大黄素对豚鼠结肠带细胞内腺嘌呤核苷酸的影响

大黄素 (Ｅｍｏｄｉｎ)是中药大黄 (Ｒｈｕｂａｒｂ)有效成分蒽醌类衍生物之一。我们已报道 ,大黄素通过促进豚鼠结肠带平滑肌细胞膜电位去极化 ,增强细胞的电兴奋性和收缩活动 ;大黄素作用受ＫＡＴＰ通道特异激动剂ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ的抑制 ,提示其作用与抑制ＫＡＴＰ通道活性相关。本文进一步研究了大黄素对豚鼠结肠带细胞内ＡＴＰ、ＡＤＰ和ＡＭＰ的影响。1　材料与方法(1)标本制作和实验条件　健康豚鼠 (310± 2 5 )ｇ雌雄不限。制备分离的豚鼠结肠带标本 ,长 10ｍｍ ,固定于浴槽中 ,自由收缩的一端与肌张力传感器相连。用改良的Ｋｒ…     

内皮素和ATP敏感性钾通道介导缺氧所致家兔窦房结起搏细胞的电生理效应

用细胞内微电极技术研究了ＡＴＰ－敏感性钾（Ｋ_（ＡＴＰ））通道和内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ,ＥＴ）在缺氧所致窦房结起搏细胞负性频率中的作用,主要结果如下：（１）缺氧引起窦房结起搏细胞的ＲＰＦ降低和ＡＰＤ缩短,这一效应随时间延长而加重。（２）Ｋ_（ＡＴＰ）通道开放剂ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ浓度依赖性地对窦房结起搏细胞有负性频率作用,且明显缩短ＡＰＤ_（５０）。该通道的阻断剂格列苯脲能部分阻断缺氧对起搏细胞的上述效应,表明缺氧效应中有Ｋ_（ＡＴＰ）通道的参与。（３）ＥＴ－１可显著加重缺氧所致的ＲＰＦ降低,使起搏细胞停跳时间前移;而以ＥＴ_Ａ受体阻断剂ＢＱ－１２３预处理窦房结标本后,则能有效地缓解缺氧对起搏细胞的效应,提示内源性ＥＴ－１的释放在缺氧效应中的作用。上述结果表明,缺氧所致起搏细胞的负性频率作用和ＡＰＤ缩短,与Ｋ_（ＡＴＰ）通道的激活和内源性ＥＴ－１的释放有关。     

KATP通道介导异氟醚所致的冠状动脉细小分支的舒张

目的和方法：用微血管口径直接测量技术，评介挥发性麻醉气体Ｉｓｏｆｌｕｒａｎｅ，ＫＡＴＰ通道开放剂ｃｒｏｍａｋａｌｉｒｎ和非特异笥血管扩张剂ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ对精冠状动脉和细小分支直径的作用，并研究了ＫＡＴＰ通道阻ｇｌｉｂｅｎｅｌａｎｉｄｅ对血管口径的影响。结果：Ｃｄｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ显著 Ｉｓｏｎｕｒａｎｅ和ｃｒｏｍａｌｋａｌｉｍ的血管扩张作用，而ｓｏｄｉｕｍｎｉｔｒｏｐ     

多巴胺对血管平滑肌细胞钙激活钾通道的影响及其机制

目的：研究多巴胺对血管平滑肌细胞大电流、钙激活钾（ＢＫｃａ）通道的影响及其信息传递机制。方法用膜片钳细胞贴附式技术,记录细胞能液内灌流多巴胺受体激动剂、阻断剂以及第二信使及相关蛋白激酶拮机剂对猪冠状动脉血管平滑肌细胞ＢＫｃａ 爱道活动的影响。结果：多巴胺增加ＢＫｃａ通道活性（Ｐ〈０．０１）,并可被ＣＡ－１受体阻断剂ＳＣＨ２３３９０完全阻断,但不受β２受体阻断剂普藉洛尔的影响。腺苷酸环化酶抑制剂ＳＯ     

大黄素对豚鼠结肠带平滑肌细胞电和收缩性能的影响

联合应用平滑肌肌力张力测量技术和细胞内微电极记录技术,同步地现测豚鼠结肠带平滑肌自发的肌源性电活动和力学活动,研究了大黄素的药物作用。大黄素能缩短膜电位的波动周期,从而缩短峰电位集簇发放的周期;相应地,可使平滑肌的分节律收缩加快,幅值指数升高。大黄素又能促使细胞膜电位自发的周期性波动的出现,导致峰电位的集簇发放;相应地,可使强直收缩转化为分节律收缩,即促进收缩形式向有利于肠道推进功能的方向转化。以上结果表明,大黄素能有效地提高豚鼠结肠带平滑肌细胞的电兴奋性和收缩功能,并且对其电学和力学活动的影响之间有明确的对应关系。     

