禽呼肠孤病毒变异株的分离鉴定

从病鸡肝分离到一株病毒,经电镜检查、理化特性分析、核酸电泳和中和试验等证明它为禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）。该病毒只在鸡胚肝细胞（ＣＥＬｉ）上产生细胞病变（ＣＰＥ）,在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和Ｖ＿（ｅｒｏ）细胞上不增殖,它对热无敏感,Ｍｇ￣（２＋）不能增强其对热的稳定性,其基因组中的４个小节段的迁移率与ＡＲＶＦＤＯ和Ｓ＿（１１３３）株明显不同,表明它是不同于ＦＤＯ和Ｓ＿（１１３３）的ＡＲＶ变异株。     

四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究

本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873 、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究。结果表明 ,GCRV873 、GCRV875、GCRV876在 - 30℃保存 10年后仍然具有一定的感染性 ,其滴度均在 10 2 TCID50 /mL以上 ,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价。经传代培养后 ,四株GCRV的毒力逐渐升高 ,并趋于稳定 ;当感染复数 (MOI)为 0 .0 5PFU/cell时 ,测定四株GCRV的滴度均高于 10 8TCID50 /mL ,但略有差异。GCRV873 的滴度最高 ,可达到 6 .4× 10 11TCID50 /mL。连续传代的GCRV毒株在不同温度 (2 8℃、31℃、34℃、37℃、41℃ )条件下 ,均可感染CIK细胞 ;在 2 8℃时 ,感染效价最高 ,随着温度的升高 ,其感染效价逐渐降低     

四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究

本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究.结果表明,GCRV873、GCRV875、GCRV876在-30℃保存10年后仍然具有一定的感染性,其滴度均在102TCID50/mL以上,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价.经传代培养后,四株GCRV的毒力逐渐升高,并趋于稳定;当感染复数(MOI)为0.05PFU/cell时,测定四株GCRV的滴度均高于108 TCID50/mL,但略有差异.GCRV873的滴度最高,可达到6.4×1011 TCID50/mL.连续传代的GCRV毒株在不同温度(28℃、31℃、34℃、37℃、41℃)条件下,均可感染CIK细胞;在28℃时,感染效价最高,随着温度的升高,其感染效价逐渐降低.     

草鱼呼肠孤病毒HZ08株S4基因序列分析

草鱼呼肠孤病毒HZ08株是本实验室从患出血病草鱼体内分离到的一个新毒株,已完成部分基因序列的分析,其氨基酸序列的同源性和873株相比,仅为20%~30%之间.因序列差异较大,无法通过设计特异性引物来扩增和分析其基因序列,采用单引物扩增技术,对HZ08株S4基因进行序列分析表明:S4全长为2263 bp,最大的ORF编码717个氨基酸,推导出其表达的蛋白约为79 kDa.正如其他基因节段,基因末端也含有保守碱基序列5′(GUAAUUU…UUCAUC),3′.S4基因推导的氨基酸序列与同宿主的其他呼肠孤病毒的非结构蛋白NS1同源性最大,其次是和哺乳动物正呼肠孤病毒的非结构蛋白mu-NS以及禽呼肠孤病毒非结构蛋白NS1同源性较大,表明S4可能表达细胞骨架相关蛋白.基于S4推导出的氨基酸序列构建的系统进化树HZ08株单独作为一个分支,与同宿主的其他呼肠孤病毒亲缘关系比较近,而与其他呼肠孤病毒则相对较远.这提示HZ08株可能是多个毒株的遗传信息经长期的遗传进化而得,综合其它已知序列信息,推测HZ08株可能为呼肠孤病毒的一个新成员.     

