朱砂根愈伤组织培养及悬浮细胞系建立

以朱砂根(Ardisia crenata Sims.)无菌苗的茎段、叶片、胚轴和胚根为外植体进行愈伤组织诱导研究。结果表明:胚根在含有2,4-D的培养基中的诱导率最高,在添加5 mg L-1 AgNO3的MS+2,4-D 0.5 mg L-1+KT 0.01 mg L-1培养基中继代培养的增殖系数高达8倍以上。培养中获得了5种类型的愈伤组织(I-白色湿软状、Ⅱ-白色冰砂状、Ⅲ-淡黄色颗粒状、Ⅳ-黄绿色块状和V-绿色块状),其中Ⅱ和Ⅲ型愈伤组织可以成功建立悬浮细胞系,用M S+2,4-D 0.5 mg L-1+KT 0.01 mg L-1培养基进行固-液轮回培养,可以较好地保持悬浮细胞系。     

亚麻胚性细胞悬浮培养体系的建立和影响因素

亚麻品种‘双亚五号’的胚性愈伤组织诱导最佳培养基为MB（MS无机盐加B5维生素）＋1.0mg·L^-12,4-D;细胞初始悬浮培养的最佳培养基为MB＋0.2mg·L-16-BA;细胞继代悬浮培养的最佳培养基为改良的MB（NH4NO3减半,KNO3加倍）＋0.02mg·L^-12,4-D＋0.2mg·L^-16-BA;适宜的蔗糖量为50g·L^-1;适宜的继代接种量为1.0～1.5g·（25mL）^-1;继代间隔为5～7d。     

药用植物人参愈伤组织的诱导培养与悬浮细胞体系建立

人参(Panax ginseng C.A Meyer)是五加科人参属植物,其主要药效活性成分为人参皂苷,具有广泛的药理作用。为建立人参愈伤组织诱导培养体系,以探索实现工程化细胞大规模生产人参皂苷的有效途径。本研究以人参根切片作为外植体,成功诱导出质地松疏、生长迅速、易于分散、启动较早的淡黄色透明状的愈伤组织,建立了适合于长期继代培养的人参细胞系,为深入开展人参干细胞分化及人参皂苷生物合成分子调控研究提供了理想的模型与基础。     

适合于悬浮培养的枇杷愈伤组织诱导及状态调控

以枇杷不同品种和不同器官为外植体,通过对愈伤组织诱导率、诱导状态、熊果酸（UA）和齐墩果酸（OA）含量的综合考虑,筛选适合于悬浮培养的枇杷愈伤组织,并通过调整2,4-D、6-BA浓度,同时加入酸水解酪蛋白（CH）、谷氨酰胺（Gln）、KCl等物质对花丝愈伤组织状态进行调控。结果表明：枇杷‘早钟6号’幼胚诱导的愈伤组织最适用于枇杷悬浮培养,愈伤诱导率为83.70%,愈伤组织嫩黄、疏松、颗粒明显,UA、OA含量分别为6.90、2.34 mg/g dw。在MS中附加2,4-D 6.0 mg/L、6-BA 0.8 mg/L、CH 200 mg/L、KCl 500 mg/L,花丝诱导的坚硬愈伤出现细软、嫩黄的愈伤组织,但多次继代后水渍化,状态不佳。     

茅苍术愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养研究

采用正交试验法研究了不同的植物生长调节剂对茅苍术叶柄、叶片和根茎愈伤组织诱导的影响,结果表明,不同外植体在各自的最佳培养条件下,叶柄、叶片和根茎愈伤组织的诱导率分别为99.0%、83.5%和71.5%,以叶柄的培养效果最好,其中2,4-D对茅苍术愈伤组织的诱导具有极显著的效果,在各种植物生长调节剂组合中,诱导叶柄愈伤组织形成的最佳组合为0.4mg·L-1NAA、4.0mg·L-12,4-D和0.4mg·L-1KT,培养20d左右,诱导率达到99.0%。此外,将茅苍术叶柄细胞悬浮培养至18d时,细胞量、多糖和苍术素的含量均达到最大值,分别为9.07g·L-1、15.68mg·L-1和19.62ug·L-1。     

