少根根霉△^6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达 |
| |
引用本文: | 张琦,李明春,孙颖,马海庭,任勇,邢来君.少根根霉△^6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达[J].遗传学报,2004,31(7):740-749. |
| |
作者姓名: | 张琦 李明春 孙颖 马海庭 任勇 邢来君 |
| |
摘 要: | 根据真菌△^6-脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行RT-PCR,获得一个593 bp的cDNA片段,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物,通过cDNA末端扩增技术(RACE)获得该cDNA的3’和5’序列,从而得到全长为1482bp的cDNA序列。序列分析结果表明,该序列具有一个长度为1377bp、编码458个氨基酸的开放阅读框,所编码蛋白质的大小为52kD。与报道的△^6-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区和疏水结构,在其氨基酸序列的N-末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区。该序列为一个新的编码△^6-脂肪酸脱氢酶的基因,为了验证其功能,把开放阅读框序列RAD6亚克隆到表达载体pYES2.0,构建重组表达载体pYRAD6,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的酶具有△^6-脂肪酸脱氢酶活性,能将外源性的底物亚油酸转化为γ-亚麻酸,γ-亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的3.85%。
|
关 键 词: | 少根根霉 △^6-脂肪酸脱氢酶 γ-亚麻酸 cDNA末端扩增 酿酒酵母 表达 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |
|