尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果

目的：探讨尿素对Tricine—SDS—PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法：利用常规SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE分离小分子肽,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果：调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为5．05％,能够改善小分子肽的分离效果。加入36％的尿素比加入甘油可以更有效分离1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论：尿素改善SDS—PAGE分离小分子肽的效果,制作尿素胶时,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。     

有效分离1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法

为了建立能有效分离 1kDa的特小分子肽的Tricine SDS PAGE方法 ,调整分离胶中聚丙烯酰胺凝胶的分子组成 ,使致密胶中丙烯酰胺和双丙烯酰胺的交联度为 5 %,并加入 36 5 %的尿素 ,用于分离小至 1kDa的小分子肽 ,并与常规的SDS PAGE和先前报道的Tricine SDS PAGE相比较。结果改进的致密胶可以有效分离分子量小至 1kDa的小肽 ,明显优于常规的SDS PAGE和现有的Tricine SDS PAGE方法。     

一种简便的叶绿体色素纸层析的点样方法

“叶绿体色素的提取与分离”实验中 ,“点样”是用毛细管在滤纸上划滤液线的方法来完成的。现介绍一种用玻璃片“盖印”的点样法 ,优于毛细管点样方法。1　点样玻璃片制作挑选无缺损的载玻片 (75 mm× 2 5 mm× 1mm) ,用玻璃刀横向裁成 10 mm宽的小玻片 (2 5 mm× 10 mm×1mm ) ,此玻片即可用作点样。制成的点样玻片宽的一侧要保证平直无缺损 ,其宽度要小于滤纸条的宽度。因此 ,玻璃片的宽度为 10 mm,滤纸条的宽度可裁成 15 mm为宜。2　操作　　从小漏斗流出的滤液不要用试管收集 ,可直接滴1～ 2滴在 1块干净的载玻片上 ,用点样玻片宽的一侧…     

小麦低分子量麦谷蛋白亚基组成研究

利用改良的两步一向SDS—PAGE(two—step one—dimensional SDS—PAGE)分析了几种小麦低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)组成。70％热乙醇提取总谷蛋白,11％分离胶进行第一步SDS—PAGE分离．电泳1h后切取顶端1cm胶条并置于巯基乙醇溶液进行还原,还原后的胶条于11%～16．5％的梯度胶进行第二步SDS—PAGE分离。结果显示。两步一向SDS—PAGE可以彻底除去清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白对LMW—GS分离的背景干扰。提高LMW—GS的分辨率。对几种小麦低分子量麦谷蛋白亚基分析表明：LMW-GS组合比HMW—GS更为丰富,每种小麦含有2～5种B亚基,2～4种C亚基．B、C亚基的总数量为4～8种。     

考马斯亮蓝—银染色法——一种更灵敏的凝胶蛋白质染色法

我们曾报道一种重复性好而灵敏的电泳凝胶蛋白质染色法。其后发现银染色法虽然灵敏,但有一定的选择性,某些蛋白不易被银染色着色。若将考马斯亮蓝染色与银染色相结合,则可弥补彼此弱点,而且可提高灵敏度,是一种较为理想的凝胶蛋白质染色法。一、材料与方法(一)试剂丙烯酰胺、双丙烯酰胺、SDS 为国产品,均重结晶后使用;考马斯亮蓝 G—250及戊二醛(Fluka 产品);硝酸银 GR 级(西安化学试剂厂产品);Ampholine(LKB 产品);尿素     

一种提高固定pH梯度（IPG）凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法

在蛋白质组学研究中 ,双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是现行蛋白质分离的最重要的方法之一。实验发展了一种提高固定pH梯度 (IPG)凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法 :在一块SDS 聚丙烯酰胺凝胶上同时进行多块固定pH梯度(IPG)凝胶 (Multi stripsononeSDSgel,MSOG)电泳。用此方法比较了人肝癌细胞、不同生长状态的人肝癌细胞、3T3细胞的蛋白质以及同一个样品在不同大小的第二向凝胶系统 (大型和中型凝胶 )的双向电泳图谱。结果表明 ,同一样品在 13cmIPGStrip双向电泳可分离 2 0 0 0以上蛋白质点且图谱蛋白质点的匹配率可超过 95 %以上。同时又可以最大程度地降低凝胶背景对蛋白质点比较分析的干扰 ,从而提高了双向电泳分离蛋白质的分辨率和通量。这些优点都有助于差异蛋白质组学特别是细胞器差异蛋白质组学研究的自动化。     

有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法

目的：建立一种有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。方法：针对1kDa分子量环脂肽的特点,对凝胶的组分和比例、凝胶的聚合速度等电泳条件进行了优化。结果：改进凝胶组分和比例,使得浓缩胶为7％T、3％C,夹层胶为12％T、3％C,致密胶为16．5％T、6％C;并在胶中加入尿素和甘油;同时加大APS的量使聚合速度加快。由此得到的环脂肽电泳条带清晰、平稳、紧凑,显示分子量为1．05kDa,与质谱结果吻合。结论：新建立的Tricine—SDS—PAGE是一种有效的分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。     