树鼩呼肠孤病毒的分离鉴定

致病性病毒严重危害树鼩(treeshrew,Tupaia)生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜观察显示该病毒为球形,双层衣壳,完整直径~75nm。纯化病毒经核酸PAGE电泳后呈现10个核酸节段,并为典型的3:3:4排列。哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)L1基因保守区RT-PCR检测、序列分析及进化树构建结果表明,该病毒株属于MRV,且与来源于蝙蝠的呼肠孤病毒分离株(T3/Bat/Germany/342/08)同源性最高。MRV是人兽共患病病毒,该实验首次从树鼩体内成功分离到MRV,对今后研究制定实验树鼩病毒学控制标准具有指导意义,同时为有效预防该病毒在树鼩与人类之间传播提供了实验依据。     

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鲅鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鲅鱼病毒病病原。本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究。结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异。此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型。在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与。FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性。Westem blot检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇。     

番鸭呼肠孤病毒的鉴定

从以软脚为主要临床症状,以肝、脾表面有多量灰白色坏死点,肾肿大及出血为主要病变的病番鸭肝、脾组织中分离到5株病毒(MW9710、MW9803、MW9806、MW9809和MW9810).雏番鸭和雏鹅经人工感染后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒.樱桃谷鸭、麻鸭和鸡人工感染不发病.经电镜观察,病毒呈球形,正二十面体,立体对称,无囊膜,有双层衣壳,直径为60nm～73nm,病毒粒子在胞浆中增殖.病毒对乙醚、氯仿、胰蛋白酶、50℃处理1h和3%甲醛处理不敏感.对pH3处理2h、60℃处理30min和紫外线照射敏感.1mol/L Mg-Cl2不能增强病毒的感染力.病毒核酸型为dsRNA,病毒核酸具有禽呼肠孤病毒的特征:有10条带,按其大小可分为三类:大片段(L1～L3)、中片段(M1～M3)和小片段(S1～S4).但是MW9710株的M2和S1～S4片段的迁移率明显不同于鸡关节炎病毒(ARV)S1133株,而与番鸭呼肠孤病毒法国株(89330、89026株)的核酸电泳图谱极为相似.在血清中和试验中,ARV S1133和MW9710株互不交叉.并且,以针对ARV S1基因的特异性引物XZ11、XZ12对MW9710株等进行RT-PCR扩增,只能从ARV中扩增出特异性条带;而以MDRV89026株S1基因的特异引物HP11、HP12进行RT-PCR扩增,只能从MW9710等分离毒株中扩增出特异性条带.上述结果表明,MW9710株等5株病毒是上述疫病(番鸭"肝白点病")的病原,属呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒.     

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属.草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鮁鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鮁鱼病毒病病原.本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究.结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异.此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型.在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性.Western blot 检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇.     

水生呼肠孤病毒研究进展

水生呼肠孤病毒为感染水生生物的一类呼肠孤病毒。自Meyers等1979年首次报道水生呼肠孤病毒的分离,迄今已分离鉴定出40余株水生呼肠孤病毒。与哺乳动物呼肠孤病毒一样,水生呼肠孤病毒主要通过呼吸肠道感染宿主,导致出血病及肝脏与胰腺疾病,在全球范围内对水产养殖业造成了严     

耐氧双歧杆菌的分离和鉴定

从中年人粪便中分离到136株可疑双歧杆菌,通过耐氧力测定获得一株耐氧性菌.经属和种的系统生理生化鉴定,确认为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum).小范围饮用实验结果表明,该菌对便秘有疗效.     

我国粘细菌(Myxobacteria)资源的分离与鉴定

粘细菌是原核生物中一类具有复杂多细胞行为的革蓝氏阴性细菌[1],能够 在细胞间通过信号的传递和感应,协同摄食、运动和发育形成子实体,具有 显著的社会学特征,被认为是高等的原核生物[2,3].     

云南省甲属披膜病毒的分离和鉴定

从采自云南省的6种蚊子和1份发热病人血清分离到披膜病毒11株,电镜检查该病毒为球形有囊膜颗粒,直径为56.10±1.38nm,病毒抵抗5-IdU,对酸、热、醚均敏感,在pH5.5～6.4间能凝集鹅血球,乳鼠皮下或脑内注射均能稳定致死,酶免疫法鉴定表明这11株病毒与甲属披膜病毒(MAY、RR、WEE、EEE)抗体有反应,尤与MAY反应最强,与我国分离的M1、M4病毒抗体也有反应,但空斑抑制中和试验显示,云南甲病毒和MAY病毒间没有交叉中和反应,在以上性状方面蚊体和人体分离的病毒间未见明显差异,对云南甲属病毒的分类学地位及我国甲属披膜病毒分布和意义进行了讨论。     

