| 黄瓜LDC克隆、表达载体的构建及烟草转化研究 |
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| 引用本文： | 简 兴,苗永美,隋益虎,边卓吾,陈存款,黄春景,李振兴.黄瓜LDC克隆、表达载体的构建及烟草转化研究[J].广西植物,2015,35(2):255-260. |
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| 作者姓名： | 简 兴 苗永美 隋益虎 边卓吾 陈存款 黄春景 李振兴 |
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| 作者单位： | 1. 安徽科技学院 城建与环境学院,凤阳,233100
2. 安徽科技学院 生命科学学院,凤阳,233100 |
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| 基金项目： | 安徽省科技厅青年基金，安徽省教育厅重点科研计划项目，安徽省大学生创新创业训练计划项目，安徽科技学院第十批大学生创新课题 |
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| 摘 要： | 赖氨酸脱羧酶(LDC)催化赖氨酸脱羧形成尸胺。该研究采用RT-PCR技术从耐冷黄瓜‘Chipper’中分离到一段c DNA序列,利用DNAMAN6.0软件进行氨基酸序列分析,用BLASTp对蛋白的保守序列进行比对,用双酶切法和T4DNA连接酶构建了植物超表达载体p CAMBIA1304-LDC,通过在烟草不定芽诱导和生长培养基中添加不同浓度的潮霉素(Hyg)以确定不定芽分化和生长的筛选压力浓度,同时优化了菌液浓度、侵染时间和预、共培养时间4个农杆菌侵染条件。结果表明:该序列的CDS全长具有648 bp,编码216个氨基酸,BLASTp结果显示该蛋白具有赖氨酸脱羧酶的保守序列,认为分离到的序列为黄瓜LDC基因,在Gen Bank中的登录号是KC202438;当在叶块不定芽诱导培养基中添加10 mg·L-1的Hyg时,芽诱导率明显降低,为5.41%;当芽生长培养基中的Hyg浓度为20 mg·L-1时,芽苗成活率为33.33%,明显低于对照,因此认为10 mg·L-1和20 mg·L-1的Hyg浓度是抗性芽诱导和生长的筛选浓度;农杆菌侵染时,烟草叶盘不需要预培养,农杆菌OD600值为0.6,侵染5 min、共培养4 d时,侵染效果最好,能获得较高的抗性芽分化率。获得的抗性植株移栽成活后,叶片DNA经过PCR鉴定,获得了29株转化植株,转化率达93.55%。转化植株的获得为下一步基因功能分析提供了材料。
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| 关 键 词： | 黄瓜 赖氨酸脱羧酶 烟草 遗传转化 |
Cloning and expression vector construction of cucumber
LDC and transformation to tabacco |
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| JIAN Xing,MIAO Yong-Mei,SUI Yi-Hu,BIAN Zhuo-Wu,CHEN Cun-Kuan,HUANG Chun-Jing,LI Zhen-Xing.Cloning and expression vector construction of cucumber
LDC and transformation to tabacco[J].Guihaia,2015,35(2):255-260. |
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| Authors: | JIAN Xing MIAO Yong-Mei SUI Yi-Hu BIAN Zhuo-Wu CHEN Cun-Kuan HUANG Chun-Jing LI Zhen-Xing |
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| Institution: | 1. College of Urban Construction and Environment, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100,
China; 2. College of Life Sciences, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cucumber lysine decarboxylase tabacco genetic transformation |
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