基于rhaSR嵌合操纵子的穿梭表达载体及其在鱼腥藻细胞中表达的初步研究

通过PCR等基因重组技术，以pKT-215（起源于RSF1010）为载体，构建了带有PR序列（含rhaSR操纵子表达调控元件、rhaR基因、报告基因gst的嵌合操纵子）和PT序列（含rhaSR操纵子表达调控元件及rhaT基因）的二种穿梭表达载体pKT～PTR、pKT—PR。其中，在RhaR基因上游设计和插入了增强的SD序列。首先将pKT—PTR、pKT—PR分别转化入大肠杆菌BL21（DE3）中，在不同培养基条件下，即舍鼠李糖与不含鼠李糖的培养基中进行表达，紫外分光光度计测定GST蛋白（谷胱甘肽-S-转移酶）的活性。结果表明，含嵌合操纵子的穿梭表达载体能在L-鼠李糖的诱导下表达，gst基因的表达量诱导备件下比非诱导条件下高3倍左右，且表达载体上的thaT基因并不能提高gst的表达；其次，利用三亲结合的方法将2种表迭质粒转入鱼腥藻Annbaena sp．PCC 7120中，抗生素筛选后得到能稳定遗传的转基因藻，并以转基因藻的质粒DNA为模板进行PCR检测。最后，转基因藻GST酶活力分析结果表明，嵌合操纵子PR在蓝藻细胞中的诱导表达效率极低，表达条件还需进一步优化。尝试将诱导型的操纵子转入蓝藻，具有潜在的应用价值。

Shuttle Expression Vectors Based on rhaSR Chimeric Operon and Expression in Anabaena sp.PCC 7120