| 检测小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技术及其应用 |
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| 引用本文： | 赵婷婷,王会娟,王蕾,谭毅,王胜,张道华,赖国旗.检测小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技术及其应用[J].动物学杂志,2016,51(6):1084-1091. |
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| 作者姓名： | 赵婷婷 王会娟 王蕾 谭毅 王胜 张道华 赖国旗 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学实验动物中心 重庆400016;湖北医药学院基础医学院 十堰442000;2. 重庆医科大学实验动物中心 重庆400016 |
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| 基金项目： | 重庆市科委应用开发项目（No. CSTC2014YYKFA110033） |
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| 摘 要： | 建立一种能对MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59) 4种常见小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)进行分型检测的SNaPshot新方法。根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果,设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物,提取MHV 4种常见毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNaPshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳,根据电泳结果分析毒株基因型。优化SNaPshot分析条件,进行灵敏度、特异性分析。用ELISA法和SNaPshot方法检测41例小鼠(Mus musculus)血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测。当T1~T4引物修饰的poly T的数量分别为0、3、10和15,其浓度比为4︰6︰5︰10,引物大小分别为16 bp、19 bp、26 bp和31 bp时,SNa Phot分型检测MHV c DNA的最低浓度为1.25 mg/L,特异性为100%,与ELISA和T-克隆测序比较,其准确性为100%(41/41),阳性样本均为JHM毒株。实验结果说明,所建立的SNaPshot检测方法能对MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59)进行分型检测,并且具有灵敏、特异、准确的优点。
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| 关 键 词： | 小鼠肝炎病毒 SNaPshot检测 酶联免疫吸附试验 |
| 收稿时间： | 2015/6/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/8/23 0:00:00 |
Typing Mouse Hepatitis Viruses Using SNaPshot Assay |
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| ZHAO Ting-Ting,WANG Hui-Juan,WANG Lei,TAN Yi,WANG Sheng,ZHAO Dao-Hua and LAI Guo-Qi.Typing Mouse Hepatitis Viruses Using SNaPshot Assay[J].Chinese Journal of Zoology,2016,51(6):1084-1091. |
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| Authors: | ZHAO Ting-Ting WANG Hui-Juan WANG Lei TAN Yi WANG Sheng ZHAO Dao-Hua and LAI Guo-Qi |
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| Institution: | Chongqing Medical University,Chongqing Medical University,Chongqing Medical University,Chongqing Medical University,Chongqing Medical University,Chongqing Medical University |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Murine Hepatitis Virus SNaPshot assay Enzyme linked immunosorbent assay |
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