抗体药物免疫原性评估的研究进展

抗体药物引发机体产生的非必要免疫反应,将影响药物的疗效和安全性。因此,有必要对处于不同研发阶段的抗体药物的免疫原性进行评估,包括上市后的监测。免疫原性评价是所有抗体药物研发过程中的关键环节,监管部门对抗体药物的免疫原性评估有严格要求,但是对于证据类型,数量和质量缺少统一标准,也缺少抗体药物免疫原性测定实验设计的指导文件或免疫原性比较的标准。新技术的出现促进了免疫原性评估的发展,免疫原性检出率也有了相应的提高,因此,只能进行“头对头”临床试验,才能对抗体药物的免疫原性进行评估。因此,研究机构,监管机构和临床医生都需要认识到免疫原性分析方法的变化。在这里,讨论了抗体药物免疫原性的相关因素,潜在的临床后果,评估免疫原性的监管指导变化,非临床和临床研究的免疫原性评估方法的发展,以及生物仿制药免疫原性评估需要特别注意的事项。     

具有分子伴侣功能的抗体

蛋白质的折叠问题一直是生物学研究的前沿之一，蛋白质稳态平衡的破坏与衰老及很多神经退行性疾病的发病机理密切相关，而蛋白质的正确折叠与蛋白质稳态在很大程度上取决于分子伴侣参与构建的复杂网络。许多研究表明，抗体可以作为分子伴侣促进蛋白质的正确折叠，并阻止蛋白质的异常聚集，抗体所具有的严格底物特异性使其具备了治疗特定蛋白质折叠病、帮助包涵体复性等应用潜力。本文简要介绍了分子伴侣的研究进展，详细阐述了具有分子伴侣功能的抗体及单链抗体的研究进展，最后重点讨论了可抑制蛋白质聚集的抗体的研究近况。     

6A型肺炎球菌结合物分子大小对小鼠免疫原性的影响

目的 比较不同分子大小的6A型肺炎球菌(serotype 6A Streptococcus Pneumoniae )结合物和佐剂吸附在小鼠体内免疫原性的影响。方法 通过乙酸水解降低6A型荚膜多糖的相对分子质量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化并与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物TT AH 结合,制备成结合物。用Sepharose 4 Fast Flow 纯化结合物,并根据化学检测结果将结合物分为 K D 0.0~0.2、 K D 0.2~0.4、 K D 0.4~0.6等3个组分,每个组分分别以磷酸铝佐剂吸附,将吸附前后的各个组分按照每针次每只小鼠0.2 μg分别免疫小鼠,并采用ELISA检测结合物在小鼠体内的抗体水平。结果 3种不同相对分子质量吸附前后的结合物在小鼠体内均能产生较高水平的抗体,各组2、3针之间具有明显的加强效应。在吸附组和未吸附组中,3种不同分子大小的结合物在小鼠体内产生抗体水平无明显差异。各组分佐剂吸附后的结合物血清抗体滴度高于未吸附组,但这种差异无统计学意义( P > 0.05)。结论 结合物的分子大小对小鼠体内抗体水平的产生没有明显影响;磷酸铝佐剂吸附对于不同分子大小的结合物在小鼠体内的免疫原性有一定的增强效应,但这种增强效应差异无统计学意义。     

高价值的医药分子农业

植物转基因技术使传统农业逐渐向分子农业转型。农业的作用由原来的简单的提供衣、食、住扩展到为医药业、工业提供优质、低廉的原料或产品。医药分子农业作为分子农业的重要组成部分,已改变了传统农业的生产结构,并因其自身具有较高的经济价值而将给农业带来巨大的经济效益。     

抗风湿药的开发好成果不断下一代抗体引人关注

阻断肿瘤坏死因子（TNF）的生物学制剂的出现,大大改变了对以风湿性关节炎为首的自免疫疾病的治疗。而且,各个厂家在面向已有药物的市场扩张而展开研发竞争的同时还在加紧进行新药的开发。2005年11月12日～17日在美国加利福尼亚州召开的美国风湿学会总会及学术会议上,公布了生物学制剂与低分子化合物的最新治疗试验成绩和开发状况。其中,引人关注的就是以TNFα为标的的下一代抗体。     

用技术攻破抗体医药的“成本壁垒”

