输卵管素（Oviductins）的研究进展

一类具有广泛结构多态性的输卵管特异的糖蛋白－输卵管素,可与卵子的透明带和着床前胚胎相联系。本文综述了这种糖蛋白的合成,分泌,进化上的保守性及其在受精和早期胚胎发育过程中的重要作用。     

FSH促进牦牛输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的研究

为在胚胎共培养过程中添加相关激素提高哺乳动物胚胎发育的研究提供理论依据,本研究探讨了促卵泡生成素(FSH)对牦牛输卵管上皮细胞分泌特异性糖蛋白的影响。体外分离培养牦牛输卵管上皮细胞,并在细胞中添加不同浓度的FSH,作用6 h后运用荧光定量PCR分析输卵管特异性糖蛋白mRNA的表达水平,并用细胞免疫标记对其分泌输卵管蛋白的部位进行分析。结果显示,FSH的浓度为0.5-5.0μg/m L时,输卵管蛋白的表达量随着FSH浓度的上升而增加,在5.0μg/m L的FSH作用后,输卵管蛋白的mRNA表达量最高;浓度超过10.0μg/m L时,输卵管蛋白基因的表达量降低。结果表明,FSH具有促进输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的作用,且具有剂量依赖性,其最佳作用浓度为5.0μg/m L,输卵管蛋白主要由细胞质分泌。     

沙眼衣原体感染后大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白的变化

目的研究沙眼衣原体感染后输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白的变化.方法取25只成熟Wistar雌性大鼠随机分为实验组和对照组,每组5只.对照组接种2SP代替沙眼衣原体,其余每组大鼠均在卵巢囊接种沙眼衣原体D型株.分别于感染后3,5,7,14d处死动物,取输卵管,观察大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白在感染后不同天数发生的改变,其变化可通过荧光显微镜观察与植物凝集素BS-1结合后的荧光强度来检测,并采用HPIAS-1000图文分析系统进行定量分析和SPSS11.0统计软件作统计分析.结果输卵管受损部位主要在粘膜层,富含N-乙酰-D-半乳糖胺的糖蛋白随感染的天数不同,其变化有所不同,尤其以输卵管峡部变化明显.图像分析结果显示:感染第7d时其分泌量最低,感染后第14d其分泌量逐渐恢复,且各组间差异有显著性意义(P<0.05).结论输卵管是精子与卵子结合的地方,也是胚胎早期发育的场所.富含N-乙酰-D-半乳糖胺的糖蛋白可通过参与精卵结合、受精卵卵裂和早期胚胎发育等方式,对受精卵及早期胚胎发挥保护作用.     

沙眼衣原体感染后大鼠输卵管糖蛋白的变化

目的：研究沙眼衣原体（chlamydial trachomatis,CT）感染后,输卵管粘膜的结构及糖蛋白的变化。方法：60只成年Wistar雌性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组单侧卵巢囊接种沙眼衣原体E型株,对照组接种2SP代替沙眼衣原体,分别于接种后第0.5、7、14天取材,在光镜下观察输卵管的结构变化,并采用PAS-Alcian blue染色显示输卵管内糖蛋白组分的变化。结果：对照组输卵管粘膜结构和糖蛋白组分无明显变化;实验组输卵管受损部位主要局限于粘膜层,PAS-Alcian blue染色显示沙眼衣原体感染可导致中性糖蛋白分泌减少。结论：沙眼衣原体的感染可使输卵管糖蛋白组分发生改变,这可能与反复感染的宫外孕、输卵管性不孕的发生有关。     

动情周期中大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白的表达

目的初步鉴定大鼠输卵管中存在与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白,并研究其在输卵管中的定位和不同动情周期中糖蛋白的表达变化.方法根据阴道涂片检查将大鼠分为:间情期(DE)组、动情前期(PE)组、动情期(E)组和动情后期(ME)组.用冰冻切片法、荧光组化技术和共聚焦显微镜技术观察大鼠输卵管中与BS-1结合糖蛋白的分布及表达变化.结果大鼠输卵管中存在与BS-1结合的糖蛋白,并呈节段性分布,即峡部＞壶腹部.动情周期中大鼠输卵管糖蛋白的表达:动情期＞动情前期＞动情后期＞间情期.结论大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白在动情期(E)峡部上皮表达最明显,具有雌激素依赖性.     

