人白细胞介素-2功能性受体在小鼠细胞可重建

白细胞介素-2(IL-2)与其受体相互作用,可促进已活化的T 细胞生长,但只当IL-2与高亲和性受体结合才能释放与生长相关的传导信号。作者从正常人用合成的寡聚核苷酸探针筛选出编码IL-2受体特异的基因克隆。筛选出的数个阳性克隆中,P~(IL-2R)-6克隆经分析发现能编码成人T 细胞白血病细胞表达的IL-2受体的全部序列。作者为了使IL-2受体cDNA 在哺乳细胞中稳定表达,构建了一个P~(SVIL-2R)-3质粒,并     

质粒研究与载体构建

921209噬菌体T7第10基因翻译增强子(TREN)的化学-酶促合成及其构件的功能〔俄〕/Gureyich,A.1.…1 Bioorg.khim一1991,17(5)一e47~652〔译自DBA,1991,10(18),91一10247〕 为了这种分析,通过化学一酶促合成法制备了TREN完整序列及其近端和远端序列。用Bam Hl和E。。Rl二种限制酶将合成序列克隆到多拷贝质粒pFPC10中。获得的新质粒用千检测TREN近端区增强翻译的能力。编码人白细胞介素一3的人工基因(克隆于pFPC10中,不含TREN的一部分)在大肠杆菌中的表达很低。引入完整的TREN序列,使人白细胞介素一3的产量大大升高。取代pTE3 …     

淋巴因子和干扰素

861694 微生物表达白细胞介素Ⅱ[专,英]/Souza,L.M.…∥European Patent Ap-pl.EP 0136489.Pub.10.04.85.Appl.US521967,filed 10.08.83[译自CBA,1985,(6),2005]此专利述及DNA序列的制造,这些序列含有一些结构基因,它们编码具有白细胞介     

抗生素和干扰素

960987 四环素氯化基因的克隆和核苷酸序列[英]/Dairi,T.…//Biosci. Biotechnol.Biochem.-1995,59(6).-1099～1106[译自DBA,1995,14(17),95-10056] 分离出2个含有特殊类型自身防御基因的粘粒克隆,该基因来自产6-脱甲基金霉素的金霉素链霉菌NRRL 3203。将冷冻的原菌丝体接种到4ml的     

人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的研究进展

人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8是近年来阐明的一种新的细胞因子,本文按照该因子的研究历史综述了有关它的氨基酸 序列测定、cDNA克隆、基因合成与表达及生物学功能等方面的研究概况,并介绍了其基因组序列、细胞受体及构象方面的最新进展。     

其它药物

920166大型动物细饱分裂素的分子生物学〔英〕/M alisz。“,ski,C.…/Ady.Vet.Sei.Comp.Med一1990,35一181~213〔译自DBA,1991,20(9),91一04983〕 内容如下:选择的细胞分裂素的生物学特性,用细胞分裂素调节血细胞生成和免疫应答,以及牛和猪的重组细胞分裂素,包括(i)牛重组白细胞介素一1,(ii)牛重组白细胞介素一2,(i 11)牛重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子,(iv)牛重组干扰素甲,(v)猪重组白细胞介素一1和(vi)它们的结构特征及其基因。可利用交又杂交技术克隆编码这些细胞分裂素的cDNA,并在酵母或细菌中得以表达。在基础水平上,大量重组…     

人白细胞介素17基因的分离及其在酵母中的表达

1995年,美国Immunex公司的姚政兵等人从激活的人T淋巴细胞中鉴定了一种新型的白细胞介素,即人白细胞介素17(human inter-leukm-17,hIL-17)。与此同时,法国的Fossiez等也从人类基因组中分离出相应的基因,二者的核苷酸序列完全相同。hIL-17主要由活化的记忆性CD4~ T细胞产生,通过表达于许多细胞上的受体发挥作用,它能活化转录因子NF-κβ并诱导成纤维细胞中IL-6、IL-8和胞间粘连     