随着抗体医药市场的不断扩大．抗体医药的高成本问题逐渐被人们所关注。实现抗体医药低成本化的方法有许多种．如改进生产体系、延长药物在血液中的半衰期、提高抗体活性、”激动剂”抗体的探索…… 如果低成本化的目标得以实现．抗体医药将步入新的成长阶段。[编者按]     

高抗体水平种鸡NDV的分离鉴定和分子特性

从抗体水平较高、产蛋下降的种鸡群分离到一株新城疫病毒(Newcastle Disease virus,NDV)SGM01,经动物回归可产生NDV典型病变,其MDT、ICPI和IVPI等分别为50．5h、1．76和2．41,表明为强毒。对其F和HN基因进行克隆测序,F基因氨基酸多肽裂解位点的基序为~(111)GRRQKRF~(117),与强毒基序一致。基因分型表明SGMO1属Ⅶ型。氨基酸同源比较显示:SGM01与LaSota、SQZ04等基因Ⅱ型的同源性为:87．7%～88．3%;(?) Taiwan95、Yunnan03等基因Ⅶ型的同源性为:95．7%～98．2%;与F_(48)E_9等基因Ⅸ型的同源率为:90．8%～91．7%。HN基因与F基因不同,具有明显的时空性。SGM01、Taiwan95、SQZ04等新近分离毒氨基酸高度同源,同源性为:95．3%～97．2%,显著高于与LaSota(经典弱毒疫苗株)和F_(48)E_9(经典强毒株)的同源性87．4%～89．0%。     

抗体偶联药物的研究进展与质量控制

抗体偶联药物（antibody-drug conjugates,ADC）因其良好的靶向性及抗癌活性目前已成为抗肿瘤抗体药物研发的新热点和重要趋势,受到越来越多的关注。ADC药物由单克隆抗体、高效应的细胞毒性物质以及连接臂三部分组成,它将抗体的靶向性与细胞毒性药物的抗肿瘤作用相结合,可以降低细胞毒性抗肿瘤药物的不良反应,提高肿瘤治疗的选择性,还能更好地应对靶向单抗的耐药性问题。与传统单抗药物相比,因其结构复杂,ADC药物质量属性分析方法的建立具有更大的难度和特殊性。对抗体偶联药物的研发现状、质量属性分析方法和挑战以及质量控制要点进行了简要介绍,为ADC药物的研究和质量控制提供参考。     

走向实用化的低分子化抗体药物——最大优势是成本低而且有利于获得激动剂活性

通过基因重组技术，利用小鼠免疫球蛋白（IgG）的片段代替人体免疫球蛋白的嵌合抗体开创了抗体药物走向实用化的进程。为降低对人体的抗原性，抗体药物不断发展，出现了以与抗原结合的最低限度必要部分以外的部分来代替人体IgG的人源化抗体，以及利用产生人体IgG的转基因动物制成的完全人源抗体等。     

基于TAP分子亲和力模型预测MHCⅠ类分子提呈短肽的免疫原性

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子亲和力模型有助于筛选出候选短肽,为实验确定可以与MHCⅠ类分子形成复合物从而激活细胞毒性T细胞的短肽提供帮助;抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)分子亲和力模型也可用于筛选候选短肽;如何更好利用两类亲和力模型筛选出候选短肽、这两类亲和力模型对短肽选择性的异同以及这种选择性异同的生物学机制尚不清楚.本文重新整理了TAP亲和力测试集,使训练样本达到699个;使用核函数平衡矩阵算法建立的TAP亲和力模型预测精度高于同类算法,5折交叉检验Pearson相关系数0.89;结合HLA A3分子亲和力模型、TAP亲和力模型显著提高免疫原性短肽预测精度,AUC值从～0.82上升到0.87.提高的原因是两个亲和力模型对第2、9位置"最佳"氨基酸不同偏好性和这种不同偏好的互补性造成的.TAP分子与短肽模拟对接结果反映了这个结论.TAP亲和力可在线预测(http://www.bilologymaths.top/mbtwo...     

