氧化修饰LDL诱导U937细胞凋亡及其机制探讨

用氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导人髓系白血病细胞株U937细胞凋亡,并研究其作用机制.用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL法)、流式细胞仪和DNA断裂分析检测细胞凋亡;用免疫组化检测c-fos、c-jun和c-myc蛋白表达,RT-PCR显示c-fos、c-jun和c-myc mRNA表达水平.结果表明ox-LDL可致U937细胞凋亡,其作用具有浓度效应;ox-LDL可以上调c-fos、c-jun和c-myc基因表达,使c-fos、c-jun和c-myc蛋白合成增多,最终诱导U937细胞凋亡.     

PI3K/AKT途径在大肠埃希菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的探讨PI3K/AKT信号转导通路在大肠埃希菌（Escherichia coli,E.coli）诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法利用Western blot分析检测E.coli感染不同时间后磷酸化及非磷酸化AKT的表达;预先用不同浓度的LY294002（PI3K途径抑制剂）处理U937细胞60min,观察E.coli感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果随着感染时间的延长,磷酸化AKT的表达逐渐下降。加入PI3K的抑制剂LY294002后,U937细胞的凋亡率逐渐升高。结论PI3K/AKT信号转导通路参与了E. coli诱导的U937细胞凋亡过程。LY294002通过特异性地抑制PI3K/AKT活性增加E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

大肠杆菌诱导U937细胞凋亡过程中bcl-2和bax基因的表达

目的研究bcl-2和bax在大肠杆菌诱导U937细胞凋亡中的作用。方法U937细胞的凋亡用AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪技术测定。Bcl-2和bax基因表达用RT-PCR法测定。结果当细胞与细菌浓度比分别为0,1:5,1:10,1:20,1:50及1:100时作用30min均可诱导U937细胞凋亡,凋亡率分别为3·16%±0·90%,9·46%±0·84%,17·90%±1·41%,35·59%±3·76%,38·35%±7·12%和55·07%±5·82%,呈浓度依赖性。在细胞凋亡过程中bcl-2和bax的表达均呈现趋势变化,bax表达逐渐增强,bcl-2表达逐渐减弱。结论E.coli可诱导U937细胞凋亡;其机制涉及bcl-2表达下调和bax表达上调。     

丝裂原活化的细胞外信号调节激酶在金黄色葡萄球菌诱导的U937细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK1／2）在金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法采用AnnexinVFITc／PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡,用Westernblotting方法分析不同作用时间MEK和ERK1／2的磷酸化水平。预先用不同浓度的PD98059（ERK途径抑制剂）处理U937细胞1h,观察金葡菌感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果U937细胞经过金葡菌处理后,发生凋亡,细胞凋亡率呈时间依赖性升高;随着感染时间的延长,MEK和ERK1／2的磷酸化水平逐渐增加,尤以ERK2比较明显。U937细胞的凋亡可被PD98059抑制。结论金葡菌以时间依赖的方式诱导U937细胞凋亡;金葡菌诱导U937细胞凋亡的效应与激活ERK1／2信号转导通路有关。     

线粒体凋亡途径的研究进展

线粒体凋亡途径是细胞凋亡的主要途径之一。是目前研究凋亡的热点,各种凋亡刺激信号通过BH3（Bcl-2homology domain3)-only蛋白引起Bax(Bcl-2-asslciated proteinX)蛋白移位到线粒体外膜并多聚化,形成膜通道,刺激线粒体释放细胞色素C（CytC)和Smac(second mitochondrial-derived activator of caspase),CytC通过Apaf-1因子的多聚化与胱天蛋白酶（caspases)-9形成凋亡小体,导致下游胱天蛋白酶的级联反应,而凋亡蛋白抑制因子（IAP）和Smac通过抑制和促进胱天蛋白酶的级联反应来调控细胞凋亡。     

细胞凋亡与线粒体细胞色素c

１细胞色素ｃ在细胞凋亡中的作用Ｋｅｒｒ于１９７２年提出了细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）,随后发现细胞凋亡现象普遍存在于各种生物中,与细胞的生长发育,免疫调节以及许多病变如肿瘤有直接关系。与细胞坏死不同,细胞凋亡是一个相对主动的过程,伴随着一系列形态上...     

