与0μg/ml组相比P〈0.05。结论巨噬细胞有阻止PA入侵的作用。PA生物膜可以抑制巨噬细胞的吞噬。PA生物膜藻酸盐成分在〈75μg/ml时促进巨噬细胞的吞噬,而在较大剂量时抑制巨噬细胞的吞噬功能。     

蜜环菌多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

从蜜环菌菌索提取的多糖（ＭＨＧ）能在体外显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用,并可诱生巨噬细胞产生一氧化氮。在高浓度时,对巨噬细胞分泌ＩＬ－１有一定的作用。     

肺炎克雷伯菌KP1＿4563基因突变株的构建及其生物膜表型分析

KP1_4563基因是肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中假设的蛋白编码基因,与Ⅲ型菌毛的功能有关。本实验首先采用同源重组基因敲除方法构建肺炎克雷伯菌KP1_4563基因缺失的突变株(Kp-△4563),然后PCR扩增KP1_4563基因片段,克隆到质粒p BAD33上,将重组质粒导入Kp-△4563获得回补株(Kpc-△4563)。分别测定野生株、突变株、回补株用普通LB培养基,改良Minka培养基以及含胆汁盐的LB培养基培养时生物膜形成能力,以此来探讨KP1_4563基因以及不同培养基对肺炎克雷伯菌体外生物膜形成的影响。我们成功构建KP1_4563基因缺失的突变株和回补株Kpc-△4563。与野生株相比,突变株Kp-△4563生物膜形成能力减弱,回补株介于野生株和突变株之间。使用改良Minka培养基使菌株菌毛化以及加入胆汁盐可以增加生物膜的形成能力。这些分析表明肺炎克雷伯菌KP1_4563基因能正调控细菌生物膜的形成。体外培养使细菌菌毛化以及加入胆汁盐可以促进生物膜的形成。     

A comparative study of induction of pneumonia in mice with planktonic and biofilm cells of Klebsiella pneumoniae

In the present study, the course of acute pneumonia in normal BALB/c mice infected by intranasal inoculation of planktonic and preformed biofilm cells (3 days old) of Klebsiella pneumoniae B5055 was studied and compared. With both cell forms the peak of infection was observed on the third post infection day, as assessed on the basis of lung bacterial load and corresponding pathology. There was an intense neutrophil infiltration in bronchoalveolar lavage fluid. Tissue damage was assessed on the basis of increased amounts of nitrite, malondialdehyde and lactate dehydrogenase in lung homogenates. The phagocytic potential of alveolar macrophages was lower in biofilm cell-induced infection than in that induced by planktonic cells. Biofilm cell induced infection generated significantly greater production of tumor necrosis factor-α and interleukin-1β on the third and fifth days of infection, respectively. Production of interleukin-10 was, however, variable. There was no significant difference in the ability of planktonic and biofilm cell forms of K. pneumoniae to induce acute pneumonia in mice in terms of bacterial counts and histopathological changes. However, biofilm cell-induced infection showed delayed clearance as compared to infection induced with the planktonic form.     

肺炎克雷伯菌生物被膜的体外模型建立

目的研究临床分离的肺炎克雷伯菌在体外形成生物被膜的情况,为进一步研究生物被膜肺炎克雷伯菌的耐药机制奠定基础。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌生物被膜模型,用喷金法和扫描电镜观察鉴定,并对生物被膜的形成进行定量分析。结果23株临床分离的肺炎克雷伯菌菌株生物被膜形成能力不同,以强阳性生物被膜形成能力者为最多数。结论绝大多数临床分离的肺炎克雷伯菌菌株具有较强的生物被膜形成能力。应用改良平板法能够较好的在体外建立其生物被膜模型。     

肺炎克雷伯菌生物被膜豚鼠肺感染模型建立的实验研究

目的采用吸入法建立肺炎克雷伯菌生物被膜（BF）肺感染模型,探讨肺内肺炎克雷伯菌BF的发生发展变化及其BF菌周围炎性细胞的变化。方法40只豚鼠随机分为两组：A组和B组动物分别通过喷雾器接种灭菌生理盐水及肺炎克雷伯菌菌悬液,取材日进行活菌计数、光学及电子显微镜检查。结果肺炎克雷伯菌BF在肺内以特异的肉芽肿结节的形式存在,有体内炎性细胞的参与。扫描电镜可见结节内有多糖蛋白复合物包绕的细菌,菌体之间相互以粘液丝相连。结论吸入法BF肺感染模型方法简单、重复性好,可用于BF菌相关肺感染的研究。     

高毒力肺炎克雷伯菌的分子致病机制

肺炎克雷伯菌是一种常见致病菌,根据毒力和致病特点不同,可分为毒力相对较弱的经典肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌。目前,关于肺炎克雷伯菌分子致病机制研究较多且较清楚的主要有荚膜、脂多糖、黏附素和铁载体。这四大类毒力因子在经典肺炎克雷伯菌中也存在,但在高毒力肺炎克雷伯菌中存在的频率更高,并引发不同的免疫应答,从而使高毒力肺炎克雷伯菌具有特征性表型。本文就此进行详细介绍和讨论。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的了解碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌及耐药机制。方法对2012-2013年临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌共计12株进行分析,药敏采用MIC方法检测,用WHONET 5.6软件进行分析,KPC表型检测采用改良Hodge试验,基因检测采用PCR方法。结果 12株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阴性,基因测序为KPC-2型。结论 KPC-2基因是引起本院肺炎克雷伯菌耐药的主要原因。     

非产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌的耐药性分析

目的了解临床分离肺炎克雷伯杆菌中非产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株对18种常见抗菌药物的耐药性。方法CLSI表型确证试验-纸片增强法检测非产ESBLs肺炎克雷伯菌,K-B法测定非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌对18种常见抗菌药物的敏感性。结果非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌株对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率〉50．0％,对其余抗生素的耐药率均低于25．0％,对亚胺培南、美罗培南非常敏感,耐药率分别为2．3％和2．0％;痰标本的分离株对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率明显高于血、尿液标本分离株,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论非产ESBLs肺炎克雷伯杆菌对第一、二代头孢菌素耐药显著,对第三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南等抗生素比较敏感。