长穗偃麦草EeSKOR启动子的克隆及功能分析

为了研究外整流钾通道蛋白(stelar K⁺ outward rectifier channels，SKOR)基因SKOR在长穗偃麦草中的功能，利用热不对称交错PCR(Tail PCR)技术，克隆了长穗偃麦草EeSKOR启动子，并进行启动子顺式作用元件及基因表达分析。结果表明：(1)成功获得长穗偃麦草EeSKOR基因起始密码子上游798 bp启动子序列，命名为pEeSKOR。 (2)EeSKOR启动子除必须具备的核心启动元件外，还含有特异转录因子结合位点、植物激素响应元件、光响应元件、组织特异的启动元件和胁迫响应元件。(3)成功构建植物表达载体pEeSKOR∷GUS，经农杆菌介导的瞬时转化，EeSKOR启动子驱动GUS报告基因可在拟南芥的叶、叶柄和根中表达。(4)实时定量PCR检测显示，在NaCl、PEG、ABA和SA处理下长穗偃麦草EeSKOR基因在根中呈现不同的表达模式，NaCl处理下EeSKOR的表达量呈先下调后上调趋势；PEG处理下EeSKOR的表达量呈上调趋势，且随着时间的延长显著上调；ABA处理下EeSKOR的表达受到抑制且随处理时间延长呈显著下调趋势；SA处理下EeSKOR表现出先上调后下调趋势，且在处理72 h时表达量显著低于正常表达水平。研究认为，EeSKOR基因的表达受NaCl、PEG、ABA和SA的诱导调节。该研究结果为进一步系统研究长穗偃麦草EeSKOR基因功能提供重要理论依据。

Cloning and Functional Analysis of the EeSKOR Promoter of Elytrigia elongata