| 小球藻NADP-谷氨酸脱氢酶的cDNA克隆及转基因烟草分析 |
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| 引用本文： | 黄国存,孟颂东,王荣,杨怀义,田波.小球藻NADP-谷氨酸脱氢酶的cDNA克隆及转基因烟草分析[J].Journal of Integrative Plant Biology,2002,44(3). |
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| 作者姓名： | 黄国存 孟颂东 王荣 杨怀义 田波 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,北京,100080 |
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| 摘 要： | 用RT-PCR方法从小球藻(Chlorella sorokiniana)中克隆了铵诱导表达的以辅酶Ⅱ为辅基的谷氨酸脱氢酶(NADP-GDH)基因的cDNA片段,DNA测序分析表明与已报道的该基因c DNA序列同源性为94%.将NADP-GDH基因先插入到SPDK621质粒的2CaMV35S启动子和Ω增强序列之后,然后将2CaMV35S-Ω-GDH-NOS表达单元构建到RokⅡ质粒的HindⅢ与Eco RⅠ之间,从而获得高效植物表达载体.将RokⅡ-GDH质粒转移到根癌土壤杆菌(Agro bacterium tumefaciens (Smith et Townsend) Conn) EHA105中,对烟草(Nico tiana tabacum L.)进行转化并得到阳性转化后代.对转基因烟草分析表明,在低氮培养基或在低氮蛭石中其生长速度和叶片数明显高于对照;铵毒性实验表明,无论在低铵或高铵条件下,接种在MS固化培养基上的转基因绿叶圆片存活时间长,叶绿素含量高.这些结果说明外源NADP-GDH增强了植物对氮素的吸收和利用.另外,转化后代还表现了对除草剂膦化麦黄酮(PPT)具有较强的抗性;培养在含有不同浓度PPT的MS固化培养基上的转基因绿叶圆片,其愈伤化程度明显高于对照;在MS培养基中用0.5 μg/mL 的PPT可以代替卡那霉素对转化后代进行筛选,这暗示 NADP-GDH基因可以作为一种新的选择标记用于植物基因工程的研究.
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| 关 键 词： | 谷氨酸脱氢酶 转基因烟草 氮素吸收 膦化 麦黄酮抗性 |
Cloning of Glutamate Dehydrogenase cDNA from Chlorella sorokiniana and Analysis of Transgenic Tobacco Plants |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-s pecific glutamate dehydrogenase (NADP-GDH) transgenic tobacco ammonium absorpt ion phosphinothricin resistance |
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