番茄转录因子基因SlWRKY6的克隆与原核表达分析

该研究基于番茄基因组数据库SGN(Sol Genomic Network)信息，利用RT PCR从栽培番茄‘M82’(Solanum lycopersicum)中成功克隆到番茄SlWRKY6基因(登录号：Solyc02g080890)，通过qRT PCR方法和原核表达初步验证其生物学功能。结果表明：(1)生物信息学分析显示，番茄SlWRKY6基因ORF全长1 653 bp，编码550个氨基酸，其蛋白结构含有1个WRKYGQK保守结构域和C₂H₂锌指结构域，属于IIb类；其基因启动子上游1 500 bp含有多个激素响应元件和非生物胁迫响应元件。(2)进化树分析显示，SlWRKY6与潘那利番茄SpWRKY31 X1(NP_001352691.1)的相似性最高，且定位于细胞核内。(3)qRT PCR结果显示，SlWRKY6基因在番茄根、茎、叶中均有表达，在叶中的表达量最高，且受盐和干旱诱导表达。(4)SDS PAGE及Western blot结果显示，pET 30a SlWRKY6重组蛋白的大小约66 kDa，与预期大小一致。(5)原核表达分析显示，重组菌E. coli BL21∷pET 30a SlWRKY6在不同浓度盐(NaCl)和干旱(Mannitol)胁迫下生长速度显著低于对照菌E. coli BL21∷pET 30a，且在400 mmol/L NaCl、800 mmol/L甘露醇胁迫条件下最为显著；滴板实验初步验证SlWRKY6转录因子能提高重组菌E. coli BL21∷pET 30a SlWRKY6在ABA和pH 9(NaOH)胁迫的耐受性；在400 mmol/L NaCl、pH 5(HCl)、800 mmol/L甘露醇胁迫条件下耐受能力降低。研究表明，SlWRKY6转录因子可能通过参与ABA途径来响应非生物胁迫。