| 拟南芥PKA催化亚基基因的克隆、原核表达及其催化活性的鉴定 |
| |
| 引用本文： | 刘璞,陈珈,张会霞,王学臣.拟南芥PKA催化亚基基因的克隆、原核表达及其催化活性的鉴定[J].Journal of Integrative Plant Biology,2003,45(4). |
| |
| 作者姓名： | 刘璞 陈珈 张会霞 王学臣 |
| |
| 作者单位： | 中国农业大学生物学院植物生理生化国家重点实验室,北京,100094 |
| |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)，国家攀登计划，国家自然科学基金 |
| |
| 摘 要： | 蛋白质的磷酸化与脱磷酸化是生物体内存在的一种普遍的调节方式,几乎参与所有的生命活动过程.利用Blast 2.0分析拟南芥基因组序列发现存在一个与动物蛋白激酶cDNA同源性的序列,在GenBank中比较发现它与动物的依赖cAMP的蛋白激酶(PKA)的催化亚基(C亚基)有相似的特征序列.提取拟南芥(Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.)的总RNA,通过RT-PCR克隆得到这一cDNA片段,经序列测定证实它具有完整的阅读框架,将其克隆至pET30a原核表达载体,结果表明在大肠杆菌(E. coli) BL21 (DE3)中该表达质粒在IPTG诱导下表达产生大量带寡聚组氨酸标记的重组蛋白, 该蛋白在37 ℃表达时主要以包含体形式存在, 而在22 ℃表达时主要以可溶性蛋白形式存在.经过与组氨酸结合金属螯合树脂亲和柱层析纯化后, 得到纯化的目的蛋白, 其纯度达到87%以上.活性鉴定表明其具有依赖于cAMP的蛋白激酶活性,而加入PKA的抑制剂(H-8)后,其活性显著下降.从而证实它确实是拟南芥的PKA催化亚基.Western blot结果显示它几乎不受ABA、NaCl等逆境的诱导.
|
| 关 键 词： | cAMP依赖蛋白激酶 融合表达 活性测定 |
Gene Cloning and Expression of PKA Catalytic Subunit and Its Activity in Arabidopsis thaliana |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | cAMP-dependent protein kinase fusion expression activity assay |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
