| 茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 史成颖,李正国,徐 乾,李海婧,汤之近,邓威威,宛晓春.茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析[J].西北植物学报,2017,37(1):40-47. |
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| 作者姓名： | 史成颖 李正国 徐 乾 李海婧 汤之近 邓威威 宛晓春 |
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| 作者单位： | (安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室，合肥 230036) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31170283, 31300576） |
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| 摘 要： | 在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
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| 关 键 词： | 茶树 谷氨酰胺 茶氨酸 基因克隆 原核表达 酵母表达 酶活性 |
Clone and Expression of GS Homologue of Tea Plant (Camellia sinensis) |
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| SHI Chengying,LI Zhengguo,XU Qian,LI Haijing,TANG Zhijin,DENG Weiwei,WAN Xiaochun.Clone and Expression of GS Homologue of Tea Plant (Camellia sinensis)[J].Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica,2017,37(1):40-47. |
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| Authors: | SHI Chengying LI Zhengguo XU Qian LI Haijing TANG Zhijin DENG Weiwei WAN Xiaochun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tea plant glutamine theanine gene clone prokaryotic expression yeast expression enzyma tic activity |
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