百脉根Rac1蛋白多克隆抗体的制备与应用

Rop基因在豆科植物与根瘤菌共生互作过程中发挥重要作用。该研究以模式豆科植物百脉根根系cDNA为模板，扩增得到百脉根的1个Rop基因（Rac1），将其连接到原核表达载体pET28a，转化获得Rac1基因的大肠杆菌BL21（DE3）工程菌。优化Rac1蛋白诱导表达条件，亲和吸附法纯化蛋白，制备Rac1多克隆抗体，并应用该抗体检测Rac1过表达转基因植株中Rac1蛋白的表达水平。结果显示：（1）经双酶切和测序鉴定，成功构建pET28a Rac1原核表达载体。（2）Rac1蛋白的最佳诱导表达条件为：IPTG浓度0.1 mmol/L、温度20 ℃、时间6 h，重组蛋白以可溶形式高效表达；纯化的Rac1蛋白经SDS PAGE检测，目的条带大小为25 kD左右，且条带清晰、单一无杂带。（3）Western blotting显示，制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原，且效价较高。（4）通过农杆菌介导的毛根转化法获得Rac1过表达植株的阳性毛根，提取阳性毛根总蛋白，Western blotting分析显示过表达植株中Rac1蛋白表达量显著高于空载体对照，从翻译水平证实过表达载体构建的有效性。该研究制备的Rac1多克隆抗体能够高效特异地检测来源于百脉根体内的Rac1蛋白，这将为进一步开展Rac1在共生信号转导途径中的生物学功能研究提供有利工具。

Polyclonal Antibody Preparation and Application of Lotus japonicus Rac1 Protein