猪丁型冠状病毒诱导的细胞线粒体凋亡

猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型的猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪群剧烈腹泻及呕吐,但致病机制尚不清楚。本研究检测了PDCoV感染诱导的细胞凋亡。Caspase酶活性检测显示,在PDCoV感染的细胞中,caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性随病毒感染量的增多而显著提高,类似的现象未能在紫外灭活病毒感染的细胞中观察到,表明PDCoV感染可同时激活内源性与外源性细胞凋亡通路,并暗示细胞凋亡的诱导依赖于病毒复制。为深入探究PDCoV诱导的内源性细胞凋亡,分别检测胞浆和线粒体中细胞色素C与凋亡诱导因子。结果显示,与正常细胞相比,PDCoV感染细胞从线粒体释放到胞浆的细胞色素C显著增多,且其释放量随着感染时间的延长而增多,而凋亡诱导因子始终定位于线粒体,提示PDCoV感染通过促使线粒体膜间隙的细胞色素C进入胞浆而启动caspase依赖的线粒体凋亡通路。本研究初步揭示了PDCoV诱导细胞凋亡的机制。     

不同表型的结核分枝杆菌诱导U937细胞凋亡率差异分析

目的利用流式细胞技术检测耐多药结核分枝杆菌(Multidrug resistant mycobacterium tuberculosis,MDRTB)临床分离株和结核分枝杆菌一、二线药物敏感株分别感染U937细胞后的凋亡率及其时相性变化。方法用两组细菌分别感染U937细胞,在感染后2、4、8及12 h用流式细胞技术检测各组感染U937细胞的凋亡率,并分析其时相性变化。结果结核分枝杆菌MDR株和敏感株均能诱导U937细胞凋亡,两组细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P0.01),MDR株诱导U937细胞凋亡率显著低于敏感株诱导的凋亡率,且在诱导后2、4、8及12 h各时间点的凋亡率都显著低于敏感株组,诱导早期凋亡率升高显著,特别是诱导后2 h凋亡率升高最显著,4 h以后凋亡率升高逐渐变慢。结论结核分枝杆菌临床分离株感染U937细胞后能快速诱导其凋亡,凋亡率与诱导菌株的耐药表型相关,敏感株诱导的凋亡率显著高于MDR株,诱导早期凋亡率升高最显著,4 h以后凋亡率升高减慢。     

青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制

目的:探讨青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制.方法:用青蒿素处理K562细胞.通过MTT比色法检别细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析;Western-blotting测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素C的表达.结果:青蒿素抑制K562细胞的增殖,IC5D为1.5× 10-5mol·L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测G2期细胞比例增高,S期减少;Western-blotting检测药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带.结论:青蒿素可能通过线粒体细胞色素C途径诱导K562细胞凋亡.     

P^53基因在U937细胞生长和分化过程中的调节作用

The expression of p53 gene has been found to be regulated during the induction of differentiation of U937 leukemic cells into mature macrophages by recombinant human granulocyte- macrophage colony stimulating factors (rhGM-CSF) We showed here that the increased expression of p53 seemed to be necessary for the differentiation of U937 cells induced by rh-GM-CSF. The inhibition of p53 expression by a p53 antisense oligodeoxynucleotide lead to the significant decrease of formation of mature macrophages from U 937 cells in the presence of rhGM-CSF. By contrast, the p53 sense oligodeoxynucleotide had no any effect. Furthermore, we have analysed the growth of U937 cells in the presence or absence of rhGM-CSF. The results showed that rhGM-CSF dramatically inhibited the growth of U 937 cells in the cultures. At the same time, the antisense inhibition experiment demonstrated that the inhibition of p53 expression partially diminished the growth-inhibitory effect of rhGM-CSF on U 937 cells. These results suggested that the p53 was required for the initiation of rhGM-CSF-induced differentiation of U 937 cells on one hand, and the inhibition of cell growth on the other hand. Thus we deduce that the increased expression of p53 induced by rhGM-CSF may be a coupling event of switch of U 937 cells from growth into differentiation.     

