‘沙糖橘’S蛋白同源基因CrSPH的克隆与表达分析

柑橘自交不亲和由S位点基因控制，前期SSH文库中筛选出1个自交不亲和相关的S蛋白同源基因(S-protein homologous gene,SPH),但其功能尚不明确。研究以‘无籽沙糖橘’和‘沙糖橘’为材料，利用反转录PCR技术克隆CrSPH基因，通过qPCR技术分析该基因表达特性，并进行原核表达和花粉萌发实验。结果表明，(1)CrSPH的CDS长度为417 bp,编码138个氨基酸，两材料间的CDS区存在3个碱基替换，引起2个氨基酸突变。(2)Southern杂交实验表明，CrSPH基因在两材料基因组中均以单拷贝形式存在。(3)qPCR实验表明，CrSPH基因在‘沙糖橘’花器官不同部位表达差异显著，子房中表达量最大，花瓣、花丝等组织中表达量均较低；在高表达的子房中，‘沙糖橘’表达量是‘无籽沙糖橘’的16倍，表明CrSPH基因在‘沙糖橘’中具有高度的组织表达特异性。(4)CrSPH基因在异交授粉第6,7天表达量最高，与其他时段差异均达到显著水平，第6天表达量是第1天表达量的12.4倍。(5)原核表达实验成功诱导出CrSPH蛋白，离体花粉萌发实验表明，随着异源‘无籽沙糖橘’CrSPH蛋...