裸燕麦胚性愈伤组织培养及悬浮系的建立

裸燕麦成熟胚在IN_６培养基上诱导培养,初始愈伤组织为白色、瘤状、外软内硬、易分化植株的非松脆类型。当在IM_１～IM₄培养基上进行循环式调控培养,经7～8个月,初始愈伤组织转变为浅黄色、小颗粒状、生活力强的松脆型胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织置于液体培养基中悬浮培养,得到分散性好、生长快的悬浮细胞系。悬浮系经分化培养获得了再生植株,移栽成活率达95%以上。     

不同小麦品种愈伤组织诱导和再生体系建立

为了筛选适合组织培养的小麦基因型,建立一套有效的小麦诱导再生体系,以24个小麦品种的幼胚为研究材料,选用4种诱导培养基和3种分化培养基,研究了影响小麦组织培养的各种因素。结果表明：①培养基之间存在显著差异,MM2培养基的诱导效果最好,平均诱导率为98．5％,M5B培养基的分化效果最佳,平均分化率为39．8％。②不同品种在诱导愈伤和分化再生上都有显著的基因型差异。③愈伤组织诱导率和分化率之间无显著相关性。     

濒危植物珙桐愈伤组织的诱导及悬浮细胞培养初探

以珙桐（Davidia involucrate）无菌苗的下胚轴为外植体,以LSD分析和正交设计与分析为主要研究方法。诱导和筛选愈伤组织,进行悬浮培养,初步建立了珙桐悬浮培养体系,并对珙桐悬浮培养中生物量和pH值的变化进行了初步研究。结果表明：KT和2,4-D的组合诱导出的愈伤组织更适合进行细胞悬浮培养,最佳愈伤组织诱导培养基为WPM＋KT 1.0 mg/L＋2,4-D 0.5 mg/L＋Vc 1.0 mg/L;悬浮细胞培养中,接种量和Ca2＋浓度是影响生物量的主要因素,最佳接种量为25 g/L,最佳Ca2＋浓度为标准WPM培养基中Ca2＋浓度的2倍;黑暗条件下,珙桐悬浮培养生物量变化曲线呈＂S＂型,在21 d时可获得最大生物量;pH值的变化与生物量的变化有一定的相关性。     

青扦胚性愈伤组织悬浮培养动力学及体细胞胚胎发生

在含１ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ,１ｍｌ／Ｌ,ＫＴ,３０ｇ／Ｌ蔗糖的５９液体培养基上建立了生长旺盛的瑶扦胚性愈伤组织悬浮系,并对胚性愈伤组织悬浮系生长,体细胞胚胎发生,底物消耗,ｐＨ值,电导率的动力学过程及各参数的相关性进行了研究。     

北京地区油松胚珠发育时期的确定

采用显微观察法对北京地区不同发育时期的油松胚珠进行解剖结构观察,以确定北京地区油松胚珠的发育时期。结果表明,北京地区油松胚珠的发育历时13个月(从2003年4月~2004年5月),具体时期为:2003年4月12日为胚珠分化期,4月21日左右为大孢子母细胞时期,5月至8月为游离核时期,2003年8月至2004年2月为胚珠休眠期,2004年4月15日左右进入雌配子体细胞化时期,4月21日左右为颈卵器原始细胞活动期,5月8日左右为中央细胞分裂期,5月14日左右为成熟颈卵器时期。本研究结果中油松胚珠经历的发育阶段与前人的研究基本一致,但在时间上存在差异,而且北京地区比辽宁兴城地区油松胚珠发育时期平均提前了大约20~30 d。     

油松胚珠发育研究中的蛋白质组技术

油松是中国特有的树种,具有重要的造林和绿化价值。但是油松胚珠败育是油松种子生产和繁殖面临的一个严重的问题,因此研究油松胚珠的发育机理和败育原因具有重要的理论和实践意义。双向电泳和质谱技术结合研究基因表达的蛋白质组技术正越来越广泛地应用到植物研究中,我们将该技术应用到油松胚珠发育的研究中,比较了两种蛋白质提取的方法,发现蔗糖提取方法比传统的TCA方法更适合于油松蛋白质的制备。将电泳分离得到的蛋白点用肽质量指纹图谱的方法进行鉴定,得到了满意的结果,优化了蛋白质质谱鉴定的条件。     

