| 葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立 |
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| 引用本文： | 舒小娟,温腾建,邢佳毅,卢 龙,胡建芳.葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立[J].西北植物学报,2015,35(6):1262-1268. |
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| 作者姓名： | 舒小娟 温腾建 邢佳毅 卢 龙 胡建芳 |
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| 作者单位： | (中国农业大学 农学与生物技术学院,北京 100193) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31471842) |
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| 摘 要： | 为了建立葡萄原生质体进行遗传转化的技术,该研究以葡萄品种‘黑香蕉’的叶片和愈伤组织为材料,分析纤维素酶和离析酶的浓度与配比、渗透压和酶解时间等主要因素对葡萄原生质体分离的影响,探讨建立稳定、高效的葡萄原生质体分离与瞬时转化体系,为鉴定目标基因的功能奠定基础。结果表明:(1)葡萄叶片原生质体的分离以3.0%纤维素酶和0.75%离析酶的酶组合,在0.6mol/L甘露醇溶液中,酶解14h为宜,每克游离产量为4.09×106个原生质体,活力为83.12%。(2)葡萄愈伤组织原生质体的分离以2.0%纤维素酶和0.5%离析酶的酶组合,在0.5mol/L甘露醇溶液中,酶解14h为宜,每克游离产量为6.05×106个原生质体,活力为84.13%。(3)利用该方法得到的葡萄原生质体为受体,采用40%PEG-4000介导转化质粒载体pEZS-NL,目标基因瞬时表达产物检测表明,GFP蛋白表达稳定、清晰。该研究建立的葡萄原生质体制备和转化体系,可以用较少量的质粒DNA获得外源基因在原生质体内的表达,为葡萄功能基因的研究提供技术支持。
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| 关 键 词： | 葡萄 原生质体 叶片 愈伤组织 遗传转化 瞬时表达 |
Isolation of Protoplast and Establishment of Transient Expression System in Grapevine (Vitis vinifera L.) |
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| SHU Xiaojuan,WEN Tengjian,XING Jiayi,LU Long,HU Jianfang.Isolation of Protoplast and Establishment of Transient Expression System in Grapevine (Vitis vinifera L.)[J].Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica,2015,35(6):1262-1268. |
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| Authors: | SHU Xiaojuan WEN Tengjian XING Jiayi LU Long HU Jianfang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | grapevine protoplast leaf callus genetic transformation transient expression |
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