鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体基因在昆虫细胞的克隆和表达

白细胞介素１（ＩＬ－１）是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素 １受体（ＩＬ－１Ｒ）结合而起作用。以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠Ｉ型可溶性白细胞介素１受体（ｓＩＬ－１　ＲＩ）基因。以ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠ｓＩＬ－ＩＲＩ的ｃＤＮＡ,克隆至杆状病毒转移载体ｐＡｃＧＰ６７Ｂ,将转移重组质粒与野生病毒ＡＣＮＰＶ ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９,经同源重组得到重组杆状病毒ｒＡＣＮＰＶ。应用经纯化的ｒＡｃＮＰＶ感染昆虫细胞Ｓｆ９,表达获得重组的ｓＩＬ－１ＲＩ。经对亲和层析样品的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析和对ＩＬ－１β生物活性阻断作用实验证实,表达产物能够与其配基结合,并且能够分泌至细胞培养上清中。     

鼠I型可溶性白细胞介素1受体基因在昆虫细胞的克隆和表达

白细胞介素１（ＩＬ－１）是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素１受体（ＩＬ－１Ｒ）结合而起作用,以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠Ｉ型可溶性白细胞介素１受体基因,以ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠ｓＩＬ－１ＲＩ的ｃＤＮＡ,克隆至杆状病毒转移载体ｐＡｃＧＰ６７Ｂ,将转移重组质粒与野生病毒ＡｃＮＰＶ ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９,     

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因,与ｐＰＵＣ１８重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组,构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化ＧＳ１１５宿主菌,经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组ＰＡＩ－２以分泌型表达,占分泌总蛋白的３０％,具ＰＡＩ－２抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物,具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨．     

内皮细胞基因的切应力反应元件

内皮细胞与血流直接接触,血流产生的血管壁切应力直接调节内皮细胞基因的表达,其调节机制就是通过切应力反应元件调节基因的转录。切应力反应元件有кＢ位点、ＴＲＥ（ＡＰ－１）位点、Ｅｇｒ－１位点和Ｓｐ１位点。相关的基因有：ＰＤＧＦ－Ｂ、（人、猫、鼠）、ｔＰＡ（人、猫、鼠）、ＴＧＦ－β１（人、鼠）、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－１（人）、ｅｃ－ＮＯＳ（人）、ｃ－ｆｏｓ（人）、ＩＣＡＭ－１（人）、ＭＣＰ－１（人）、Ｖ     

人白介素—3基因表达调节的研究

报导了ｈ－ＩＬ－３基因表达调节研究的结果：（１）人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ,但丝裂原ＰＨＡ的刺激后则诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达,ＴＰＡ与ＰＨＡ联合处理,使ＩＬ－３ｍＲＮＡ的蓄积进一步增加,但ＴＰＡ单独不足以诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ蓄积;（２）Ａ２３１８７／ＴＰＡ能代替ＰＨＡ／ＴＰＡ的刺激,并直接诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达;（３）ＴＲＥＯＤＮ处理则显著抑制ＰＨＡ／ＴＰＡ诱导的ＩＬ－３ｍ     

转基因人肺腺癌细胞株的建立

以逆转录病毒ｐＬＸＳＬ为载体与人细胞介素２基因（ＩＬ－２）重组,用电穿孔技术将其重组子ｐＬＩＬ—２ＳＮ导入ＰＡ３１７细胞中,建立了逆转染病毒包装体系细胞ＰＡ３１７／ｐＬＩＬ—２ＳＮ。应用逆转录病毒包装体系细胞上清液去转染入肺腺癌细胞ＳＰＣ—Ａ１,经过２０天含Ｇ４１８培液的筛选式培养,历经了５０代的传代培养,获得了转白细胞介素２基因的人肺腺癌细胞株ＳＰＣ－Ａ１／ＩＬ－２。该细胞（ＳＰＣ－Ａ１／ＩＬ－２）经ＰＣＲ技术验证外源性目的基因（ＩＬ－２ｇｅｎｅ）导入细胞内,且证明该细胞能表达ＩＬ—２基因（有ＩＬ－２的分泌）。我们研究的目的是对肿瘤细胞的特异性抗原修饰、对肿瘤细胞进行处理。试图建立肿瘤疫苗。     

IL—18信号转导途径研究进展

白细胞介素１８（ＩＬ－１８）是新近发现的细胞因子,其独特的少ＴＡＴＡ型启动子、特殊的ｍＲＮＡ结构及其前体蛋白需ＩＬ－１β转化酶（ＩＣＥ）加工成熟的特点,便得ＩＬ－１８基因可广泛表达于多种类型的细胞,ＩＬ－１８ＩＬ－１８受体结合组成受体复合物,受体复合物信号通过ＩＲＡＫ－ＴＲＡＦ６途径激活ＮＦ－кＢ,及通过酪氨酸蛋白激酶（ＰＴＫ）的ＬＣＫ－ＭＡＰＫ信号途径诱导ＴＨ１细胞产生ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２等细胞     