抗体医药的现状和未来

2008年10月1日,日本协和发酵麒麟公司举行了公司创立纪念活动。10月3日,由日经BP公司和日本生物技术杂志社主办的日本生物技术专业研讨会“抗体医药的现状和术来”在东京大厅举行。此次大会的内容非常丰富,钉米自抗体医药最前沿的报告,有美闰Amgen公司和Hematech公司关于该行业世界总体情况的陈述,还有大会协办单位日本协和发酵麒麟公司的最新抗体医药开发技术介绍。其中,对抗体医药开发有促进作用的高活性抗体技术和抗体靶点确认技术引起了人们的极大关注。     

针对CD33分子的抗体偶联药物的研究进展

单克隆抗体因具有分子量小、毒副作用低、靶向性好等优点,近年来已成为肿瘤治疗用药的主要方式。CD33分子是免疫球蛋白超家族成员,同时也是唾液酸依赖的免疫球蛋白样凝集素家族的成员,在免疫调节过程中具有重要作用。CD33分子特异表达于白血病细胞表面而在造血干细胞中不表达,因而成为白血病免疫治疗的理想靶点。以CD33为靶点的抗体药物主要有CMA676、HUMl95、AVE9633、WM537LHIM3-4等,目前大多处于临床试验阶段。该实验室也在进行抗CD33全人源抗体的研究,利用噬菌体展示技术筛选与CD33胞外区特异性结合的单链抗体,并构建免疫毒素和抗体偶联药物以研究其体内外抗肿瘤作用。该文针对CD33分子及其抗体偶联药物的现状及趋势作一综述。     

抗体生产纯化技术进展

自1997年FDA批准第一个治疗淋巴癌的嵌合单抗药物Rituxan,Anti-CD-20抗体上市,并进入56个国家,至2007年,FDA已批准了20多种治疗性单抗药物,约一半用于治疗癌症（详见附录1）,多个已成为年销售额超十亿美元的“炸弹药物”（Blockbuster Drug,图1）。全球抗体药物的市场增长十分迅猛,有约200多种单抗在临床实验,占整个临床生物技术药品总数的三分之一多,     

抗体药物bevacizumab和受体酪氨酸激酶抑制剂陆续问世

新的抗体药物和受体激酶抑制剂相继问世，新药开发领域百花齐放。 除代谢拮抗药和疫苗之外，作用于新靶点的化合物相继上市。 具血管新生抑制作用的抗体药物bevacizumab市场销售势头强劲。     

鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片段的人源化分子设计

产生免疫原性的残基主要是位于蛋白表面的暴露残基,为了消除鼠抗体对人的免疫原性,利用表面再塑的方法对本室克隆的鼠抗人纤维蛋白抗体单链Ｆｖ片段进行了人源化分子设计．首先确定了鼠及人Ｆｖ片段的表面残基,在此基础上分析了鼠与人抗体Ｆｖ片段表面残基的差异,将存在差异的鼠抗体的表面残基换成人的,从而实现鼠抗体的人源化．提出了残基最高频率人源化及最相似链人源化两种分子设计方案．人源化的鼠抗人纤维蛋白抗体单链Ｆｖ片段的结构经Ｐｒｏｆｉｌｅｓ－３Ｄ检测证明合理,替换的表面残基的溶剂可及性未变,而且未对ＣＤＲｓ的空间构象产生明显影响,应不会影响与纤维蛋白的亲和力,为鼠抗体人源化实验研究奠定了基础．     

人源抗ICAM-1单链抗体的制备及其生物学活性鉴定

利用噬菌体展示技术筛选特异性人源抗ICAM-1单链抗体（Anti-human ICAM-1 scFv）并进行生物学活性鉴定。应用Tomlinson I+J噬菌体抗体库,以P1抗原肽为包被抗原,经过4轮“吸附-洗脱-扩增”进行亲和富集筛选。以PCR反应、ELISA抗原交叉反应和Dot blotting实验进行阳性克隆的鉴定。scFv经原核表达和分离纯化后,以Western blotting实验、竞争ELISA实验和细胞黏附抑制实验对其生物学活性进行初步鉴定。Tomlinson I+J噬菌体抗体库经4轮亲和富集筛选,利用ELISA方法成功筛出4株阳性克隆。通过PCR鉴定反应、ELISA抗原交叉反应和Dot blotting实验,最终获得了1株既能与P1抗原肽特异结合又能与人ICAM-1抗原特异结合的阳性克隆J-A1。对scFv进行原核表达和亲和层析后获得了高纯度的目的蛋白。竞争ELISA实验和细胞黏附抑制实验证实纯化的scFv具有良好的亲和活性和抗细胞黏附活性。文中成功利用噬菌体展示技术筛选到特异性人源抗ICAM-1 scFv,为进一步探索该抗体在炎症相关性疾病治疗中的应用奠定了基础。     