胰岛素分泌的细胞内调节物——ADP

胰岛素分泌的细胞内调节物——ＡＤＰ美国华盛顿大学医学院的Ｎｉｃｈｏｌｓ等最近指出,ＡＴＰ敏感型钾通道（ＫＡＴＰ）把细胞代谢过程与电活动相偶联,并且在血糖浓度与胰岛素分泌之间扮演关键的联结角色。一种个体硫酰受体（ＳＵＲ）二级核苷酸键折叠（ＮＢＦ２）突变...     

急性分离的大鼠皮层神经细胞膜去极化激活的优降糖敏感钾单通道电流

本实验利用氰化物阻断细胞呼吸链模拟缺氧模型,采用膜片钳技术的记录方法,对急性分离的大鼠大脑皮层神经细胞膜上ＡＴＰ敏感Ｋ￣＋通道特性进行研究。结果提示：在急性分离的大鼠大脑皮层神经细胞膜丢极化激活时,可记录到一类被优降糖（ＡＴＰ敏感钾通道阻断剂）阻断的钾通道,可能属新型ＡＴＰ敏感Ｋ￣＋通道。     

大鼠胰腺β细胞离子通道的一些特性

实验以单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺β细胞为对象,用穿孔膜片箝和细胞贴附式记录技术研究ＡＴＰ敏感Ｋ＾＋通道（ＫＡＴＰ）、延迟整流型Ｋ＾＋通道（ＫＤＲ）、Ｃａ＾２＋通道和Ｎａ＾＋通道的有关特性。结果表明：⑴ＫＡＴＰ通道的内流电导约６５ｐＳ,外流电导约３１ｐＳ,反转电位在－６０ｍＶ左右;⑵ＫＤＲ通道在延迟２０ｍｓ后达到最大激活,ＫＤＲ电流约为ＫＡＴＰ的１／３;⑶钙电流在０ｍＶ左右达到４０－６０ｐＡ的峰值,Ｌ     

内皮素对家兔窦房结起搏细胞电活动的影响

本文用细胞内微电极技术观察了ＥＴ－１对家兔窦房结起搏细胞电生理活动的影响。所得结果如下：（１）在以ＥＴ－１作表面灌流时,起搏细胞的４相自动去极化的速度（ＶＤＤ）显著减慢,且呈浓度依赖性,结果导致起搏细胞的自发放电频率（ＲＰＦ）降低。（２）由ＥＴ－１引起的ＶＤＤ和ＲＰＦ下降,可由事先投用ＥＴ＿Ａ＾受体选择性阻断剂ＢＱ－１２３（２０,１００μｇ／Ｌ）所阻断。这一结果有力提示,ＥＴ－１对起搏细胞的电生理效应是由ＥＴ＿Ａ受体亚型介导的。（３）事先投用Ｋ＿（ＡＴＰ）通道阻断剂格列苯脲（１０μｍｏｌ／Ｌ）,可完全消除ＥＴ－１对起搏细胞的负性频率作用。根据上述结果,似可认为,ＥＴ－１与ＥＴ＿Ａ受体的结合可激活Ｋ＿（ＡＴＰ）通道,致使Ｋ￣＋电流增加和起搏细胞的ＶＤＤ减慢。     

银杏内酯对大鼠胃平滑肌电活动的作用

目的：探讨银杏叶提取物银杏内酯Ａ对胃肌电活动的影响。方法：离体灌注大鼠胃平滑肌标本,细胞外记录方法观察用药后平滑肌自发电活动的变化特点及其规律。结果：银杏内酯Ａ在１μｍｏｌ／Ｌ浓度时可显著压抑甚或消除外源性乙酰胆碱所倡导的峤民位活动增强作用（ｎ＝１２,Ｐ〈０．０１）,但对平滑肌的正常慢波和自发峰电位活动无明显影响;在较高浓度（５０μｍｏｌ／Ｌ）时,银杏内酯Ａ则使胃电慢波频率较对照增加,峰电位的活动     

急性分离大鼠新皮层神经元上游活的KATP单电导多通道电流

目的和方法：探讨脑缺血时ＡＴＰ酶感钾（ＫＡＴＰ）通道的变化,在急性分离大鼠皮层神经元上,分别采取膜片钳技术的细胞贴附式和内面向外式记录方法,观察ＮａＣＮ、ＡＴＰ、乳酸和ｐＨ诱发的ＫＡＴＰ,单电导多通道电流。结果：ＫＡＴＰ多通道电流,均为外向电流;第一级电流电导与第二级电流电导基本相同,即为单电导多通道电流。贴附式记录时,对照组和ＮａＣＮ多通道电导分别为（９７．１６±９．３２）ｐＳ和（９３．４９±７     

