尼罗罗非鱼PKCθ蛋白和Spartin蛋白的 原核表达、抗体制备及其组织表达

为了研究尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）蛋白激酶C theta（PKCθ）和Spartin的蛋白表达情况，本实验在大肠杆菌（Escherichia coli）中表达和提纯了尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin的重组蛋白，并利用日本大耳兔（Oryctolagus cuniculus）制备了相应的多克隆抗体。用间接ELISA技术检测抗体效价，Western Blot鉴定抗体的特异性，并检测其在罗非鱼肝、脾、肠和肌肉组织中的表达情况。结果表明，实验成功构建了原核表达载体pET-B2m-PKCθ和pET-B2m-Spartin，实现了重组蛋白的原核表达和纯化。PKCθ重组蛋白主要存在于包涵体中，分子量约为56 ku；Spartin重组蛋白分子量约为30 ku，以包涵体蛋白的形式存在。获得的多克隆抗体效价均高达1︰512 000，Western Blot检测结果表明，制备的抗体能特异性识别尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin多种异构体；PKCθ蛋白在罗非鱼肝、脾、肠与肌肉组织中均有表达；Spartin蛋白在罗非鱼的肝、脾和肠组织中不表达，在肌肉组织中表达。研究表明，尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin重组蛋白在大肠杆菌中成功表达，获得了高效价的多克隆抗体，并明确了尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin在不同组织中的表达情况，为进一步研究尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin的功能及其作用机制奠定了基础。