西方蜜蜂AmAGO1蛋白的分子特性、时空表达谱及抗体制备

【目的】Argonaute (AGO)家族是一类在进化上高度保守的蛋白家族,其在真核生物中主要参与形成RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex, RISC),进而通过沉默基因表达参与诸多生物学过程。蜜蜂AGO蛋白的相关研究迄今仍然缺失。本研究拟通过预测西方蜜蜂Apis mellifera的AGO1(AmAGO1)理化性质和分子特性,解析AmAGO1在西方蜜蜂中的时空表达谱,并制备AmAGO1的多克隆抗体,为深入开展AmAGO1的功能与机制研究提供参考和基础。【方法】PCR扩增西方蜜蜂AmAGO1的编码序列(coding sequence, CDS);通过生物信息学预测AmAGO1蛋白的理化性质和分子特性;利用RT-qPCR检测AmAGO1在西方蜜蜂工蜂卵、3日龄幼虫、7日龄预蛹、8日龄预蛹、12日龄蛹以及1, 2, 6, 12, 15和18日龄成虫以及工蜂成虫触角、咽下腺、脑、表皮、中肠、脂肪体和毒腺中的表达量;构建原核表达质粒后诱导表达AmAGO1融合蛋白,并鉴定其表达形式;制备AmAGO1多克隆抗体,利用ELISA, Western blot...     

使用电子断层技术对IgG1抗体逐个分子的三维重构与结构分析

抗体(antibody)又称免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig),是人体免疫反应的重要参与者.了解抗体的结构和结构动态特征,是理解人体免疫作用机理、修复或提高免疫能力、定向设计抗体以治疗各种疾病的基础.本文以人体IgG1抗体为对象,综述了使用透射电子显微学方法研究IgG1抗体结构方向的最新进展.详细介绍了使用逐个分子的电子断层三维重构技术(individual-particle electron tomography,IPET)对抗体进行结构研究的方法,包括样品制备、图像处理和数据分析等.并描述了利用该技术,在研究抗体结合肽分子后的结构形变和通过收集不同构象来研究抗体动态结构特征方面所取得的阶段性成果.最后,对尚待解决的关键问题与该技术未来的发展方向进行了讨论与展望.     

分子靶向新药种类繁多多靶标型的药物也开始上市

在日本，女性癌症患者中人数最多的是乳腺癌患者。预计今后的市场规模还将进一步扩大，许多候选新药正在开发中。其中近几年增长较快的是抗体医药及低分子化合物的分子靶向药物。尤其是最近以多个靶位为目标的多靶标型药物开始增多。     

CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化抗体的纯化及质量控制分析

目的:建立CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化单抗纯化工艺和质量控制方法。方法:收获50 L生物反应器中无血清悬浮培养的CHO工程细胞培养液,通过高速离心去除细胞及碎片后超滤浓缩上清液,经亲和层析、SPFF阳离子交换层析后,将所得目的蛋白质经G25凝胶柱更换缓冲液以完成纯化;对纯化的产品进行单抗鉴别(Western印迹)、相对分子质量(SDS-PAGE和MOLDI-TOF)、纯度(SEC-HPLC)、生物学活性(毒素中和试验)、产品相关杂质(SEC-HPLC检测聚集体、降解产物)、工艺相关杂质(ELISA分析残余宿主蛋白、残余蛋白A)、安全性(凝胶法检测内毒素、薄膜过滤法考察无菌)分析。结果:样品回收率达61.7%;单抗鉴别实验阳性;MOLDI-TOF测定完整分子的相对分子质量为147 995,与预期相符;单体比例为99.25%,二聚体比例为0.75%;EC50值为0.1516μg/m L。残余宿主蛋白、残余蛋白A、内毒素、无菌检查结果符合药典要求。结论:初步建立了纯化工艺和质量控制方法,为抗炭疽人源化单抗药物的研制奠定了基础。