地涌金莲MlCCD8b基因的克隆与表达分析

该研究以地涌金莲(黄色苞片型YN01和红色苞片型RD05)为材料，采用RACE技术克隆获得地涌金莲CCD8b基因的cDNA全长，进行氨基酸序列比对及系统进化树构建，并采用实时荧光定量PCR技术检测MlCCD8b基因在不同地涌金莲类型和不同组织中的表达模式。结果表明：(1)序列分析显示，MlCCD8b的ORF全长1 671 bp，编码556个氨基酸，存在1个类胡萝卜素加氧酶家族的典型保守结构域RPE65，推测其相对分子量为61 574.26 Da，等电点6.61，亚细胞定位于叶绿体基质中的类囊体上，所编码的MlCCD8b蛋白为亲水性蛋白。(2)同源对比分析及构建系统进化树发现，地涌金莲MlCCD8b蛋白与小果野蕉亚种、凤梨等单子叶植物的CCD8b蛋白遗传关系最近。(3)荧光定量PCR检测结果表明，MlCCD8b在吸芽数量多的黄色苞片型YN01的所有组织中均有表达，而在吸芽数量少的红色苞片型RD05中，其苞片内未能检测到MlCCD8b的表达，但其他组织中皆有表达；MlCCD8b在2种类型地涌金莲中呈现一致的组织表达特异性，即在花序轴中的表达量最高，其次是吸芽芽点、根尖和叶片，在苞片中的表达量最低或不表达。(4)2种类型地涌金莲同一组织部位比较结果显示，RD05的花序轴、吸芽芽点、根尖和叶片中的MlCCD8b相对表达量分别是YN01的4.47、4.67、2.09和1.10倍。(5)利用高效液相色谱 串联质谱法测得RD05根尖部位的5 脱氧独脚金醇含量是YN01的15.57倍，与MlCCD8b在根尖的表达趋势一致。研究认为，MlCCD8b基因可能通过调控独角金内酯的合成，促进或抑制地涌金莲吸芽的萌生。该研究结果可为MlCCD8b基因的生物学功能研究提供依据，并为今后通过分子辅助育种调控MlCCD8b的表达，从而控制地涌金莲吸芽数量提供理论支持。

Cloning and Expression Analysis of MlCCD8b in Musella lasiocarpa