融合蛋白pIL6-IL2在E.coli中的表达及活性鉴定

白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL-2 )与白细胞介素 6(interleukin 6,IL-6)能分别刺激T淋巴细胞增殖与B淋巴细胞分泌免疫球蛋白 ,从而促进动物机体的细胞免疫与体液免疫 ;另外IL2与IL6在发挥生物学活性时还有相互协同作用。因此 ,将去除信号肽的猪白细胞介素 6(pIL-6)与猪白细胞介素 2 (pIL-2 )cDNAs序列通过一段Linker相连 ,克隆到E .coli表达载体pPET-2 8a中。该融合蛋白IL6-IL2在E .coli表达菌BL2 1 (DE3)中获得成功表达 ,SDS-PAGE分析分子量约为40kDa ,表达量达到总菌体的 66.26%。用IL6依赖的B9细胞与IL2依赖的CTLL细胞增殖试验进行融合蛋白IL6 IL2的生物活性检测 ,其活性可分别达到 0.8× 10³U /mg和 6.4× 10³ U/mg。     

克隆的小鼠白细胞介素-7对B细胞前体有刺激作用

目前对淋巴细胞发育了解较少,本文作者借助长效培养系统检定到一种能刺激淋巴细胞前体增殖的新生长因子,并获得编码该因子的cDNA克隆。这种新的造血细胞生长因子被命名为白细胞介素-7(IL-7)。以从小鼠骨髓衍生的细胞系IXN/A6制备cDNA文库,经过筛选表达于COS-7细胞中的cDNA文库的约720000重组体,最后得到一编码IL-7的cDNA克隆(即克隆104(?)),并测定了克隆1046的核苷酸顺序。该克隆(插入基因)有1607碱基对(bp)长,仅含一个462bp的开放阅读框架(ORF)。在ORF之前存     

突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列 .编码 18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列 ;编码 19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列 .突变型人白细胞介素 2 (MvIL 2 )基因与表达载体pPIC9K重组 ,酶切线性化后用Invitrogen转化毕赤酵母试剂盒导入酵母细胞进行整合 ,经筛选得到一高表达白介素 2的克隆 .SDS PAGE显示 ,表达量约占总量的4 5 7% .经Western印迹验证 ,重组人白介素 2有免疫活性 ;与野生型IL 2相比 ,所获得的突变型IL 2纯品的比活性为 4 0× 10 7IU mg蛋白 ,比天然型IL 2高 4～ 5倍     

拟南芥AST基因的精细作图

拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)ast(anthocyanin spottedtesta)突变体是由碳离子辐射诱导产生的与花青苷生物合成有关的基因突变体,受单隐性核基因控制.根据拟南芥数据库中的SNPs(single nucleotide polv-mophisms)序列和插入/缺失多态性(insertion/deletion polymorphisms)序列,设计了一系列分子标记.采用图位克隆策略,应用这些分子标记完成了对拟南芥AST基因的精细作图,成功地将AST基因定位到BAC克隆T13M11上,初步认为该BAC克隆中的基因T13M11.8可能是AST基因.该基因的DNA序列长1432bp,含有6个外显子和5个内含子,编码的蛋白与花青苷生物合成途径中的二氢黄酮醇-4-还原酶有较高的同源性.将进一步通过功能互补实验验证图位克隆的结果.     

噬菌体显示法克隆RNA结合蛋白cDNA——表达文库的构建

试图用噬菌体显示法(phage display)克隆编码与人白细胞介素6核转录因子的3′非翻译区(NF-IL6 3′UTR)特异结合的蛋白的cDNA.构建了回复系RR细胞的cDNA的噬粒(phagemid)表达文库,并设法除去了cDNA的大部分终止密码子.鉴定表明,该文库中含有各种大小的cDNA插入片段,并能够表达外源cDNA,为用噬菌体显示法克隆RNA结合蛋白基因或cDNA做好了准备.     

猪白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测

通过RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18(pIL-18)成熟蛋白基因的cDNA, 克隆到pGEM-T载体, 构建重组质粒pGEM-T-IL18, 转化E.coli JM109感受态细胞, 取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定。测序结果表明, pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp, 编码157个氨基酸。将其克隆到表达载体pGEX6P-1中, 构建重组质粒pGEX-IL18, 转化E.coli BL21感受态细胞, 用IPTG诱导表达。重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为45 kD的重组蛋白, 占菌体总蛋白的28%左右, 以包涵体形式存在。对包涵体进行洗涤, 用MTT法测定表明, 重组蛋白能明显刺激猪脾脏T淋巴细胞增殖反应的活性。     

白细胞介素2亲和性配体的筛选

白细胞介素2(IL-2)及其受体拮抗剂的研究对免疫抑制药物的研制具有重要作用.抗白细胞介素2受体α链中和性单克隆抗体5G1(抗Tac型抗体)能够特异性地阻断IL-2与其受体的结合.因此,5G1可作为目标分子被用来在噬菌体展示肽库中筛选白细胞介素2的亲和性配体.经过4轮亲和性筛选以及5G1亲和活性的测定,6个具有明显5G1亲和活性的噬菌体克隆被发现.DNA序列分析结果显示出,所得到的肽序列具有明显的保守性,即SSFT(L/P)I.该序列与IL-2受体α链没有同源性.因此,SSFT(L/P)I可能模拟了IL-2受体α链上的一个不连续表位(mimotope),为白细胞介素2亲和性配体片段.     