昆明小鼠原核胚在不同培养液中的体外发育

目的优化昆明小鼠原核胚胎体外培养系统,提高胚胎发育率.方法小鼠经超排获得原核期胚胎,制备小鼠输卵管上皮共培养系统,使用M16、CZB和KSOM培养液进行体外培养,并对体内和体外发育的囊胚细胞计数.结果在KSOM和CZB中添加胎牛血清能显著提高胚胎囊胚发育率(14.71%对85.71%;6.45%对10.81%);输卵管上皮共培养可以提高胚胎的卵裂率和囊胚发育率,同时提高胚胎质量和同步发育,小鼠胚胎在KSOMFBS中囊胚发育率达85.19%,显著高于CZB和M16.结论在小鼠输卵管上皮共培养条件下,KSOMFBS能够很好支持昆明小鼠原核期胚胎体外发育.     

增龄对大鼠输卵管粘膜上皮糖蛋白的影响

目的揭示增龄对大鼠输卵管粘膜上皮糖蛋白的影响.方法分别以5只1月龄、8月龄和18月龄健康雌性SD大鼠作为性成熟前期组(IMG)、性成熟期组(MG)和更年期组(CMG).取输卵管石蜡切片,然后进行PAS及PAS-阿尔新蓝染色.结果①PAS反应显示:峡部粘膜上皮阳性反应明显,三组阳性产物平均光密度值相比,MG与IMG、CMG间差异有高度显著性(P<0.01).②PAS-阿尔新蓝染色显示:峡部粘膜皱襞处上皮细胞游离面有少量淡蓝色阳性产物出现,三组间淡蓝色阳性产物未见明显差异.结论大鼠输卵管峡部粘膜上皮能合成和分泌两种蛋白质:中性糖蛋白和酸性糖蛋白.增龄对大鼠输卵管峡部粘膜上皮中性糖蛋白的合成和分泌有明显的影响,对酸性糖蛋白无明显影响.     

共培养体系在牛核移植胚体外发育培养中的应用

采用电融合法构建牛体细胞核移植重构胚,分析共培养细胞类型、传代次数、细胞冻-融以及蛋白质添加物(BFF和FBS)对牛体细胞核移植胚体外发育的影响,探讨胚胎体外共培养的条件,以建立优化的共培养体系。结果表明与非共培养组相比,共培养组重构胚的囊胚发育率以及胚胎细胞数显著增加(P<0.05),而输卵管上皮细胞共培养组同颗粒细胞共培养组相比胚胎细胞数显著增加(P<0.05),更适合做共培养细胞;随着共培养细胞传代次数的增加重构胚囊胚发育率及胚胎细胞数显著下降(P<0.05),共培养细胞在冷冻处理后重构胚的囊胚率和胚胎细胞数都显著下降(P<0.05);BFF较FBS更能促进牛核移植胚的囊胚发育率(P<0.05)。表明应用新鲜原代输卵管上皮细胞进行牛核移植胚胎的共培养,并在SOFaa添加10?F能够有效促进核移植胚胎的体外发育。     

金黄仓鼠早卵裂期胚胎发育的研究

研究结果证明:(1)本研究制备和采用的金黄仓鼠(Mesocricetus aurilus)血清是体外培养金黄仓鼠胚胎的有效成分;(2)丙酮酸钠和乳酸钠加入TC-199液中可显著提高金黄仓鼠胚胎的发育率;(3)TC-199(Ⅱ)、台氏液和杜氏液加适量FCS或PHS都是培养金黄仓鼠胚胎的有效培养液;(4)本研究中已观察到4-细胞期胚胎在体外培养时的进一步发育;(5)金黄仓鼠2-细胞期胚胎移植至雌金黄仓鼠受体的输卵管中可继续发育,培养子兔输卵管中可存活44小时以上。     

动物细胞生物工程 第1卷

包括的内容有:一,绪论:1.引言 二、细胞培养系统的基本组成部分:2.细胞生物学——基本概念;3.细胞生物——实验;4.细胞生长培养基;5.设备消毒;6.空气消毒;。三、大量细胞培养;7.动物细胞的大批培养和产物;8.动物细胞在连续活动培养基中培养;9.单层细胞生长系统——增殖过程;10.单层细胞生长系统——异型单一过程;     

大鼠高血压相关基因表达蛋白抑制血管平滑肌细胞增殖

大鼠高血压相关基因 ( r HRG- 1 )编码一新细胞内信号传递蛋白 .体外转染 r HRG- 1表达蛋白发现 r HRG- 1表达蛋白能抑制自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内 Raf蛋白 ( Raf- 1 )和丝裂素活化蛋白激酶 ( MAPK)活性 ,抑制抗细胞凋亡基因 ( bcl- 2 )和增殖细胞核抗原 ( PCNA)基因 m RNA表达 ,同时还抑制该细胞 DNA的合成 .r HRG- 1是一正常血压大鼠血管平滑肌细胞内高度表达的基因 ,由此推测在自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内转染 r HRG- 1表达蛋白抑制其细胞 DNA合成的作用可能是抑制细胞内 Raf- 1活性与 MAPK活性及抑制 PCNA和 bcl- 2基因表达的结果     

