| 人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化 |
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| 引用本文： | 陶俊,向军俭,王宏,龚义平,邓宁.人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化[J].生物技术通报,2010(11). |
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| 作者姓名： | 陶俊 向军俭 王宏 龚义平 邓宁 |
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| 作者单位： | 暨南大学生命科学技术学院,抗体工程中心,广州,510632 |
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| 基金项目： | 国家科技计划"863"专题课题 |
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| 摘 要： | 以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD的比例,加入氯喹的浓度,转染后的孵育时间,最佳的低温培养温度以及加入组蛋白抑制剂的浓度进行了优化。结果显示,FuGene HD的转染效率最高,达到56.7%。当转染的DNA=2μg/4×106细胞时,DNA∶FuGene HD的最佳比例为1∶4(W/V);加入氯喹能够增强FuGene HD的转染效率,最佳浓度为100μmol/L,转染后的最佳孵育时间为6h;低温诱导能够提高293T细胞表达抗体的能力,最佳的温度为33℃;加入组蛋白抑制剂丁酸钠或丙戊酸能够明显提高抗体的表达量,丙戊酸的效果优于丁酸钠。通过对转染试剂,转染方法,培养温度,组蛋白抑制剂的加入等条件进行优化使人源性抗bFGF抗体的表达量从1.5mg/L提高到了15.1mg/L。
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| 关 键 词： | 人源性抗体 瞬时表达 优化 |
Optimization of Human Antibody Gene Transient Expression in HEK293T Cell |
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| Tao Jun,Xiang Junjian,Wang Hong,Gong Yiping,Deng Ning.Optimization of Human Antibody Gene Transient Expression in HEK293T Cell[J].Biotechnology Bulletin,2010(11). |
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| Authors: | Tao Jun Xiang Junjian Wang Hong Gong Yiping Deng Ning |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HEK293T |
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