镉诱导HEK293细胞凋亡及其线粒体凋亡途径

本课题研究了氯化镉(CdCl_2)诱导HEK293细胞(人胚胎肾细胞系)的凋亡,初步探讨了凋亡过程中Caspase-3、Bcl-2的变化和凋亡诱导因子(AIF)的转移以及它们的意义。MTT法检测CdCl_2对HEK293细胞增殖的抑制作用;通过倒置显微镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、激光共聚焦观察细胞凋亡;应用Western blot法和荧光免疫法测定Caspase-3酶原、Bcl-2蛋白的变化以及检测AIF蛋白在细胞中的定位。结果显示:CdCl_2对HEK293细胞具有显著的生长抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖性。在琼脂糖凝胶电泳中,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,其中30μmol/L作用6-9h梯状条带最为清晰,时间过长或浓度过高则梯状条带逐渐模糊,表明镉浓度过高或处理时间过长,细胞有坏死。流式细胞仪检测也印证了这一结果。形态学观察可见明显的细胞凋亡特征。同时线粒体膜电位明显下降,发现Caspase-3酶原蛋白、Bcl-2蛋白含量减少,并具有时间依赖性;另外检测到线粒体AIF向细胞核转移。而Bcl-2转染后有一定的抑制凋亡作用。实验结果提示,CdCl_2能够诱导HEK293细胞凋亡,线粒体损伤导致AIF转移与细胞色素c释放,从而引发的非Caspases与Caspases凋亡途径可能在镉引发的细胞凋亡过程中起重要作用,而Caspase-3, Bcl-2起着重要的调控作用。     

白血病耐药细胞系U937/ADR的建立及其生物学性状

目的：建立白血病耐药细胞系U937/ADR模型,并检测其多药耐药相关基因及其生物学性状的改变。方法：以大剂量阿霉素(IC50浓度),短时间(2h)暴露法诱导人白血病细胞系U937细胞的阿霉素耐药性。检测细胞的生长曲线,计算阿霉素耐药倍数,流式细胞术分析细胞周期分布;罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测MDR1、MRP1、NF-Κb、Bcl-2、Bax mRNA水平变化;Western blot 检测Akt、p-Akt、P65、P-gp、MRP1和Bcl-2蛋白水平变化。结果：成功构建耐阿霉素U937/ADR细胞系,对阿霉素耐药指数为亲代U937细胞的11倍,U937/ADR群体倍增时间为43.6h,高于亲代细胞8.9h;流式细胞分析显示与U937细胞相比,U937/ADR的G0/G1期细胞增多,而G2/M期细胞减少。并对多种化疗药物产生交叉耐药性。罗丹明123外排试验显示,U937/ADR细胞外排明显增加。U937/ADR细胞MDR1、NF-Κb、Bcl-2 mRNA表达水平明显增加,P-gp及p-Akt、P65表达水平增加。结论：成功构建的U937/ADR细胞系其生物学特性明显不同与亲代U937细胞,对多种化疗药物产生多药耐药,高表达多药耐药蛋白P-gp,同时激活p-Akt及NF-Kb。     

p~(53)基因在U 937细胞生长和分化过程中的调节作用

本文报道了p~(53)基因对人白血病细胞系U 937细胞生长和分化的调节作用。重组人GM-CSF(rhGM-CSF)可诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,这反映在分化后的细胞表达有巨噬细胞许多表型特征和功能活性。在这一分化过程中同时伴随着p~(53)基因的表达增加和U 937细胞生长受抑。进一步,用反义脱氧寡聚核苷酸抑制试验特异性地抑制p~(53)基因表达,结果发现p~(53)反义脱氧寡聚核苷酸可以明显抑制rhGM-CSF诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,同时也明显解除rhGM-CSF介导细胞分化过程中的细胞生长抑制作用。这些结果说明p~(53)基因在U 937细胞的生长和分化过程中可能起偶联调控作用。     

Apoptosis and DNA fragmentation precede TNF-induced cytolysis in U937 cells.