芸苔属植物自交不亲和性及其机理研究进展

自交不亲和性广泛存在于芸苔属植物当中,有着防止自交衰退等作用,在育种工作中意义重大。本文综述了芸苔属植物自交不亲和性及其表现,自交不亲和内在机制,如S复等位基因及相互作用,S位点糖蛋白,S多基因家族,S位点受体激酶,蛋白质可逆磷酸化等 。     

重组人内皮抑素的结构改造及抗肿瘤活性变化

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑素的抑瘤率分别为 4 0 6 6 %和5 1 0 5 % ,诱变内皮抑素抑瘤率比野生内皮抑素提高了近 11个百分点 .病理切片HE染色诱变组肿瘤的血管生成比野生组明显减少 ,坏死灶增多 .免疫组化试验中 ,诱变组在微血管密度MVD(P <0 0 5 )、血管内皮生长因子VEGF(P <0 0 5 )、增殖细胞核抗原PCNA(P >0 0 5 )三个指标上均比野生组减小 .体外细胞实验中 ,MTT结果表明 ,野生组内皮抑素半数抑制浓度IC50 =185 μg ml,诱变组内皮抑素IC50 =2 7μg ml,诱变组抑瘤活性是野生组的 6倍 .细胞迁移抑制实验表明 ,野生组与诱变组内皮抑素均对肿瘤细胞迁移有抑制作用 ,野生组迁移抑制率为 6 8 95 % ;诱变组迁移抑制率为89 94 % .上述结果说明 ,内皮抑素除抑制血管生成外 ,对肿瘤细胞的生长和迁移也有一定的抑制作用 .诱变内皮抑素通过RGDRGD序列与整合素结合而提高了抗肿瘤活性 .     

肿瘤MUC1/Y的克隆及其胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化和鉴定

为获得MUC1 Y全长cDNA及其胞外段蛋白 ,以用于进一步的生物学功能及肿瘤生物学治疗的研究 .利用RT PCR从HeLa细胞中扩增MUC1 Y全长cDNA ;PCR扩增其胞外段 ,克隆到原核表达载体pGEX 2T ,转化DH5a菌 ,诱导表达 ;亲和层析纯化 ;凝血酶酶切、GST活性及N端蛋白测序鉴定 ;免疫家兔制备多克隆抗体 .所得MUC1 YcDNA的开放读框为 759bp ,登录于GenBank(AF12 552 5) .其信号肽编码序列缺失 9bp ,第 3 3 1位发生G A转换 ,造成缬氨酸突变为蛋氨酸 .表达获得约 4 0kD融合蛋白GST Yex ,占菌体总蛋白 2 5%～ 3 0 % ,其中 70 %～ 80 %为可溶性 ,经亲和层析一步纯化 ,纯度 >90 % ,GST比活性为 0 2 1U μg .凝血酶酶切后的N端蛋白序列测定表明与已知序列完全一致 ,抗血清ELISA效价为 1∶2 50 0 0 0 .结果表明 ,克隆到发生碱基缺失和突变的MUC1 Y全长cDNA ,获得MUC1 Y胞外段蛋白及其多抗 ,可进一步用于相关研究 .     

Tat碱性结构域-Bcl-Xs融合蛋白与细胞短暂共培养可诱导细胞程序性死亡

艾滋病毒的 Tat蛋白碱性结构域的 1 3个氨基酸的多肽能自主穿越细胞膜并将与之融合表达的其他蛋白带入细胞 .为探讨融合表达的蛋白是否可保持原有的主要生物学功能 ,将 Bcl- Xs蛋白与 Tat碱性结构域在大肠杆菌中融合表达 ,重组蛋白 Tat- Bcl- Xs与 CHO、CNE、Hela和 772 1细胞共温育一段时间后 ,细胞均可见明显生长抑制 ,同时细胞变圆、变小、细胞核收缩 ,并有染色体凝聚、边缘化 ,或细胞核分裂为小核的现象 ,同时出现梯状 DNA,为较典型的细胞程序性死亡 ( PCD)表现 .同时发现放线菌素 D、雷公藤内脂醇与 Tat- Bcl- Xs在诱导细胞 PCD时存在交互作用 .提示Tat- Bcl- Xs蛋白可自主进入细胞内 ,并保持了 Bcl- Xs蛋白的 PCD诱导作用 ,初步证实了利用 Tat碱性结构域进行药物设计的可行性 ,同时也提示 Tat- Bcl- Xs蛋白可能可作为多种药物联合治疗中的一员而在抗肿瘤治疗中发挥作用     

