| SSH技术筛选β干扰素真核表达载体转染细胞的下调基因 |
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| 作者姓名： | 钟彦伟 成军 曲建慧 张黎颖 郭江 李晓东 |
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| 作者单位： | 1. 解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室,北京,100039
2. 北京地坛医院传染病研究所,北京,100011 |
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| 摘 要： | 筛选β-干扰素质粒转染下调相关基因.以β-干扰素表达质粒pcDNA3.1(-)-IFN β转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将来自pcDNA3.1(-)转染的cDNA分成两组,分别与两种不同的接头adaptor1和adaptor2衔接,再与来自pcDNA3.1(-)-IFNβ转染的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析.成功构建人β-干扰素质粒转染下调相关基因差异表达的cDNA.所获得的50个克隆中,随机挑选37个克隆均含有插入片段,将这些克隆进行序列测定,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得22种编码基因,其中3种为未知功能的基因.筛选到的cDNA序列,包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因.
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| 关 键 词： | β-干扰素 下调 抑制性消减杂交技术(SSH) |
| 文章编号： | 1003-5153(2006)01-0021-03 |
| 修稿时间： | 2005-07-14 |
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