| 准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子的克隆及其活性功能初步检测 |
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| 作者姓名： | 胡文革 郝凤霞 陈创夫 王远志 任艳 |
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| 作者单位： | 1. 石河子大学生命科学学院, 新疆石河子 832003;2. 石河子大学动物科技学院, 新疆石河子 832003;3. 石河子大学医学院, 新疆石河子 832003 ; |
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| 基金项目： | 石河子大学科技发展计划项目 |
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| 摘 要： | 以开发利用新疆濒危鱼类准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)基因资源为研究目的, 利用PCR技术克隆准噶尔雅罗鱼的β-actin 基因, 得到的β-actin 基因片段SZ21包含启动调控区, 大小为2 398 bp。SZ21的启动调控区包括β-actin 基因上游调控序列、第1、第2、第3和第4外显子部分序列。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT框、TATA 框和CArG 框等元件。对启动子序列在线分析表明, 获得的启动子含有E-box、RU49、ZBPF、CEBP、CREB等多个重要转录因子结合位点。用AatⅡ破坏真核表达载体pEGFP-N1-AFPⅢ中的CMV启动子, 将准噶尔雅罗鱼的SZ21启动调控区克隆到载体pEGFP-N1-AFPⅢ(CMV坏)上, 构建成重组表达载体β2 pEGFP-N1-AFPⅢ。脂质体转染BHK-21细胞。结果表明, 克隆的准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子SZ21具有启动EGFP报告基因在哺乳动物细胞中表达的活性。通过BHK-21绿色荧光细胞的传代证实, 克隆的启动子具有持续启动蛋白基因表达的活性, 在细胞传代中可以遗传。PCR检测传代的BHK-21绿色荧光细胞基因组DNA, 均能检测到SZ21目的片段。文章成功分离了具有活性功能的准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子。
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| 关 键 词： | 准噶尔雅罗鱼 β-肌动蛋白启动子 BHK-21细胞 脂质体转染 活性功能 |
| 收稿时间： | 2009-03-27 |
| 修稿时间： | 2009-06-08 |
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