人白介素－3基因表达调节的研究

报导了ｈ－ＩＬ－３基因表达调节研究的结果：（１）人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ,但受丝裂原ＰＨＡ的刺激后则诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达,ＴＰＡ与ＰＨＡ联合处理,使ＩＬ－３ｍＲＮＡ的蓄积进一步增加,但ＴＰＡ单独不足以诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ蓄积;（２）Ａ２３１８７／ＴＰＡ能代替ＰＨＡ／ＴＰＡ的刺激,并直接诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达;（３）ＴＲＥＯＤＮ处理则显著抑制ＰＨＡ／ＴＰＡ诱导的ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达。这些结果揭示：ｈ－ＩＬ－３基因的表达在转录及转录后水平被调节,而且是可诱导的,诱导ｈ－ＩＬ－３基因表达、需要Ｃａ２＋依赖及ＰＫＣ依赖的两个信息转导系统,Ｆｏｓ蛋白是反式激活ＩＬ－３基因表达的转录因子,ＰＫＣ依赖的转导系统,可能与ＩＬ－３ｍＲＮＡ的稳定性有关。     

酵母K.fragilis甘油醛—3—磷酸脱氢酶基因的克隆

根据已克隆的马克斯克鲁维酵母（Ｋ．ｍａｒｘｉａｕｓ）,乳酸克鲁维酵母（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）与酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｅｉａｅ）甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰ）基因的核苷酸序列同源性分析设计ＧＡＰ探针,以该探针与脆壁克鲁维酵母（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＣＢＳ３９７基因文库进行原位杂交,得到一阳性克隆ｐＧ１并通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交实验得以证实。该克隆所携带的ＧＡＰ１基因的部分序列也已被测定。利用     

抗菌肽ABP3基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

用化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽ＡＢＰ３基因片段,合成片段拼接后,与ｐＵＣ１９重组,经限制酶片段分析与核苷酸序列分析,获得抗菌肽ＡＢＰ３基因。ＡＢＰ３基因与表达载体ｐＢＩＣ９重组,构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化ＧＳ１１５宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达,重组ＡＢＰ３以分泌型表达,具抗菌活性,且符合ＡＢＰ３的抗菌特性。     

肿瘤坏死因子家族的新成员——TRANCE

肿瘤坏死因子相关激活诱导因子 (ＴＮＦ ｒｅｌａｔｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄｃｙｔｏｋｉｎｅ ,ＴＲＡＮＣＥ)是肿瘤坏死因子家族的一个新成员 ,人ＴＲＡＮＣＥ基因首先由Ｗｏｎｇ等克隆 ,它是一种完整的Ⅱ型转膜糖蛋白 ,由 316个氨基酸组成 ,胞外区与同是ＴＮＦ家族成员的ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ和ＴＮＦ等有较高的同源性 ,ＴＲＡＮＣＥ表达的蛋白质是免疫系统、骨的发生和保持平衡的重要调节因子 .最近 ,Ｎａｇａｉ等通过 5′ ＲＡＣＥ法获得了分泌型的ＴＲＡＮＣＥ (ｓＴＲＡＮＣＥ ,ｓｅｃｒｅｔｅｄｆｏｒｍＴＲＡＮＣＥ…     

豌豆卷须肌动蛋白Ⅱ类异型体cDNA克隆的序列分析

分析１５个豌豆卷须肌动蛋白ｃＤＮＡ 克隆的限制性内切酶图谱,发现在豌豆卷须中至少存在三类肌动蛋白异型体,分别命名为Ⅰ类（ＰＥＡｃ Ⅰ）、Ⅱ类（ＰＥＡｃ Ⅱ）和Ⅲ类（ＰＥＡｃ Ⅲ）异型体．三类异型体的克隆数目分别为１０、４和１个,表明三类异型体在豌豆卷须中的表达是不同的,很可能具有组织或发育阶段的特异性．对Ⅱ类异型体的三个ｃＤＮＡ 克隆ＰＥＡｃ３、ＰＥＡｃ９和ＰＥＡｃ１１进行了全序列测定,所测定的序列已被ＧｅｎＢａｎｋ 数据库所接受．测序结果表明,ＰＥＡｃ３、ＰＥＡｃ９和ＰＥＡｃ１１的序列长度分别为１５５０、１６８０和１０９１个核苷酸,其中编码区长１１３４个核苷酸,编码的氨基酸长度为３７７（ＰＥＡｃ１１缺少编码氨基端前９６个氨基酸的核苷酸序列）．三个克隆的核苷酸序列完全相同,差别仅在于３′非翻译区的长度不同,即ｐｏｌｙ（Ａ）的加入位点不同．这说明它们可能是由同一基因转录而来,但转录后的加工过程不同．豌豆卷须中肌动蛋白基因ｐｏｌｙ（Ａ）加入位点的使用,可能与组织或发育的特异性表达有关．此外,豌豆卷须肌动蛋白三类异型体之间的核苷酸序列同源性为８０％ ,氨基酸序列同源性为９４％ ．     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子／白细胞介素—3融合蛋白的表达研究

