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caiB基因和caiE基因分别编码肉碱脱水酶及其辅因子合成酶 ,两者的共表达可以获得高活性肉碱脱水酶的重组菌。分别用两相容性质粒和不相容质粒共表达肉碱脱水酶及其辅酶合成基因 ,并对两种方法进行了比较。经IPTG诱导 ,相容性双质粒系统中两基因表达量分别占菌体总蛋白质的 17%和 10 % ;不相容性双质粒系统中两基因表达量分别占菌体总蛋白质的 39%和 2 0 %。共转化菌的酶活力比pET2 8caiB单质粒转化菌均提高 2 .3倍左右。两种双质粒转化系统相似 ,都需在外界抗生素选择压力下保持质粒稳定性 相似文献
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采用三亲本杂交将Tn5-mob-sacB标记华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)HN3015的非共生质粒pMhHN3015a分别导入HN308SR和7653R-1SR, 获得2个转移接合子HN308SRN29和7653R-1SRN29。HN308SRN29的质粒图谱显示HN308SR的pMhHN308b被消除, 该结果暗示pMhHN3015a和pMhHN308b不相容。然而, HN308SRN29的质粒消除实验未获得标记质粒消除突变株。pMhHN3015a和pMhHN308a的大小 相似文献
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质粒pSGL1(7.4kb)是从球孢链霉菌(Streptomyces geobisporus)中分离得到的一个高拷贝质粒,已测定其最小复制子序列。从球孢链霉菌总DNA中采用PCR方法扩增获得编码C1027前蛋白信号肽的DNA片断gpp。将gpp克隆至pSGL1的衍生质粒pSGLN中,获得新的链霉菌表达型质粒载体pSGLgpp。应用该质粒进行了人的河溶性白细胞介素1受体I型的表达。 相似文献
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本研究采用琼脂糖凝胶电泳对分离白海南岛的12个Bt菌株与分离自广西、黑龙江的5株Bt菌株及2株Bt模式菌株进行质粒数量、大小等特征分析.19个供试菌株可区分为16种独特的质粒电泳图谱,充分显示出不同来源bt菌株的质粒多样性.进一步选择了其中的10个菌株,利用包埋法制备琼脂块进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),结果表明苏云金芽孢杆菌大质粒组成特征也具有丰富多样性.但是供试菌株的质粒电泳图谱并未体现与地理和生态特征相关联的特征差异.研究结果初步证实海南分离株S3078-1是一株无内生质粒的Bt菌株,而S3031-1和S3073-1两个分离株仅有一个大质粒存在,这三个分离株将为进一步研究质粒功能提供初始菌株.本研究进一步暗示将琼脂糖凝胶电泳和脉冲场凝胶电泳结合起来研究质粒特征提高了结果的可靠性. 相似文献
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吴卫星 《中国生物工程杂志》1988,8(5):27-32
引言 质粒稳定性在微生物遗传工程研究和生产中占有十分重要的地位,只有构建高表达同时高稳定的重组质粒才能达到高产的目的。 一般的说,在没有选择压力时培养含质粒细胞若干代,出现无质粒细胞即是质粒不稳定。 相似文献
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酵母菌基因工程载体——pCN系杂种质粒的构建及其特性的研究 总被引:3,自引:2,他引:1
pCN系质粒是利用DNA重组技术,以YRp7和pAT153为原始质粒所构建的酵母菌基因工程载体。pCN系质粒由酵母菌TRPL基因的1.4 kb DNA片段和完整的pAT 153分子组成。根据pAT153质粒中所插入的TRPl DNA片段的方向性,pCN质粒有两种不同的构型。在性质上,pCN系质粒保留了 YRp7高转化能力和pAT153高拷贝水平,同时它在酵母受体中的稳定性比’YPp7明显提高。pCN质粒中尤以pCN60可作为酵母基因工程的载体。 相似文献
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Ti质粒是农杆菌介导基因转化的重要部件,它是农杆菌染色体外的遗传物质。野生型Ti 质粒虽然是植物基因工程的一种天然载体,但把它用作常规的克隆载体却存在4点缺陷,为了使Ti质粒适于基因工程的需要,必须对其进行改造。改造Ti质粒方法目前有:共整合载体和双元载体。 相似文献
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【目的】研究极端自然环境对链霉菌线型和环型质粒分布的影响。【方法】从西藏高原采集了20份土壤样品,分离和初步鉴定链霉菌,提取和检测质粒DNA。【结果】从中分离到46株链霉菌,其中有23株菌含有1 4个线型质粒,大小在19 650 kb之间,8个菌株含有1 4个环型质粒,大小在4 80 kb之间。【结论】西藏土壤来源的链霉菌含有大量的、多样的线型质粒和环型质粒,暗示极端环境中诸如强紫外辐射等可能会引发DNA损伤和修复,进而造成质粒的多样性。 相似文献
