类球红菌自诱导物合成酶基因cerⅠ的克隆及其原核表达

根据类球红菌（Rhodobacter sphaeroides2.4.1）自诱导物合成酶基因cerⅠ的序列,设计并合成了1对特异性引物,在引物的5′和3′分别加入含有HindⅢ和XhoⅠ限制性酶切位点的序列,以类球红细菌Rhodobactersphaeroides基因组为模板扩增了cerⅠ基因序列。将PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α。鉴定成功获得目的片段,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切后与载体pET-28a（＋）连接,构建原核表达质粒pET-28a（＋）-cerⅠ,并将其转化宿主菌BL21（DE3）,用IPTG诱导其表达。SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-28a（＋）-cerⅠ可成功地在大肠杆菌中表达cerⅠ蛋白。