2DE中IPG胶条转移到SDS-PAGE中的技术改进

2-维凝胶电泳(Two—dimensional gel electrophoresis,2DE)因其高通量、高分辨率等特点,被广泛用于蛋白质组的分离．然而,在蛋白质从第一向一固相(Immobilized pH gradients,IPG)胶条转移到第二向一十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶(Sodium dodecyl sulfate,SDS;Polyacrylamide gel electrophoresis．PAGE)时,常会引起蛋白质的损失．尤其是当将IPG胶条放入浓缩胶上时,在胶面不平、技术不熟练等情况下,常会在IPG胶条下引入气泡,导致蛋白质更多的损失．现将IPG胶条转移过程进行改进：先在第二向的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶上加上薄薄的一层(约1～2mm厚)琼脂糖溶液,然后将IPG胶条转移上去,最后再封住胶条的上面．这样的转移不会引起气泡,可以大大提高实验的成功率及重复性,有利于蛋白质的转移(尤其是相对分子质量大于40kDa的蛋白质)．提高质谱鉴定的准确性．此法操作简便,可以减少因操作不熟练而带来的麻烦．     

峰胶乙醇提取物化学成分的GC／MS研究

利用气相色谱-质谱联用法(GC-MS),HP-5MS 30 m×0.25 mm×0.25μm5%苯甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱,对峰胶乙醇提取物化学成分进行了分析,分离出127种组分,采用峰面积归一化定量,鉴定出45种成分,共占其色谱流出组分总量的82.8%,其中萜类、黄酮类化合物约占31%.     

罗望子胶的流变学性质及凝胶特性研究

罗望子胶的流变学性质和凝胶性能与常见胶种有较大差别。升高温度、提高浓度会增大其表观粘度,这与其单糖组成和多糖结构的特殊性有关。在低浓度下(2%,w/v)罗望子多糖胶水溶液为牛顿流体,而当浓度升高到2.5%(w/v)后呈现非牛顿流体的特性。罗望子多糖胶属于必须有糖存在下才能形成凝胶的氢键结合法。除此之外,罗望子胶粉也可与乙醇通过氢键作用形成高强度凝胶,这种性质是其他多糖胶所不具备的。实验发现,在乙醇体积分数为15%,胶粉浓度1%,85℃恒温搅拌10 min条件下形成的凝胶强度近1 000 Bloom g。在该凝胶体系中适当添加葡萄糖或蔗糖可提高其持水能力。     

利用细胞松弛素B分离柑橘及金柑植物微核的研究

采用细胞松弛素B(CB)处理结合蔗糖梯度超速离心方法分离柑橘和金柑亚原生质体的结果表明,柑橘和金柑原生质体的直径为20～30μm,采用蔗糖梯度超速离心分离亚原生质体,其适宜离心力是1400000×g;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的染色效果最好,细胞核和细胞质可明显区分;愈伤组织经CB处理36h后再分离亚原生质体,可显著提高微原生质体的产量,分离的微原生质体直径为1.8～3.5μm,产量达到2～3×104个·g-1(FW)。     

凝胶基片的制备与应用研究

在Bind-Silane^R处理的玻片上交联聚丙烯酰胺凝胶层(15mm×15mm×20μm),戊二醛活化。与末端氨基修饰的寡核苷酸片段共价结合制成芯片。这种芯片能够区分液相中序列不同的Cy3标记的目标核酸。与平面基片相比,凝胶基片具有背景低、固定探针量高、杂交时间短的优点。将细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、ANG、I-309和VEGF的单克隆抗体加样于凝胶基片上制成蛋白质芯片,对乳腺癌患者和正常人的血清进行检测,发现乳腺癌患者细胞因子IL-4、IL-5、I-309和VEGF的表达量高于正常人的表达量,对临床诊断具有重要的参考意义。     

普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒

目的　为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。　方法　用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。　结果　眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。　结论　HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。HPLC凝胶过滤柱层析可进一步使蛋白组分得到提纯     

高分辨电泳分离短串联重复序列DNA片段

采用多相缓冲系统,在成层胶T＝5%,C＝2.6%, 分离胶T＝8%,C＝5%的条件下用聚丙烯酰胺凝胶电泳对人类短串联重复序列(STR)DNA片段进行分离.其中,成层胶内主要缓冲成分为2-二羟乙基亚胺-三羟甲基甲烷(Bistris)、H₂SO₄及N、N-2(羟乙基)甘氨酸(Bicine) ; 而分离胶以Tris、H₂SO₄及2-二羟乙基亚胺-三羟甲基甲烷(Bistris)为主,构成多相缓冲系统.DNA片段在成层胶中被有效地压缩, 在分离胶内又可完全解压缩,使其按片段大小分离;从而达到提高分辨率的目的.     