脆弱类杆菌的免疫原性研究及其应用

脆弱类杆菌ATCC 25285和CDC14462分别经甲醛、超声破碎和热酚等处理,制得全菌抗原(WCA)、外膜抗原(OMA)和脂多糖抗原(LPS),其免疫血清的凝集效价以WCA抗血清最高,OMA抗血清次之,LPS抗血清最低。三种抗血清以间接免疫荧光抗体技术(IFA)检定35株脆弱类杆菌,仍以WCA抗血清检出率最高。WCA免疫原性强,免疫产生抗体效价高,能检出更多的同种菌株,且制备简便,值得选用。     

一株蝗虫病原菌的分离和鉴定

从内地黄脊竹蝗自然病死虫尸内分离到一种病原菌,其纯培养物经KOCK病症律证明,并按《伯杰细菌鉴定手册》(第九版)的方法进行了生物学测定、生理生化实验,并测定了其DNA中G+Cmol含量为63.73％,确定该病原物为类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)。经生物测定,该菌对草地蝗虫和黄脊竹蝗有较强的感染力,对草地其他害虫也有一定的感染力。     

费氏丙酸杆菌两个亚种的分离与鉴定

用亨格特（Hungate）厌氧技术从不同奶制品分离出3株丙酸杆菌Propionibacterium,编号为PTC－1,PTC－2和PTC－3。细胞呈多形态,杆状,革兰氏阳性,不形成芽孢,不运动,菌落在PYG深层洋菜中呈双凸透镜状,白至土黄色,从葡萄糖、乳糖等8种碳水化合物发酵产酸,葡萄糖发酵产物包括大量丙酸和乙酸,少量异丁酸,琥珀酸和CO₂。厌氧至耐氧。PTC－1的DNA的GC百分含量测定值为67.8mol％（Tm）。三株菌的特性很接近,只在硝酸盐还原和牛奶凝固特性有差     

云南省两株环状病毒的分离和鉴定

从云南省采集的中华(?)蚊和棕头库蚊中,分离到两株对3周鼠致死的病毒。血清学鉴定表明,该病毒与披膜病毒科(甲病毒属)、黄病毒科、布尼亚病毒科病毒的免疫腹水,以及呼肠孤病毒科环状病毒(M14)的免疫腹水均不发生反应。电镜观察病毒为球形,具双层壳体的颗粒,直径为70.35±3.07nm,毒粒常常和颗粒状包涵体及管状结构相连;核衣壳具有环状病毒特有的20面体对称结构,直径为56.06±2.42nm。在负染标本中能观察到直径为38.36±2.42nm的核心颗粒。该病毒对乙醚相对抵抗,对酸,热敏感。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,病毒基因组由10条RNA片段组成,分子量在0.3～2.5×10~6道尔顿之间,病毒基因组RNA带形分布(3-3-3-1)类似环状病毒,但与已知环状病毒RNA带形分布都有不同。     

一株杀蛆细菌的分离与鉴定

蝇属昆虫纲,双翅目,能传播霍乱、伤寒、结核及痢疾等多种疾病的病原菌,种类较多,生长很快,分布广泛,危害严重。化学药剂灭蝇,不仅杀虫效果差,而且环境污染严重。生物防治蝇蛆,不仅能避免污染,而且可在蝇蛆中间不断传染,药效较长。但是,目前在国内外尚未见到有这方面的研究报告,仅见到刘世贵等利用类产碱假单胞菌防治草地蝗虫的报道。     

犬瘟热病毒XJ株的分离鉴定

应用犬肺原代巨噬细胞,从新疆阿克苏送检的一只病死犬肺脏中分离出1株犬瘟热病毒,并对其进行了形态学、理化学、血清学、动物感染试验、分子生物学鉴定。结果证明所分离的XJ株为1株CDV的强毒株。