| 丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 成军,施双双,钟彦伟,夏小兵,王刚,王琳,刘妍,陈菊梅.丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达[J].中国病毒学,2001,16(3):220-223. |
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| 作者姓名： | 成军 施双双 钟彦伟 夏小兵 王刚 王琳 刘妍 陈菊梅 |
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| 作者单位： | 解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(39900130) |
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| 摘 要： | 利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体(ScFv)的原核表达载体,并在大肠杆菌JM109中表达可溶性的HCV-E2-ScFv.以重组的HCVE2蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有HCV-E2-ScFv基因的噬菌体克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经Ncol/NotI酶切鉴定后,该ScFv基因由750bp组成,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中,转化大肠杆菌JM109,提取质粒进行DNA序列测定,符合ScFv的基因结构特点.IPTG诱导转化的大肠杆菌JM109,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达.酶联免疫吸附法(ELISA)证实表达的HCV-E2-ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性,对转化的JM109大肠杆菌上清中表述的HCV-E2-ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),证实表达的HCV-E2-ScFv的分子量为28kD.为应用HCV-E2-ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒 包膜蛋白 单链可变区抗体 表达 |
| 文章编号： | 1003-5125(2001)03-0220-04 |
| 修稿时间： | 2000年7月17日 |
Expression of Soluble Human ScFv Against Envelope Protein E2 of Hepatitis C Virus Antigen in E.coli. |
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