大熊猫及其近种活化素基因βA亚基成熟肽序列的克隆分析及其在分类地位上的应用

借鉴互联网中已经克隆到的Activin基因βA亚基成熟肽序列，设计并合成1对兼并引物，利用PCR技术从大熊猫，小熊猫，马来熊的基因组DNA中直接扩增目的基因片段，并分别克隆到大肠杆菌载体pBlueScript^ 当中，然后对培养产物进行行序列测定，DNA序列分析表明，三种物种的Activin基因βA亚基成熟肽序列长度均为359bp，无内含子，基因片段编码一个含有119个氨基酸残基的肽段。大熊猫，小熊猫，马来熊在该成熟肽核苷酸和氨基酸序列上表现出高度的同源性，其中核苷酸同源性为93.9%。氨基酸同源性高达99%以上，此外，3种动物的核酸限制性酶切图谱也高度相似，与GenBank中收录的其他物种Activin基因βA亚基成熟肽序列相比较，显示此片段在处于不同进化程度的物种之间仍具有高度保守性，运用系统发育与进化树软件包PHILIP，并结合克隆序列对大熊猫，小熊猫，马来熊进化与分类地位进行了探讨，采用不同的统计学分析方法，所得到的3个物种系统发育进化树的拓扑结构完全一致，相比较而言，大熊猫与马来熊有着较近的亲缘关系，而小熊猫与上述两个物种的亲缘关系相对疏远，结果支持将大熊猫与马来熊归为熊科，而将小熊猫单列成科的学术观点，这是首次以生殖相关的核基因作为研究对象，为大熊猫及其近种进行系统分类研究所提供的又一分子生物学证据。