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根据单链起点A(SSOA)或复制起始序列的同源性,将滚环复制(PC)质粒分为几个不同的家族。由于pLS1质粒家族PC的调控机理不同于其他质粒家族,且在过去几年中该家族成员已增加到8个。事实上,由于pLS1质粒不需要组成型复制子,该家族已成为诱人的克隆载体,不仅用于各种基因的克隆,还用于研究革兰氏阳性细菌基因与革兰氏阴性细菌基因之间的互补性。 相似文献
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分枝杆菌质粒的研究进展张天民(武汉冶金医学高等专科学校,武汉430080)质粒(plasmid)为细菌胞浆中独立于染色体外的遗传单位,它能自主复制。质粒以环状双链DNA形式存在,分子链末端以共价键与各自的另一粘末端相结合,呈闭合环或共价闭合环(cov... 相似文献
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紫色非硫细菌质粒的制备与性质 总被引:2,自引:0,他引:2
介绍一种适于紫色非硫细菌质粒的制备方法,该法简单,易操作,质粒DNA纯度好,收率高,通过在加富培养基上连续传代数次,质粒DNA可自行消除。 相似文献
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下调bla表达提高pcDNA3.1+在重组菌中的稳定性 总被引:4,自引:0,他引:4
高拷贝质粒pcDNA3.1+在鼠伤寒沙门氏菌S1.7207中不稳定。通过去除pcDNA3.1+中氨繁青霉素抗性基因(bla基因)的启动子序列,仅保留其核糖体结合位点,构建了新质粒pmcDNA3.1+。SL7207(pmcDNA3.1+)在岔与不含氨苄青霉素的培养基中均能稳定保留其质粒。SI.7207(pmcDNA3.1+)的β-内酰胺酶活力明显低于SL7207(pcDNA3.1+),且接种SL7207(pmcDNA3.1+)的液体培养基中的氨苄青霉素不易被降解。腹腔接种小鼠7d后,脾脏中SL7207(pmcDNA3.1+)的质粒稳定性仍保持在95%以上,而SL7207(pcDNA3.1+)免疫后第3d99%丢失质粒。所以,通过降低bla基因的表达水平,为解决高拷贝质粒在沙门氏菌中的稳定性问题提供了新方法。 相似文献
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质粒AmpCs检测方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
张扬 《中国微生态学杂志》2003,15(5):264-265
目的:探讨质粒介导的I型β-内酰胺酶(AmpCs)的检测方法。方法:用直接法、间接I法和间接I法,对385株细菌进行了质粒AmpCs检测,并对结果进行了比较。结果:共检出阳性菌17株,可疑菌8株,直接法检出率最低,间接I法和间接Ⅱ法的检出率相同,在部分可疑结果的判断上,间接Ⅱ法不如间接I法。结论:间接Ⅱ法操作方便,可避免一些不良因素的影响,准确性和特异性高,在临床上值得应用。 相似文献
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摘要华癸中生根瘤菌菌株7653R含有2个内源质粒(pMH7653Ra,pMH7653Rb).用三亲本杂交法将7653R的共生质粒pMH7653Rb分别导入HN308SR(Sm^r,Rif^r;含pMHHN308a,pMHHN308b和pMHHN308c)和HN3015SR(Sm^r,Rif^r;含pMHHN3015a,pMHHN3015b和pMHHN3015c).发现受体菌HN308SR的两个稳定内源质粒pMHHN308b和pMHHN308c随着pMH7653Rb的导入而同时被消除.该接合子命名为HN308SRN14.这一结果表明pMH7653Rb与pMHHN308b和pMHHN308c不相容,可以归于同一不相容群.另一转移接合子HN3015SRN14的质粒图谱显示其第二大质粒pMHHN3015b由于pMH7653Rb的导入而被消除.该结果表明,pMH7653Rb与pMHHN3015b不相容.植物结瘤实验结果表明,pMH7653Rb的导入能恢复HN308SRN14的结瘤能力,其结瘤数目超过HN308SR,但不能替代pMHHN308b和pMHHN308c的固氮作用,HN308SRN14失去了固氮能力.质粒消除突变株HN308SRNl4D只含有pMHHN308a,能形成少量无效根瘤,确认pMHHN308a与HN308的结瘤能力有关.HN3015SRN14(含pMH7653Rb,pMHHN3015a和pMHHN3015c)只能形成无效根瘤,而质粒消除突变株HN3015SRN14D(仅含pMHHN3015a和pMHHN3015c)则完全失去结瘤能力.通过PCR反应从7653R,HN308,HN3015,HN308SRN14,HN3015SRN14中均检测到质粒复制基因repC.供试菌株的repC基因序列相似性达到99%. 相似文献
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蛭弧菌BDG-9质粒不稳定性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文建立了研究难于单独连续培养的专性蛭孤菌质粒稳定性的方法体系。应用此方法体系发现并证明了在传蛭孤菌BDG-9中所含的质粒pSTⅠ存在着独特的质粒缺失现象,当蛭弧菌BDG-9单独培养时,在通常决定质粒稳定性的复制功能和分配功能都正常的情况之下,随着细胞的传代,质粒pSTⅠ逐渐丢失,蛭弧菌的生长繁殖也逐渐停止,表明质粒pSTⅠ的存在对BDG-9细胞单独生长有重要作用。 相似文献