| 小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建 |
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| 引用本文： | 胡赞民,王槐,石锐,党本元,胡军,尹维波,陈宇红,姜淑梅,陈正华.小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建[J].Journal of Integrative Plant Biology,2004,46(11). |
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| 作者姓名： | 胡赞民 王槐 石锐 党本元 胡军 尹维波 陈宇红 姜淑梅 陈正华 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，中国科学院知识创新工程项目，国家转基因植物研究和产业化专项基金 |
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| 摘 要： | 用Nd:YAG激光微束将处于丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L.)6B染色体微切割为四段,并用微细玻璃针将每个片段分别回收.将分离的染色体片段DNA用Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增.Southem杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组.用一系列(42对引物)位于6B染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证.结果表明,获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体.将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGET-vector中,建立了4个染色体特定区域的基因组文库,命名为R1、R2、R3和R4,分别包含2.1×105、2.74×105和2.93×105个重组子克隆.每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证.结果显示;插入片段大小在300～1800之间,平均大小为820～870bp,其中43%～48%的克隆为低/单拷贝序列,42%～47%为中/高拷贝序列.本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础.
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| 关 键 词： | 小麦 染色体徽切割 染色体特定区域DNA文库 |
Microdissection and Construction of Region-specific DNA Libraries of Wheat Chromosome 6B |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LA-PCR wheat chromosome microdissection LA-PCR chromosome region-specific DNA library |
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