猪白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测

通过RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18(pIL-18)成熟蛋白基因的cDNA, 克隆到pGEM-T载体, 构建重组质粒pGEM-T-IL18, 转化E.coli JM109感受态细胞, 取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定。测序结果表明, pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp, 编码157个氨基酸。将其克隆到表达载体pGEX6P-1中, 构建重组质粒pGEX-IL18, 转化E.coli BL21感受态细胞, 用IPTG诱导表达。重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为45 kD的重组蛋白, 占菌体总蛋白的28%左右, 以包涵体形式存在。对包涵体进行洗涤, 用MTT法测定表明, 重组蛋白能明显刺激猪脾脏T淋巴细胞增殖反应的活性。     

植物遗传工程

940312稳定转化的植物细胞中骨架连接区增强报道基因表达〔英〕/Allen,G.C.…/Plant Cell一1993,5(6)一603~613〔译自DBA,1993,12(17),93一09903〕 酿酒酵母自主复制片段ARS一1含有一个能离体与植物核骨架结合的骨架连接区(S AR)。为了试验对基因表达的效应,将一个位于该片段侧翼的、在CaMV 355启动子调控下的,GUS基因的构建物通过微轰击转送到烟草NT一1悬浮细胞中。在稳定转化的细胞系中,含两个侧翼SAR构建物的GUS活性比缺少SAR的对照平均高12倍。表达水平不与基因拷贝数成比例。而在某些含多基因拷贝的转化体中,该片段似乎是…     

T7启动子在哺乳类动物细胞中启动外源基因表达的研究

人低密度脂蛋白（LDL）受体基因cDNA和氯霉素已酞转移酶基因（CAT）及PolyA信号序列被克隆进pGEM4载体的T7噬茵体启动子下游,构建成质粒pT7LDLR和pT7CAT．两个重组质粒转化CHO细胞．PCR和CAT酶实验显示：两个基因被T7噬菌体启动子所启动．结果证实真核生物RNA聚合酶能够识别T7启动子,转录外源基因．常用的含有T7启动子的质粒可同时作为原核生物和真核生物的表达载体．     

其它药剂

<正> 855004 从人周围血白细胞(血沉棕黄层)培养基中提纯T淋巴细胞生长因子——白细胞介素-2[英]/Kniep,E.M.…//Eur.J.Biochem.-1984,143(1).-198～205[译自DBA,1984,3(21),84-10066]将含有白细胞介素-2(IL-2)的正常健     

用一个简单快速的RT-PCR技术筛选白细胞介素-6作用相关基因

为了研究白细胞介素-6(IL-6)作用相关基因以及一些可能受IL-6调控的基因,利用一个简单快速的以PCR为基础的方案,检测了IL-6处理和未处理的Sko007细胞中基因表达的差异,克隆并鉴定了差异表达基因的cDNA片段.首先用6-mer寡核苷酸引物进行反转录从而最大限度地将mRNA编码区序列生成cDNA;然后用2或3个较长的随机引物进行PCR扩增,并以不同引物组合重复PCR增扩;扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳分离,回收差异片段并直接用于克隆、测序及进一步分析.在此研究中,获得了3个表达序列标签(EST),其中一个为新的基因片段,反向RNA杂交有力证实了它们与IL-6作用的相关性.进一步的生物信息学分析表明,新基因片段STRF17在多种组织中表达.     

杀菌/通透性增加蛋白基因的克隆及在CH0细胞中的表达

从一名健康中国人外周血白细胞中克隆出杀菌/通透性增加蛋白(BPI)基因,全长1452bp,编码27个氨基酸的信号肽和456个氨基酸成熟蛋白.序列比较发现,此序列与国外发表的序列有6个核苷酸的差异,编码蛋白有4个氨基酸的差异.构建真核表达质粒,在CHO细胞中实现BPI基因的稳定表达.对重组蛋白初步纯化后进行杀菌实验,结果表明重组蛋白具有与天然蛋白同样的生物活性.