一种磁铁控制高频心脏起搏器频率的方法

本文介绍了一种磁铁控制高频心脏起搏频率的设计方法。这种起搏器的刺激频率可高达 4 92ppm ,而且脉冲输出频率可根据需要用磁铁从 2 31～ 4 92ppm加以调控。因为起搏器主要用于动物实验 ,所以起搏器的体积较小 ,只有 9mm× 36mm× 4 0mm ,重量也只有 2 0g左右 ,而使用寿命却在半年以上     

植物细胞表面蛋白的分离和鉴定

我们发现用十二烷基硫酸钠(SDS)洗涤植物细胞,可以分离到两种蛋白。不同植物细胞的这两种蛋白,除了电泳淌度稍有不同以外,最主要的差异是量的不同。由于烟草细胞取材方便,我们对其进行了初步的分离和鉴定。SDS浸提液的紫外吸收光谱在230～240nm之间有一个肩,在260～280nm之间有一个吸收峰。Sephadex G-200凝胶过滤层析显示出两个既有茚三酮阳性反应,又含有中性糖的峰。汇集这两个峰的冼脱液进行超离心分析,结果证明是两个大分子。洗脱液经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,用考马斯亮蓝R-250和过碘酸-Schiff试剂染色,结果表明是两种糖蛋白。这两种糖蛋白用沉淀剂三氯乙酸和磷钨酸可以分开:其一是含糖量超过30％的粘蛋白,另一是含糖量不到10％的糖蛋白。氨基酸组成分析结果表明:SDS浸提的蛋白象细胞壁蛋白一样,都是富羟脯氨酸蛋白。不同的是,SDS浸提的蛋白羟脯氨酸含量超过胞壁蛋白一半以上。SDS浸提蛋白的冻干样品处观是一种有网眼结构的膜状物,磷钨酸变性后在电镜下可以观察到丝状结构。烟草细胞的SDS可浸提的蛋白含量,在细胞生长最快时显著降低。     

pH控制对热凝胶发酵的影响

热凝胶 (Ｃｕｒｄｌａｎ)是一种直链结构的 β 1,3 葡聚糖 ,由Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓｖａｒ.ｍｙｘｏｇｅｎｅｓ发酵生产而来 ,是一种新型的微生物胞外多糖[1 ] ,其分子量在 5 0万左右。热凝胶在中性条件下不溶于水 ,但能溶于碱溶液中。加热含有热凝胶的水浊液可形成两种类型的凝胶 ,一种是弹性较低的类似琼脂的可逆胶 ;另外一种是凝胶强度大、弹性好的热不可逆胶。由于热凝胶具有独特的热成胶性能 ,在食品工业 ,特别是高温制作的食品领域具有广阔的应用前景。热凝胶的胶体可以包容和控制药物的扩散 ,所以可以用来作为药物…     

半干燥电泳转移系统

LKB医药公司声称,用Phast Transfer装置进行半干燥电泳印迹试验具有速度快、重现性好和经济实惠的优点。利用这个装置可将蛋白质从PhastGel基质转移到膜中,但必须与PhastSystem装置联合使用。 PhastTransfer对大多数蛋白质的洗提效率高于90％;电流强度为1.0毫安培/厘米~2时,10～15分钟内的回收率很高。它可提供预先切好的滤纸,PhastSystem的显影部件还可自动地对膜进行处理。由于采用小型胶块,再加上半干燥技术,因而需用的试剂量极     

不经染色直接从SDS-PAGE制备凝胶中准确切下所需蛋白条带的方法

蛋白样品的垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)不但是一种最常用的蛋白分析方法,也经常用于蛋白质的制备。从电泳凝胶上纯化蛋白,一般都要先用考马斯亮蓝染色,然后切下所需的蛋白条带。这里介绍一种可以不染色,直接从SDS-PAGE制备凝胶上准确切割所需蛋白条带的方法。与染色后切胶的方法相比,这种方法简单、省时,分离到的蛋白容易从胶中洗脱回收,并可明显提高回收率,而且省去了令人烦怖的从回收的蛋白中脱去染色时结合的染料的问题。作者曾用此方法分离过多种蛋白,屡试不爽。这种方法与一般的SDS-PAGE制备电泳的差别主要在电泳结束后对凝胶的处理上。     

多功能电泳装置——小型凝胶和电洗提设备同存一箱

Isco公司新生产的小蓝箱(Little Blue Tank)不但便于回收特定凝胶带的DNA和RNA,还改进了水下微型凝胶的特性。这种装置包括一只水平缓冲液箱、一只紫外线透性的9×10cm凝胶盘、一个适用于12样井和3样井胶板的梳子,以及回收样品的两种电洗提附件。电极可防止外侧胶列弯曲(胶列的弯曲会减少有效样品的含量),缓冲液箱的深蓝色又使被淹没的样井显而易见。电洗提杯可快速收集和浓缩凝胶和溶液中的蛋白质和其它大分子化合物。还有小容量的盐阱,它能有效地回收低达几纳克的DNA。电压可选