油松茎次生木质部中树脂道的发育过程和组织化学研究

利用组织化学方法对油松茎次生木质部树脂道发育过程中上皮细胞内树脂滴和淀粉粒的动态变化进行了研究。发现在树脂道原始细胞阶段,每个原始细胞含淀粉粒较少,含树脂滴稀少。在树脂道形成阶段,淀粉粒数目较多,体积增大,树脂滴也呈递增趋势。在树脂道成熟阶段,淀粉粒数目变化不大,而体积明显变小,树脂滴的体积增大,数目减少。     

油松针叶萜类组分相对含量的地理变异

在油松（ＰｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｍｉｓＣａｒｒ．）主要天然分布区晋、冀、陕、甘４省、选择１２个种源３６个林分（每个林分８株成年油松样木）,利用气相色谱和气质联用技术,测定了油松针叶萜类相对含量,并分析了所含萜类总数在不同种源间、种源同偿同林分间的差异。     

油松雌性不育系球果蛋白质双向电泳技术的建立

本文建立了油松雌性不育系雌球果蛋白质组研究中的双向电泳技术.第一向采用固定pH值梯度(IPG)胶条在IPGphorTM等电聚焦仪上进行等电聚焦,第二向在恒功率且恒温条件下于Ettan-DALTTMⅡ高通量电泳仪上进行SDS-PAGE电泳,以银染和考马斯亮蓝两种方法染色.通过对全蛋白的提取、胶条pH值和胶条肿胀等技术环节的优化和比较,得到了重复性很高,分离效果良好的蛋白质双向图谱.     

油松针叶萜烯组分相对含量的季节变化

利用气相色谱和气－质联用分析技术,对陕西省宁陕县旬阳坝林场８株成年油松的针叶挥发性萜烯化合物相对百分含量的季节变化行了测定。结果表明,１８种主要化合物的相对含量中有１１种存在着显著或极显著的季节性差异,这种差异主要发生在夏季和冬季之间。     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

兰州油松松皮挥发性成分分析

采用水蒸气蒸馏法对兰州产油松松皮的挥发性成分进行提取,采用GC／MS方法分离、鉴定了其中42个化学成分。     

黄土高原子午岭油松林的种子雨和土壤种子库动态

对黄土高原区子午岭不同林龄(18a、29a、40a、54a)油松(Pinus tabulaeformis carr.)人工林及天然林(约75a)的种子雨和土壤种子库进行了研究.结果表明,该区油松种子雨一般从每年9月初开始,一直到11月底结束,种子雨降落历程与林龄大小有关,种子雨发生时间和降落高峰期有所不同.不同林龄的油松种子雨强度不同,种子雨总量大小顺序为:40a人工林((489 9±8.64)粒· m-2)＞29a人工林((346.8±7.45)粒· m-2)＞54a人工林((327.1±8.13)粒· m-2)＞天然林((146.9±5.25)粒· m-2)＞18a人工林((78.1±2.72)粒· m-2).种子雨总量随林龄的增加而增加,约40a时达到高峰,种子雨活力也以40a时最高.不同林龄油松林土壤种子库存在显著差异,其中18a人工林种子库最小,40a人工林种子库最大.从种子雨降落到次年4月,5种林分土壤种子库总量下降了42.34%～53.59%,空粒种子增加了26.72%～48.69%;从4月到8月份种子腐烂率由10.28%～13 62%增加到57.25%～63.28%.动物的搬运、取食和种子腐烂死亡是种子库损耗的主要因素.土壤种子库中的油松种子主要集中在枯枝落叶层,其次为0～2cm层,2～10cm层种子最少.到8月中旬,土壤中98.26%的油松种子都已丧失活性.不同林分下油松幼苗的密度差异较大,40a人工林下幼苗最多,其余依次为29a人工林、54a人工林和天然林,18a人工林下的实生苗极少,幼苗死亡率极高.在一定龄级范围内,人工林结实能力和更新潜力随林龄增加而增加,40a时更新潜力最大.虽然有大量种子下落,但由于种子大量损耗和幼苗死亡,通过环境筛作用而最终可以成熟的个体数量十分有限.