大鼠基底动脉和尾动脉平滑肌G蛋白的异质性

用离体血管收缩功能实验法分析了大鼠基底动脉（ＢＡ）和尾动脉（ＣＡ）平滑肌细胞Ｇ蛋白的异质性。结果显示,当ＢＡ和ＣＡ平滑肌被精氨酸血管加压素（ＡＶＰ）激动后,该两种血管对Ｇ蛋白非选择性激活剂ＧＴＰγＳ的收缩反应发生了相反的变化：ＢＡ对ＧＴＰγＳ的收缩增强,并且这种收缩增强不受百日咳毒素（ＰＴ,Ｇｉ和Ｇｏ抑制剂）的影响。而霍乱毒素（ＣＴ,Ｇｓ激活剂）则完全抑制这种收缩,呈单相反应。与ＢＡ相反,ＣＡ对ＧＴＰγＳ的收缩减弱,后者可被ＰＴ预温育反转为收缩增强,而且ＣＴ对这种收缩的抑制作用短暂,呈双相反应。结果提示,ＢＡ和ＣＡ平滑肌细胞介导激动剂收缩反应的Ｇ蚕白存在异质性。     

血管平滑肌细胞上的自发内向阳离子通道

采用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌ－ａｔａｃｈｅｄ）,在酶法分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上记录到一种自发的内向阳离子通道。结果发现：１、在实验条件下（池子液：Ｋｒｅｂｓ,电极液：高钾）,该通道电导为２６．５±４．１ｐＳ,且具有明显的电压依赖、时间依赖和Ｃａ２＋依赖的特性;２、该电流具有极显著的内向整流特性;３、离子替换实验表明,该通道对Ｎａ＋和Ｋ＋具有很好的通透性,对Ｃｌ－的通透则很差;４、胞外加入４－ＡＰ（２ｍｍｏｌ／Ｌ或５ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＢａＣｌ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＣｓＣｌ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）均不能抑制该电流;５、内向阳离子电流可与Ｃａ２＋－激活Ｋ＋电流在同一细胞上交替活动,提示这两种电流可能在调控平滑肌细胞的基本活动方面起关键作用。     

cGMP对原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的作用

３′,５′－环－磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）具有激活血管平滑肌细胞膜上钙激活钾通道（ＫＣａ通道）的作用,从而引起血管平滑肌细胞的舒张。但ｃＧＭＰ激活ＫＣａ物机制存在争论。本工作应用膜片箝技术以原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞为对象研究了ｃＧＭＰ影响ＫＣａ通道的机制。实验结果显示：（１）在ｃｅｌｌ－ａｔｔａｃｈｅｄ膜片方式下,当溶液内游离Ｃａ＾２＋浓度为１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ,膜电位为＋７０ｍＶ时,不同浓度的ｃＧ     

噬菌体RB69 DNA聚合酶的表达、分离纯化和其聚合反应的稳态动力学研究

噬菌体ＲＢ６９外切酶活性缺失的ＤＮＡ 聚合酶突变体（Ｄ２２２Ａ／Ｄ３２７Ａ）在大肠杆菌细胞中表达,表达量达细胞蛋白总量的６９％ ．表达后经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦａｓｔＦｌｏｗ , Ｓｏｕｒｃｅ ３０Ｑ 和ＨＴＰ三步分离纯化,纯度可达９９％ 以上．随后测定了该酶利用５种ｄＮＴＰ为底物进行聚合反应的酶促动力学常数（Ｋｍ 和Ｋｃａｔ）,结果表明该酶利用ｄＵＴＰ的能力与利用ｄＴＴＰ的能力相近,Ｋｍ （ｄＴＴＰ）和Ｋｍ（ｄＵＴＰ）均较高于其它３种脱氧核苷酸的Ｋｍ （ｄＡＴＰ, ｄＣＴＰ, ｄＧＴＰ）,推测其Ｋｍ 值的差异主要来源于Ｔ／Ｕ 碱基本身,而并非全部由ＧＣ碱基配对与ＡＴ碱基配对之间的氢键作用力的强弱差别所决定．     