人可溶性血管内皮细胞生长因子受体Flt-1基因在链霉菌中的克隆表达

应用RT－PCR技术,从人脐静脉内皮细胞中扩增出编码人可溶性血管内皮细胞生长因子（VEGF）受体Flt-1胞外区前四个结构域的基因片段,亚克隆至pUC18质粒进行测序,将目的基因片段连接至链霉菌表达载体pSGLgpp,获得重组质粒pSGLgpp-F,将其转化至Streptomyces lividans TK24,获得基因工程菌株Sreptomyces lividans(pSGLgpp-F),对其培养上清液进行SDS－PAGE及Western blot分析,结果显示,在63．6kD处有特异性条带出现,表明sFLT-1在链霉菌中获得了成功表达,受体配基结合实验显示表达产物与VEGF可特异性结合,表明其具有配基结合生物活性。     

脂肪酶在微乳液和微乳液凝胶中催化辛酸辛醇的酯化反应

脂肪酶在合成反应中具有很高的区域选择性和立体选择性 ,已广泛用于食品工业和药物工业[1,2 ] ,在有机介质中的脂肪酶催化反应已有较多研究[3 ,4 ] 。微乳液一般由表面活性剂、助表面活性剂、油和水等组份组成 ,它是一种热力学稳定、光学透明、宏观均匀而微观不均匀的体系 ,能提供酶催化所需要的巨大油 /水界面[5] 。而将脂肪酶增溶于油包水(Ｗ /Ｏ)微乳液中的纳米级“水池”中 ,可使酶以分子水平分散[6] ,图 1(ａ) ,从而可用来模拟细胞微环境中的反应。油包水微乳液中的酶可通过加入明胶而制成固定化酶 ,含明胶的微乳液凝胶 (ＭＢＧｓ)最早…     

梅花鹿卵泡刺激素β亚基cDNA的分子克隆与序列分析

卵泡刺激素又叫促卵泡激素 (ｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ ,ＦＳＨ)是由动物脑垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素 .ＦＳＨ是由两个可解离的亚基所组成 ,称为α亚基和 β亚基 ,二者以非共价键相连 .糖基是以Ｎ 糖苷键的方式连结在α和 β两个亚基各自的区域 .β亚基由 115个氨基酸组成 ,是激素生物活性和免疫活性的决定因素[1] .ＦＳＨ在雌性用于刺激卵泡发育 ,促进子宫内膜生长 ,促排卵 ,可刺激多个卵泡发育 .在雄性则能诱导曲细精管生长 ,维持精子生成 ,刺激睾丸间质细胞发育 .ＦＳＨ与细胞…     

全反式维甲酸抑制肝癌细胞β-连环素的表达

 全反式维甲酸 (ATRA)是人肝癌细胞株SMMC 772 1的分化诱导剂 ,刺激细胞向正常方向分化 .为了研究ATRA诱导细胞分化的机制是否与 β 连环素 ( β catenin)有关 ,用终浓度为 1 0 μmol LATRA刺激SMMC 772 1 ,发现胞浆内β 连环素明显降低 .进一步实验证实 ,ATRA下调胞浆内β 连环素和诱导β 连环素的mRNA降低有关 .同时 ,ATRA处理基本不会对E 钙粘附素 β 连环素中的β 连环素的量产生影响 ,但能增强细胞凝聚力 .结果提示 ,ATRA对两种形式的 β 连环素的调节机制是不一样的 ,ATRA诱导细胞分化的机制和β 连环素有关 .     

微生物合成中链聚羟基烷酸酯研究进展

某些微生物细胞在特定营养限制的条件下会产生聚羟基烷酸酯作为碳源储备。和短链聚羟基烷酸酯(PHB)一样 ,中链聚羟基烷酸酯由于具有更优良的性能、更高的附加值和更广泛的用途而受到人们的关注 ;此外 ,中链聚羟基烷酸酯还可以被人工合成为具有功能性侧链的半合成高聚物 ,并因此能够具有更好的弹性和更理想的结晶性能等优点 ,从而成为近年来对环境友好的生物可降解材料的研究重点。在能够合成中链聚羟基烷酸酯的微生物中 ,食油假单胞菌是最典型 ,也是研究得最多的一种。本文对由食油假单胞菌合成中链聚羟基烷酸酯的特点、代谢机制、发挥过程等内容进行了综述 ,并提出了这一研究领域未来可能的研究方向