| 跨膜蛋白基因克隆载体pMBL的构建及验证 |
| |
| 引用本文： | 余旭平,朱军莉,姚学萍,何世成,金俊杰,牛冬,阮辉.跨膜蛋白基因克隆载体pMBL的构建及验证[J].遗传学报,2003,30(8):730-736. |
| |
| 作者姓名： | 余旭平 朱军莉 姚学萍 何世成 金俊杰 牛冬 阮辉 |
| |
| 作者单位： | 浙江大学动物科学学院,杭州,310029 |
| |
| 摘 要： | 自行设计一对引物，从质粒pUC18上扩增一段无启动子和信号肽的β-内酰胺酶基因(△P△SP Amp)，以作为最终构建的载体克隆到带跨膜信号基因片段的报告基因。所设计的上游引物中依次带有分别处于3个不同阅读框架、且形成匹配粘性末端的3个酶切位点BglⅡ、BclI、BamHI，以便最终构建的载体捕获基因时的对位融合和表达。pET-28经BglI、Bst1107I双酶切，去除约2．5kh的lac I等基因的冗余片段，保留Kan抗性基因、复制原点、多克隆位点等结构，并消除BglⅡ位点，获得作为最终构建载体的抗性基因和基本骨架的过渡质粒pKan。△p△SP Amp基因经pGEM-T-EASY载体，克隆到pKan的EcoRI和XbaI间，得到在Kan平板中生长而在Amp和Kan双抗平板中不能生长的转化子pMBL-E质粒；经部分酶切补平自连，筛选得到消除HindⅢ位点端EcoRI位点的质粒，即得到用于跨膜蛋白信号基因片段捕获克隆的目的载体pMBL，大小为3．46kb。经酶切鉴定和测序，证明构建的载体与预期设计的一致。应用四环素抗性基因(Tet)片段对构建的跨膜蛋白基因克隆载体pMBL．的有效性进行了验证，在克隆人EcoRI和BglⅡ双酶切(0位)的载体中，Kan和Amp双抗平板筛选到阳性克隆子，经酶切和测序均显示Tet基因已对位插人，并启动了β-内酰胺酶的表达和跨膜分泌。由此证明：构建的跨膜蛋白克隆载体pMBL能有效捕获含启动子和信号肽序列的跨膜蛋白基因。
|
| 关 键 词： | 细菌 跨膜蛋白编码基因 信号肽 克隆载体 |
| 文章编号： | 0379-4172(2003)08-0730-07 |
| 修稿时间： | 2002年10月31 |
Construction and Verification of the Effectiveness of pMBL: A Cloning Vector of Exported Proteins Encoding Genes |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | bacteria genes encoding exported proteins signal peptide cloning vector |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
