| 少根根霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达 |
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| 引用本文： | 张琦,李明春,孙颖,马海庭,任勇,邢来君.少根根霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达[J].遗传学报,2004,31(7):740-749. |
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| 作者姓名： | 张琦 李明春 孙颖 马海庭 任勇 邢来君 |
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| 作者单位： | 1. 南开大学微生物学系,天津,300071;云南大学微生物研究所,教育部微生物资源开放研究重点实验室,昆明,650091
2. 南开大学微生物学系,天津,300071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No .3 0 2 0 0 176)，天津市自然科学基金 (No .0 13 80 2 5 11)项目~~ |
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| 摘 要： | 根据真菌Δ6 脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行RT PCR ,获得一个 5 93bp的cDNA片段 ,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物 ,通过cDNA末端扩增技术 (RACE)获得该cDNA的 3′和 5′序列 ,从而得到全长为 14 82bp的cDNA序列。序列分析结果表明 ,该序列具有一个长度为 1377bp、编码 4 5 8个氨基酸的开放阅读框 ,所编码蛋白质的大小为 5 2kD。与报道的Δ6 脂肪酸脱氢酶一样 ,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的 3个组氨酸保守区和疏水结构 ,在其氨基酸序列的N 末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区。该序列为一个新的编码Δ6 脂肪酸脱氢酶的基因 ,为了验证其功能 ,把开放阅读框序列RAD6亚克隆到表达载体 pYES2 0 ,构建重组表达载体pYRAD6 ,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱 /质谱 (GC MS)分析表明 ,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的酶具有Δ6 脂肪酸脱氢酶活性 ,能将外源性的底物亚油酸转化为γ 亚麻酸 ,γ 亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的 3 85 %。
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| 关 键 词： | 少根根霉 Δ6-脂肪酸脱氢酶 γ-亚麻酸 cDNA末端扩增 酿酒酵母 表达 |
| 文章编号： | 0379-4172(2004)07-0740-10 |
| 修稿时间： | 2003年9月26日 |
Cloning and Heterologous Expression of a Novel Δ6-Desaturase Gene from Rhizopus arrhizus NK030037 |
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| ZHANG Qi.Cloning and Heterologous Expression of a Novel Δ6-Desaturase Gene from Rhizopus arrhizus NK030037[J].Journal of Genetics and Genomics,2004,31(7):740-749. |
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| Authors: | ZHANG Qi |
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