油菜AP2/ERF-B4类转录因子克隆及表达载体的构建 |
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引用本文: | 庄静,熊爱生,乔玉山,章镇,姚泉洪.油菜AP2/ERF-B4类转录因子克隆及表达载体的构建[J].西北植物学报,2008,28(8). |
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作者姓名: | 庄静 熊爱生 乔玉山 章镇 姚泉洪 |
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作者单位: | 1. 南京农业大学,园艺学院,南京,210095;上海市农业科学院,生物技术研究所,上海,201106 2. 南京农业大学,园艺学院,南京,210095 3. 上海市农业科学院,生物技术研究所,上海,201106 |
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基金项目: | 863项目
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上海市青年科技启明星跟踪计划 |
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摘 要: | 利用油菜UniGene数据库,以拟南芥转录因子保守序列为探针,通过电子克隆方法分离得到一个UniGene库Bna.17538,进一步序列拼接得到一个油菜AP2/ERF-B4亚族的转录因子BnaERFB4-1,长度为672 bp,并进行了相关的生物信息学分析.结果显示BnaERFB4-1是亲水性蛋白,蛋白质三级结构与拟南芥RAP2.6L非常相似,蛋白质无序化程度大于拟南芥RAP2.6L.设计引物通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型油菜沪油15幼苗的DNA和cDNA中分离了BnaERFB4-1基因,命名为BnaERFB4-1-Hy15.序列测定和分析显示,来源于沪油15的BnaERFB4-1-Hy15基因与电子克隆的基因序列差异很小,有3个氨基酸位点不同,存在一个内含子.将BnaERFB4-1-Hy15基因通过BamHⅠ和SacⅠ酶切后分别插入酵母表达载体YK3302和植物双元表达载体pYF1404的相应位置,构建了BnaERFB4-1-Hy15基因的酵母体内结合和植物转化载体,为深入研究该基因在油菜抗逆调控中的作用奠定了基础.
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关 键 词: | 转录因子 AP2/ERF-B4亚族 RT-PCR 生物信息学 甘蓝型油菜 沪油15 |
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