心脏K^＋通道

Ｋ＾＋通道是生物膜上一种调节Ｋ＾＋流的跨膜蛋白质,广泛存在于各种可兴奋的细胞。在维持心脏正常功能方面发挥重要作用。本主要讨论内向整流Ｋ＾＋通道,延迟整流Ｋ＾＋通道,瞬进外向电流Ｋ＾＋通道,毒蕈碱／腺激活Ｋ＾＋通道,ＡＴＰ敏感性Ｋ＾＋通道的基本特性,及其在心脏电生理作用中的重功能,和相关的分子生物学信息。     

蚕豆和玉米叶绿体atpE基因表达产物的生物活性差异 …

编码蚕豆和玉米叶绿体ＡＴＰ合酶ε亚基的ａｔｐＥ基因分别在大肠杆菌中获得了高效表达,两种表达的ε亚基蛋白在抑制ＣＦ１－ＡＴＰ酶水解ＡＴＰ、阻塞类囊体膜质子通道以及它促进光合磷酸化等方面均明显地强于蚕豆的ε亚基蛋白。该结果表明：（１）ε亚基对ＡＴＰ合酶活性的调节作用与基同ＡＴＰ合酶其他亚基间的亲和力大小密切相关;（２）ε亚基抑制ＣＦ１水解ＡＴＰ和阻塞质子通道两个功能是呈正相关的。圆二色性（ｃｉｒｃｕｌ     

平滑肌肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白功能调节

在有Ｃａ２＋和钙调蛋白存在时,肌球蛋白轻链激酶催化肌球蛋白磷酸化,促使肌动蛋白激活的肌球蛋白（肌动球蛋白）Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性显著增加．然而,肌球蛋白磷酸化水平与Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶之间的关系是非线性的,原肌球蛋白可以进一步增加Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活性,但仍不改变它们之间的非线性关系．肌球蛋白轻链激酶的合成肽抑制剂抑制了肌球蛋白磷酸化和Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性,并导致平滑肌去膜肌纤维的等长收缩张力与速度的降低．结果提示肌球蛋白轻链激酶参与脊椎动物平滑肌收缩的调节过程,肌球蛋白轻链磷酸化作用会引起平滑肌收缩     

库容性Ca2+内流参与ACh诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩

应用生物换能技术和Ca^2＋通道特异性阻断剂观察并记录大鼠离体远端结肠平滑肌收缩张力的变化,分析库容性Ca^2＋内流（capacitative Ca^2＋ entry,CCE）是否与ACh诱导的离体远端结肠平滑肌收缩反应有关。结果表明,以无钙的Krebs液灌流或应用EGTA螯合细胞外Ca^2＋后,高K^＋及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩几乎完全消失。电压操纵性Ca^2＋通道阻断剂verapamil也能减弱高K^＋及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩,其减弱的程度分别为74％和41％。在无钙的Krebs液中,5μmol／LACh可引起离体肠管瞬时性收缩,这是由肌质网（sarcoplasmic reticulum,SR）释放钙所致：然后加入10μmol／L阿托品（atropine）,并在此基础上恢复细胞外Ca^2＋（2．5mmol／L）,结肠平滑肌则出现持续性收缩,待收缩反应达峰值时,加入5μmol／L verapamil,收缩无明显变化,且该收缩反应对钙库操纵性通道（store-operated Ca^2＋ channel,socc）阻断剂La^3＋敏感,20,50和100μmol／L的La^3＋使上述收缩张力分别降低15％,23％和36％,且呈浓度依赖性,但对Cd^2＋不敏感。研究结果提示,细胞外Ca^2＋内流对高K^＋及ACh介导的离体远端结肠平滑肌持续性收缩是必需的,由ACh诱导的远端结肠平滑肌收缩至少包括SR释放钙引起的短暂性收缩及受体操纵性Ca^2＋通道（receptor-operated Ca^2＋ channel,ROCC）、电压操纵性Ca^2＋通道（voltage-operated Ca^2＋ channel,VOCC）和CCE介导的胞外Ca^2＋ 内流等途径。这将从通道水平进一步分析消化管平滑肌收缩的机制和特征,亦将为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病寻求有针对性的药物干预和治疗提供理论依据。     

ATP敏感性钾通道在预缺血对麻醉家兔缺血心肌保护中的作用

在氨基甲酸乙酯和戊巴比妥钠两种不同麻醉的家兔心肌缺血－再灌注模型,观察了ＡＴＰ敏感性钾通道开发剂ｃｒｏｍａｋｌｉｍ（Ｃｒｏ）和预缺血（ＩＰ）对血流动力学和心肌梗塞范围的影响,旨在阐明ＫＡＴＰ通道是否与ＩＰ对ＩＲ心肌的保护机制。