利用ＰＣＲ扩增得到粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素－３（ＩＬ－３）完整基因片段,将其分别克隆ｐＧＥＭ－Ｔ构建成ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白基因,ＤＮＡ序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对７２ＲＮＡ聚合酶表达载体ｐＴ７ｚｚ,得到表达质粒ｐＦｕ,经转化至表达宿主Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）,在ＩＰＴＧ诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴     

TRAJKIL及其受体在细胞调中的作用

ＴＲＡＩＬ是最近发现的ＴＮＦ家族的新成员。它在结构和功能方面和ＴＮＦ家族的另一成员－Ｆａｓ／ＡＰＯ－１Ｌ很相似。ＴＲＡＩＬ能够诱导多种转化细胞调亡,但对正常细胞没有这种作用。目前共发现了ＴＲＡＩＬ的５个受体。本文就ＴＲＡＩＬ及其受体的结构和功能以及可能存在的调控机制等方面进行了综述。     

重组腺病毒介导的白细胞介素—12（IL—12）在肝癌细胞中的表达

利用腺病毒表达系统在肝癌细胞中成功地表达了有生物活性的白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）。ＩＬ－１２的Ｐ３５和Ｐ４０ ｃＤＮＡ分别克隆到腺病毒载体ｐＡＣＣＭＶ．ｐＬｐＡ,构建ｐＡＣ／Ｐ３５和ｐＡＣ／Ｐ４０表面质粒。与腺病毒重组质粒ｐＪＭ１７共转染２９３细胞,通过基因重组产生ＩＬ－１２Ｐ３５和Ｐ４０重组腺病毒。用重组腺病毒感染肝癌细胞株ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１,经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明,     

苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达及酶法合成L—苯丙 …

利用基因重组技术,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酸（ＰＡＬ）（ＥＣ４．３．１．５）,并应用此酶转化肉桂酸生成Ｌ－苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶ｃＤＮＡ亚克隆到组成型表达载体ｐＭＧ３６ｅ启动子Ｐ３２下游,以菌落ＰＣＲ法鉴定插一段的大小和方向都正确的克隆,进而以ＨＰＬＣ检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成Ｌ－苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达ＰＡＬ酶活性的阳性克隆,在ＰＨ１０,含１     

TRAIL及其受体在细胞凋亡中的作用

ＴＲＡＩＬ是最近发现的ＴＮＦ家族的新成员。它在结构和功能方面和ＴＮＦ家族的另一成员———Ｆａｓ／ＡＰＯ １Ｌ很相似。ＴＲＡＩＬ能够诱导多种转化细胞凋亡,但对正常细胞没有这种作用。目前共发现了ＴＲＡＩＬ的５个受体。本文就ＴＲＡＩＬ及其受体的结构和功能以及可能存在的调控机制等方面进行了综述。     

人TRAIL基因cDNA的克隆及其在COS—7细胞中的表达

ＴＲＡＩＬ(ＴＮＦｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ)是最近克隆的肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)家族的新成员,由于它的蛋白质结构和生物学效应类似于ＦＡＳ/ＡＰＯ1Ｌ,因此,也被称为ＡＰＯ2Ｌ。在低浓度下,ＴＲＡＩＬ能迅速地诱导多种肿瘤细胞系的?..     

IL—2重组杆状病毒载体的构建及表达

将人白细胞介素２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ插入苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮ－ＰＶ）的转移载体ｐＶＬ１３９２中。经限制性酶切和ＤＮＡ杂交筛选、鉴定出重组转移载体ｐＶＬ１３９２－ＩＬ２。重组载体通过在昆虫细胞内共转染将ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移到野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ中。经３２Ｐ标记探针鉴定出重组病毒Ａｃ１３９２－ＩＬ２。用重组病毒感染昆虫细胞,结果表达产物有明显刺激ＣＴＬＬ细胞生长,［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法检测ＩＬ－２活性为１５００ＩＵ／ｍ１。     

可溶性白细胞介素6受体基因在链霉菌的克隆表达研究

以分离提取的ＨｅＬａ细胞总ＲＮＡ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ反应扩增得到了１０１７ｂｐ的人可溶性白细胞介素６受体（ｓＩＬ－６Ｒ）ｃＤＮＡ片段,将扩增片段克隆到ｐＵＣ１９质粒中进行序列测定。结果证明该片的序列与文献报道的ｓＩＬ－６ＲｃＤＮＡ的序列完全一致,将ｓＩＬ－６ＲｃＤＮＡ与链霉素信号肽ｍｅｌＣｌ的编码序列融合后得到的融合基因ｍｅｌ／ｓＩＬ－６Ｒ克隆到链霉菌质粒ｐＬＪ４５９中,构建成重组表达质粒ｐＬ