自诱导系统在酶促合成2’-脱氧胞苷中的应用 |
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引用本文: | 王玺,段胜林,熊舒莉,郑桂兰,张贵友,王洪钟.自诱导系统在酶促合成2’-脱氧胞苷中的应用[J].生物技术通报,2014(11). |
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作者姓名: | 王玺 段胜林 熊舒莉 郑桂兰 张贵友 王洪钟 |
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作者单位: | 1. 清华大学生命科学学院,北京,100084 2. 中国食品发酵工业研究院,北京,100015 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目,国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金项目 |
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摘 要: | 旨在高效合成2’-脱氧胞苷(d Cyd)。DCyd作为一类重要的药物中间体,能够用于合成吉西他滨(d Fd C)、扎西他滨(dd C)等多种抗病毒或抗肿瘤的药物。采用ZYM-Fe-5052自诱导培养基对含有N-脱氧核糖转移酶II(NDT)的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导,所得完整菌体直接用于催化合成d Cyd。结果表明,自诱导系统不仅无需额外添加诱导剂,还能够达到较高的菌体密度,且与LB诱导系统所得菌体在合成d Cyd方面具有同样高效的催化活性。2’-脱氧胸苷(d Thd)和胞嘧啶的浓度比为1∶3时,产物转化率可高达86.5%。合成d Cyd的最适反应条件为:2’-脱氧胸苷(d Thd)和胞嘧啶的浓度比为1∶1.5,p H6.5的磷酸缓冲液,1 mg/m L的菌体量,终体系10 m L,30℃条件下反应1 h,产物转化率可达71.9%。此方法还可用于制备其他核苷类似物,具有广泛的适用性和应用前景。
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关 键 词: | 生物催化 N-脱氧核糖转移酶 2’-脱氧胞苷 自诱导系统 核苷类似物 |
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