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中华大蟾蜍精巢组织全长cDNA文库的构建及泛素延伸蛋白基因Bg-ubi52的获得
引用本文:陈文,郑萍萍,聂刘旺.中华大蟾蜍精巢组织全长cDNA文库的构建及泛素延伸蛋白基因Bg-ubi52的获得[J].动物学杂志,2007,42(1):20-28.
作者姓名:陈文  郑萍萍  聂刘旺
作者单位:安徽师范大学生命科学学院,芜湖,241000
基金项目:国家自然科学基金(No.30640048),生物环境与生态安全安徽省高校重点实验室专项基金,安徽省学术与技术带头人专项基金
摘    要:运用SMART技术构建了中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)精巢全长cDNA文库。提取中华大蟾蜍精巢总RNA,用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得全长cDNA双链;经SfiⅠ酶切、层析柱分离后,500bp以上的片段与λTriplEx2载体连接并包装,建成原始文库。经鉴定,原始文库滴度为2.21×106pfu/ml,重组率为91%;文库扩增后的滴度为2.94×109pfu/ml,重组率为93.7%。插入片段大小分布于0.4~2.0kb之间,平均长度约为1.0kb,说明已构建文库质量较高,为进一步筛选、克隆精巢特异表达基因奠定了基础。从该文库中克隆到了泛素延伸蛋白基因,全长561bp,包含完整的5′和3′非编码区,编码128个氨基酸,即泛素的76个氨基酸后融合了52个氨基酸的核糖体L40蛋白。

关 键 词:中华大蟾蜍  精巢  cDNA文库  SMART技术  泛素延伸蛋白基因
文章编号:0250-3263(2007)01-20-09
修稿时间:2006-08-14

Construction of Testis cDNA Library and Sequence Analysis of Ubiquitin/L40e Extension Gene in Bufo bufo gargarizans
CHEN Wen,ZHENG Ping-Ping,NIE Liu-Wang.Construction of Testis cDNA Library and Sequence Analysis of Ubiquitin/L40e Extension Gene in Bufo bufo gargarizans[J].Chinese Journal of Zoology,2007,42(1):20-28.
Authors:CHEN Wen  ZHENG Ping-Ping  NIE Liu-Wang
Institution:College of Life Sciences, Anhui Normal University, Wuhu Anhui 241000, China
Abstract:
Keywords:Bufo bufo gargarizans  Testis  cDNA library  SMART  Ubiquitin/L40e extension protein gene
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