一种检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法北大核心CSCD |
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引用本文: | 魏迪,高敬,池振奋,张癸荣,聂凌云.一种检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法北大核心CSCD[J].生物技术通报,2015(12):81-90. |
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作者姓名: | 魏迪 高敬 池振奋 张癸荣 聂凌云 |
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作者单位: | 1.河北北方学院075000;2.中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所100071;3.中国科学院北京基因组研究所100101; |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(31371346) |
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摘 要: | 旨在建立一种简便检测线粒体DNA(mt DNA)核酸酶靶向剪切活性的方法。利用转基因技术,将一段含有两个靶向目标序列(T1、T2)的线粒体DNA序列随机整合到宿主基因组中,通过实时荧光定量PCR筛选单拷贝或低拷贝的单克隆转基因细胞株。将含有T1、T2的CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9质粒分别瞬时转染到所选细胞株中,靶向剪切核基因组,在靶向目标序列处造成DNA双链断裂,引发非同源末端连接修复机制,引入插入或缺失突变。观察测序峰图,证明两个靶向目标序列T1、T2均有剪切效率,且T1高于T2。建立了一种高效快速检测线粒体核酸酶靶向剪切活性的新方法。
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关 键 词: | 线粒体核酸酶 转基因细胞株 靶向修饰 CRISPR/Cas9 实时荧光定量PCR |
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