The hypothesis that activation of apoptosis and DNA fragmentation is involved in TNF-mediated cytolysis of U937 tumor cells was investigated. Morphological, biochemical, and kinetic criteria established that TNF activates apoptosis as opposed to necrosis. Within 2-3 h of exposure to TNF, U937 underwent the morphological alterations characteristic of apoptosis. This was accompanied by cleavage of DNA into multiples of nucleosome size fragments. Both of these events occurred 1-2 h prior to cell death as defined by trypan blue exclusion or 51Cr release. DNA fragmentation was not a non-specific result of cell death since U937 cells lysed under hypotonic conditions did not release DNA fragments. The percentage of cells undergoing apoptosis depended on the concentration of TNF and was augmented by the addition of cycloheximide. A TNF-resistant variant derived from U937 did not undergo apoptosis in response to TNF, even in the presence of cycloheximide. Furthermore, TNF could still activate NFkB in this variant, suggesting that this pathway is not involved in TNF-mediated cytotoxicity. Two agents known to inhibit TNF-mediated cytotoxicity, ZnSO4 and 3-aminobenzamide, were shown to inhibit TNF-induced apoptosis. Taken altogether, these data support the hypothesis that activation of apoptosis is at least one essential step in the TNF lytic pathway in the U937 model system.     

汉防己甲素对人单核细胞样细胞系U937的影响

本文报导中药汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ,Ｔｅｔ）对人单核细胞样细胞系Ｕ９３７的形态、细胞化学特性以及增殖分化的影响。经浓度为５×１０－３ｍｇ／ｍｌ的Ｔｅｔ作用５天后,Ｕ９３７细胞的形态、细胞化学特性接近于单核／巨噬细胞。３Ｈ－ＴｄＲ掺入证明Ｔｅｔ对Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ合成有抑制作用。银染核仁组织者区（Ａｇ－ＮＯＲ）显示细胞核内Ａｇ－ＮＯＲ计数亦明显下降。     

Malaria Antigens Stimulate Neopterin Secretion by PBMC and U937 Cells

Lysates of Plasmodium falciparum parasitized human erythrocytes stimulate U937 cells to secrete neopterin during a 48 hr co-culture period. Neopterin secretion by U937 cells was enhanced by the addition of human interferon gamma (IFN-γ). Several P. falciparum antigens, ‘FC27’ (a synthetic ‘S’ antigen), Ag16 (a recombinant ‘S’ antigen) and Ag44/RHOP3 (a recombinant merozoite rhoptry protein), also activated U937 cells to neopterin secretion and produced a similar effect on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 2 of 3 normal healthy donors cultured with the antigens for 7 days. Plasma from six Nigerian malaria patients contained high neopterin concentrations ranging from 5.06 to 14.17 ng/ml. This preliminary pilot study lends support for further investigation incorporating a larger number of malaria patients and further culture experiments with U937 cells and PBMC with the aim of defining the cause and source of the large quantities of plasma neopterin produced in this infection.     

卡介苗（BCG）感染对U937细胞系蛋白质乙酰化水平的影响

研究卡介苗(BCG)感染对U937细胞系蛋白质乙酰化水平的影响。构建U937巨噬细胞模型,感染BCG后提取细胞总蛋白,western blot方法检测细胞总蛋白乙酰化水平的改变。结果表明,在分化成熟的U937细胞系中,BCG感染能够上调蛋白质乙酰化水平,引起表观遗传学的改变。